酸性纤维素酶对壳聚糖的降解作用研究

为确定特定酸性纤维素酶在降解壳聚糖制备壳寡糖的应用潜力,根据不同作用条件下壳聚糖的水解率,考察该纤维素酶降解壳聚糖的基本条件,具体结果为酶解温度50℃、pH 5.0、酶解时间4 h、纤维素酶用量为0.7 mL。在确定的最佳酶解条件下,考察了酶解过程中壳聚糖溶液粘度的变化,同时通过有机溶剂分级沉淀法,对纤维素酶降解壳聚糖的最终产物进行分析,发现最终产物中聚合度(DP)<8和8相似文献   

节杆菌Arthrobacter sp.XW-02酶解产物壳寡糖性质的研究

[目的]研究节杆菌Arthrobacter sp.XW-02发酵酶解产物壳寡糖的生理活性。[方法]采用端基法测定壳寡糖的平均聚合度和分子量,采用分光光度法测定壳寡糖的抑菌活性,采用种子水培法测定壳寡糖的促水稻生长情况。[结果]酶解10、20、30min壳寡糖平均聚合度分别为5.40、2.66和1.70,平均分子量分别为870.16、446.25和292.04;壳寡糖对多种细菌和酵母类真菌有明显的抑制作用,但对水稻纹枯病菌的抑制作用不明显,抑菌效果随着壳寡糖作用浓度的增加而增强;低浓度的酶解产物对水稻幼苗的生长有促进作用,高浓度的酶解产物对水稻幼苗生长有抑制作用,酶解产物浓度和水稻幼苗根的生长相关性不明显。[结论]节杆菌Arthrobacter sp.XW-02发酵酶解产物壳寡糖可以进一步开发为植物生长促进剂和病害生物防治剂。     

微生物壳聚糖酶的研究及其降解产物壳寡糖在食品领域的应用

介绍了壳聚糖酶的来源、分类及其理化性质,总结了国内外产壳聚糖酶菌株的研究进展,并对其降解产物壳寡糖的生理功能和在食品领域中的应用进行了概述。     

壳聚糖酶高产菌的筛选、鉴定与发酵产酶初探

壳聚糖酶(EC3.2.1.132)能催化壳聚糖分子中β-1,4-糖苷键的水解,以获得具有特殊生理活性的壳聚寡糖(聚氨基葡萄糖,聚合度2-10)。该酶在细菌、真菌等多种微生物中存在。采用透明圈法,以壳聚糖为唯一碳源,从11份虾蟹壳堆积的土壤中分离出51株能降解壳聚糖的菌株。经平板初筛、摇瓶发酵复筛以及产酶动力学研究,确定H2为产壳聚酶活力高、发酵时间短的优良菌株。根据其形态及培养特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析,鉴定该菌株为浅玫瑰色链霉菌,并命名为(Streptomyces roseolus DH)。进一步的基本发酵条件研究显示:该菌株发酵最适温度为30℃,发酵液初始pH为7.2,最适碳源为1%胶体壳聚糖,最适氮源为0.5%蛋白胨。此条件下经60 h发酵,发酵液中壳聚糖酶活力可达(6.10±0.12)U/mL。此菌株产酶量高,发酵周期短,具有良好的应用潜力。     

脱乙酰几丁质酶降解产物的纸层析分析

对本实验室筛选保存的几株产脱乙酰几丁质酶菌株的产酶条件,如pH值、氮源和金属离子进行初步研究,结果表明,其酶作用最适pH范围为5.0～6.0,氮源及Cu2 、Co2 和Mn2 对脱乙酰几丁质酶有不同程度的促进作用,Zn2 对脱乙酰几丁质酶有较强的抑制作用。用纸层析测定这些菌株在不同产酶条件下发酵产物中壳寡糖的含量和成分,根据产物情况推测酶作用方式,表明不同条件下得到壳寡糖有所变化。     

