白背三七愈伤组织诱导及培养条件优化

以白背三七带芽嫩叶和茎段为外植体诱导愈伤组织,建立愈伤组织培养体系,并对主要培养条件进行了优化。结果表明:白背三七带芽嫩叶在MS培养基与1.0 mg/L KT+0.5 mg/L 2,4-D+0.3 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA激素组合下能快速诱导出愈伤组织,最佳诱导时期为3月份。白背三七在B5培养基与0.5 mg/L NAA+2.0 mg/L 6-BA激素组合下可获得疏松易碎、有金属光泽、生长旺盛的愈伤组织,呈平缓的"S"型生长曲线,接种后第18天生物量达到最大值19.54 g/瓶。     

何首乌叶愈伤组织的诱导和二苯乙烯苷含量的检测

[目的]对何首乌叶进行愈伤组织诱导并检测叶愈伤组织中二苯乙烯苷的含量。[方法]在25℃暗箱培养条件下,将何首乌叶在含有浓度为1 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）和浓度为0.4 mg/L萘乙酸（NAA）的MS诱导培养基中进行诱导,15 d后把诱导出的愈伤组织转接到相同培养基中培养15 d,共转接3次,并通过HPLC法检测叶愈伤组织中二苯乙烯苷的含量。[结果]诱导出的愈伤组织生长状况良好,并且测得叶愈伤组织中二苯乙烯苷的含量为0.37 mg/g。[结论]由叶诱导出的愈伤组织中含有二苯乙烯苷,该愈伤组织可以用于进一步的生理生化研究。     

狭叶柴胡愈伤组织和悬浮细胞成分的UPLC/Q-TOF-MS分析

以柴胡皂苷d(SSd)为检测指标,基于超高效液相色谱联用四级杆串联飞行时间质谱仪(UPLC/Q-TOF-MS),建立狭叶柴胡愈伤组织及悬浮细胞成分定性分析的方法。采用C18色谱柱(50mm×2.1mm,1.7μm),以0.1%甲酸-乙腈为流动相梯度洗脱,使用ESI离子源,正离子模式下采集数据,结合对照品SSd谱图,分析相关文献数据对照。结果表明:在UPLC/Q-TOF-MS检测下,狭叶柴胡悬浮细胞、细胞发酵液及愈伤组织在洗脱时间为11.22、11.19及11.17min时均与标准品SSd(11.12min)有相同的裂解碎片,愈伤组织及悬浮细胞中均含有活性成分SSd。相比传统的高效液相检测方法,该方法快速、准确且灵敏度好,适用于柴胡组织培养物中活性成分的检测和分析。     

龙眼体细胞胚胎发生过程中内源多胺的变化

采用高效液相色谱测定了龙眼胚性愈伤组织体胚发生过程中内源多胺含量的变化.结果表明:龙眼胚性愈伤组织中内源多胺含量比非胚性愈伤组织高;体胚发生过程中内源多胺含量变化趋势大致呈“M”状,在胚性愈伤组织Ⅱ和球形胚阶段转折;内源多胺含量的变化先于形态学的变化.     

HPLC 法测定LED 不同光质下迷迭香 愈伤组织中鼠尾草酸含量

以迷迭香(Rosmarinus officinalisL.)愈伤组织为材料,采用高效液相色谱法(HPLC)测定了不同LED光质下迷迭香愈伤组织中鼠尾草酸的含量.HPLC法测定鼠尾草酸的色谱条件为:C18色谱柱,柱温30℃;流动相为乙腈∶0.1％磷酸=55∶45 (V/V),流速1.5 ml/min,紫外检测波长210 nm,等度洗脱,时间30 min.结果表明:与黑暗和日光灯白光下的愈伤组织对照,LED黄光下愈伤组织生长最好,LED白光下生长较好,LED蓝光下生长最差;不同LED光质下迷迭香愈伤组织中鼠尾草酸含量从高到低依次为:LED白光＞日光灯白光＞ LED蓝光＞LED红光＞LED绿光＞LED黄光;LED白光下迷迭香愈伤组织鼠尾草酸含量最高,同时较利于愈伤组织生长.     

不同激素对博落回愈伤组织血根碱代谢累积水平的影响

以博落回叶片为外植体材料,在MS培养基的基础上添加不同的激素进行愈伤组织诱导试验,并采用液相色谱-质谱法检测愈伤组织中的血根碱含量,比较不同愈伤组织中的血根碱代谢累积差异。结果表明:Y-9培养基(添加0.75 mg/L 6-BA和0.5 mg/L NAA)上所生长的愈伤组织中血根碱含量最高,达到0.191 0 mg/mL;添加NAA的Y-9培养基中的愈伤组织血根碱代谢累积水平较高,为XY-1培养基中愈伤组织血根碱含量的18倍以上,也明显高于其他培养基中愈伤组织血根碱的含量;高浓度的2,4-D不利于血根碱的代谢累积。     

宽叶缬草叶片愈伤诱导体系的研究

为宽叶缬草愈伤组织再分化、组织培养及快繁体系的建立提供参考,进行了培养基MS添加生长调节剂6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)与NAA(α-萘乙酸)、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)不同浓度配比对宽叶缬草叶片诱导脱分化培养研究,以筛选出适宜宽叶缬草叶片脱分化植物生长调节剂的种类和浓度配比。结果表明:相较于6-BA与NAA组合,6-BA与2,4-D组合更有利于宽叶缬草愈伤组织的形成。其中,H_5号培养基(MS+6-BA 10毫克/升+2,4-D 0.3毫克/升)和I_5号培养基(MS+6-BA 10毫克/升+2,4-D 0.5毫克/升)所诱导的愈伤组织较理想。H_5号培养基诱导的愈伤组织易于继代培养,I_5号培养基的诱导率高达95.0%,诱导的愈伤组织易于作再分化培养。     

三七不同外植体愈伤组织诱导研究

以三七试管苗的叶、叶柄、带部分叶的叶柄、不定根和主根为外植体,研究了6-BA 0.5mg/L及不同浓度的2,4-D对三七不同外植体愈伤组织诱导的影响。结果表明,以三七苗的叶、叶柄、带部分叶的叶柄、毛根和主根为外植体均能诱导出愈伤组织,愈伤组织诱导率达到100%。其中以三七叶柄为外植体,诱导出的愈伤组织质量较好,