壳聚糖酶高产菌的筛选、鉴定与发酵产酶初探

壳聚糖酶(EC3.2.1.132)能催化壳聚糖分子中β1,4糖苷键的水解,以获得具有特殊生理活性的壳聚寡糖(聚氨基葡萄糖,聚合度2-10)。该酶在细菌、真菌等多种微生物中存在。采用透明圈法,以壳聚糖为唯一碳源,从11份虾蟹壳堆积的土壤中分离出51株能降解壳聚糖的菌株。经平板初筛、摇瓶发酵复筛以及产酶动力学研究,确定H₂为产壳聚酶活力高、发酵时间短的优良菌株。根据其形态及培养特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析,鉴定该菌株为浅玫瑰色链霉菌,并命名为(Streptomyces roseolus DH)。进一步的基本发酵条件研究显示：该菌株发酵最适温度为30 ℃,发酵液初始pH为7.2,最适碳源为1%胶体壳聚糖,最适氮源为0.5%蛋白胨。此条件下经60 h发酵,发酵液中壳聚糖酶活力可达(6.10±0.12) U/mL。此菌株产酶量高,发酵周期短,具有良好的应用潜力。     

球毛壳菌ACCC30566木聚糖酶生产低聚木糖的研究

利用玉米芯生产粗木聚糖,再用球毛壳菌 ACCC30566木聚糖酶液酶解粗木聚糖,获得低聚木糖,最后对低聚木糖进行提取纯化,并用薄层层析法初步测定了低聚木糖成分.结果表明:球毛壳菌ACCC30566木聚糖酶酶解产物主要成分为木二糖、木三糖、木四糖等低聚木糖,葡萄糖含量较少.该菌株所产木聚糖酶成分较纯,纤维素酶含量较低.可以用来生产低聚木糖.     

壳寡糖对番茄灰霉病菌的抑制作用

研究了壳寡糖对番茄灰霉病菌的抑制作用,分别测定在不同浓度梯度下灰霉病菌的菌落直径、产孢量、孢子萌发率,观察了壳寡糖对菌丝生长形态的影响。结果表明,壳寡糖的浓度越大对灰霉病菌的抑制作用越明显,1 500 mg/L的壳寡糖对菌丝生长的抑制率1 d时为100%,2 d为86.32%,5 d为81.95%,菌丝形态发生显著变化,菌丝直径明显增粗,菌隔增多,该浓度下对灰霉病菌的产孢抑制率达到83.82%,抑制孢子萌发率达52.97%。壳寡糖对灰霉病菌菌丝生长2 d的EC50为346.96 mg/L,对灰霉病菌产孢的EC50为521.96 mg/L,对孢子萌发的EC50为1 451.59 mg/L。     

聚合度4～6壳寡糖的制备及其活性研究

制备高活性壳寡糖并对其生物活性进行研究。采用专一性壳聚糖酶酶解壳聚糖制备壳寡糖,乙酰丙酮法测定壳寡糖的数均分子量,用不同剂量壳寡糖灌喂小鼠,探讨壳寡糖对小鼠免疫功能的影响以及对小鼠肝脏的保护作用。结果表明,所得壳寡糖的数均分子量为1 246.38,聚合度为4~6;该壳寡糖对小鼠免疫器官具有明显的保护和促进生长作用,显著提高了小鼠的抗疲劳能力以及抗菌活力,对小鼠肝脏具有显著的保护作用。可见,专一性壳聚糖酶酶解所得聚合度4~6的壳寡糖具有较高的生物活性,壳寡糖在保健食品开发及医药等领域的应用前景广阔。     

一株产紫杉醇的南方红豆杉内生菌的分离与鉴定

以南方红豆杉植株为材料,采用组织块法从中开展内生菌的分离筛选,并借助薄层层析和高效液相色谱对内生菌的发酵产物进行分析,最终获得1株具有产紫杉醇能力的内生菌。根据菌株形态学观察以及18S rRNA序列分析,结果表明该菌株属于间座壳属(Diaporthe sp.),间座壳属内生菌产紫杉醇尚属首次报道。     

高产壳聚糖酶菌株的筛选及诱变育种

目的]研究利用紫外线和硫酸二乙酯（DES）诱变得到产壳聚糖酶活性较高的菌株。[方法]利用以壳聚糖为唯一碳源的选择性培养基,从自然界中筛选得到1株产壳聚糖酶活较高的菌株,对其进行鉴定,并且利用紫外线和DES诱变方法来提高该菌株的产酶能力。[结果]经初步鉴定,大致判定产壳聚糖酶的Y-4菌株为烟曲霉（Aspergillus fumigatus）。经紫外线和DES诱变处理分别得到2株壳聚糖酶活性明显提高的突变株,其酶活分别为8.92和8.12 U/ml,分别是出发菌株Y-4（3.00 U/ml）的3.0和2.7倍。2株突变株经连续传代10次后均具有较高的产酶稳定性。[结论]紫外线诱变较DES诱变效果好。     

枯草芽孢杆菌BS-208和BS-209菌株在番茄叶面及土壤中定殖能力的研究

对拮抗枯草芽孢杆菌BS-208和BS-209在番茄叶面和土壤中的定殖情况进行了研究。结果表明,在温室和田间条件下,BS-208菌株的定殖菌量分别为11×108～5 6×108cfu/g鲜叶和15×108～0 02×108cfu/g鲜叶,BS-209菌株的定殖菌量分别为222×106～55×106cfu/g鲜叶和205×106～0 48×106cfu/g鲜叶;扫描电镜观察表明,BS-208菌株在番茄叶面分布不均匀,大多定殖于伤口周围、叶面的凹陷处和绒毛的根部;并且都能够在自然土和灭菌土中定殖,自然土中的菌量低于在灭菌土中的菌量。     

密码子优化烟曲霉壳聚糖内切酶基因在毕赤酵母中的高效表达

[目的]烟曲霉(Aspergillus fumigatus)壳聚糖内切酶基因(Chitosanase,EC.3.2.1.132)(csn)的高效表达研究。[方法]根据毕赤酵母密码子的偏爱性对壳聚糖内切酶的基因进行了优化,利用连续延伸PCR方法扩增全长csn基因,构建重组质粒pPIC9k-csn,将重组质粒pPIC9k-csn线性化后转化毕赤酵母GS115,分析重组蛋白的表达,测定其酶活性,并对其酶解产物成分进行分析。[结果]实现了密码子优化后的壳聚糖内切酶的高效表达,重组菌株比野生菌株所产的壳聚糖内切酶活性提高了近20倍。[结论]该研究成功实现了烟曲霉壳聚糖内切酶基因在毕赤酵母中的高效表达,为工业化大规模生产壳聚糖酶奠定了基础。     

重组枯草芽孢杆菌壳聚糖酶的纯化和性质研究

研究嗜热枯草芽孢杆菌壳聚糖酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及其重组酶的纯化和性质。该基因序列全长723bp,编码240个氨基酸。根据基因同源性分析,该壳聚糖酶与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168的壳聚糖酶前体基因的同源性最高,为98%。粗酶液经Ni-IDA亲和层析得到电泳级纯酶,比活力高达1 051.8U/mg。经测定,该酶反应最适温度为45℃,最适pH为6.0,在40℃和pH 4.5～8.0下稳定。该酶为内切壳聚糖酶,能够高效降解壳聚糖,生成一系列的壳寡糖,在壳寡糖的制备生产方面具有广阔的应用前景。     

堆肥中生物表面活性剂产生菌的筛选及培养条件优化

[目的]筛选堆肥中生物表面活性剂产生菌,优化其培养条件。[方法]采用富集培养、菌种纯化等方法从农业好氧堆肥中筛选出能产生生物表面活性剂的菌株,并采用正交试验对菌株的培养条件进行优化。[结果]从农业好氧堆肥中筛选出1株能产生生物表面活性剂的菌株BS-2,该菌株能将发酵液的表面张力降到40mN／m以下,在温度20—100℃和pH值6．0～9．5条件下,其表面张力始终保持在40mN／m以下,具有良好的表面活性及对堆肥环境的稳定性。该菌株的最佳培养条件为：可溶性淀粉25．0g/L、NH4NO3 8．0g／L、KH2PO4 2．0g／L、K2HPO42．5g／L、KCl 1．1g／L、NaCl 1．1g／L、MgSO4 0．15g／L、FeSO4·7H2O 5．0×10^-5g／L、EDTA 1．0g／L、酵母浸膏0．2g／L、初始pH值为7．0、温度为30℃、摇床转速为150r／min、发酵培养时间为3d。在该条件下,发酵液的表面张力最低,为29．3mN／m。[结论]菌株BS-2初步鉴定为枯草芽孢杆菌。     

产纤维素酶菌株对烟叶纤维素和可溶性总糖的影响

[目的]探讨产纤维素酶菌株(Bacillus subtilis)对烟叶纤维素和可溶性总糖的影响。[方法]以产纤维素酶Bacillus subtilis-89(BS-89)菌株对烟叶进行发酵,研究不同菌龄、种量、发酵温度和发酵时间对烟叶纤维素和可溶性总糖的影响。[结果]随着接种量、发酵时间和温度的增加,烟叶纤维素含量均呈明显降低的趋势,可溶性总糖含量呈现升高的趋势。不同菌龄对纤维素和可溶性总糖含量也有影响,其中以菌龄48 h的处理组影响最大。[结论]产纤维素酶菌株BS-89能有效降解烟叶中纤维素含量,明显提高可溶性糖的含量。     

枯草芽孢杆菌BS-1菌株抑菌活性研究

对1株枯草芽孢杆菌BS-1进行了抑菌活性测定研究。以苹果炭疽病菌、番茄灰霉病菌、水稻恶苗病菌、小麦赤霉病菌、棉花枯萎病菌、辣椒疫霉病原菌、玉米小斑病菌7种植物病原菌为指示菌,采用对峙培养法、杯碟法以及菌丝生长速率法测定了枯草芽孢杆菌及其无菌发酵液对7种植物病原菌的拮抗活性,结果表明,枯草芽孢杆菌及其发酵液对番茄灰霉病菌生长有较强的抑制作用,对苹果炭疽病菌没有抑制作用。     

DTAB对两性膨润土的复配修饰机制和吸附菲的影响

复配修饰后的黏土对污染物具有卓越的吸附功能,为了探究阳离子型修饰剂对两性修饰土的复配修饰机制,并考察其对两性修饰土吸附有机污染物的影响,采用阳离子型表面修饰剂十二烷基三甲基溴化铵(DTAB)对两性表面修饰剂十二烷基二甲基甜菜碱(BS-12)修饰膨润土进行复配修饰,通过“S_DC”曲线变化和模型拟合结果判断复配修饰在土样表面的离子交换和疏水结合模式的变化,并验证了阳离子+两性复配修饰土样对菲的吸附效果。结果表明:DTAB对25%、50%和100%BS-12修饰土复配修饰存在离子交换和疏水结合两种模式,且分别在DTAB修饰比例31.15%、17.26%和2.40% CEC时开始出现疏水结合模式;单一BS-12修饰土对菲的吸附能力随BS-12修饰比例的增加而增强,25%BS-12+DTAB和50%BS-12+DTAB复配修饰土对菲的吸附能力均随DTAB修饰比例的增加而增加,而100%BS-12+DTAB复配修饰土对菲的吸附能力在不同DTAB复配修饰比例下差异较小;随着离子强度的增加,原土与BS-12修饰土对菲的吸附量显著增加,且0.1 mol·L^-1条件下最佳,而BS-12+DTAB复配修饰土无显著变化;DTAB+BS-12复配修饰土对菲的吸附能力与BS-12和DTAB的复配修饰比例以及菲的饱和吸附有关。     

翘嘴鳜细菌性败血症病原菌的分离及其致病力的研究

从患细菌性败血症的翘嘴鳜病鱼中分离到１１个菌株，通过直接荧光抗体法鉴定、菌株致病力测试和生化特性分析，证实了翘嘴鳜细菌性败血症是由嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）引起的。     

BS 12与Cd2+复合污染对空心菜种子萌发及生长的影响

研究两性表面活性剂BS-12和Cd2+共存对空心菜种子萌发、叶绿素含量及MDA含量等的影响。结果表明,在Cd2+单独作用下,Cd2+质量浓度为5 mg/L时,能促进空心菜种子萌发,Cd2+质量浓度≥10 mg/L时,对其萌发产生毒害作用。BS-12与Cd2+共存时,在同一Cd2+质量浓度条件下,当加入较低质量浓度的BS-12时,能降低Cd2+对空心菜的毒害作用。具体表现为空心菜的发芽率、株高和叶绿素含量都随着BS-12质量浓度的升高呈现先上升后下降的趋势,而MDA含量呈现先下降后上升的趋势。因此,通过以上生理生化指标的测定,可以得知BS-12≤50 mg/L时,能降低Cd2+对空心菜种子萌发的毒害作用。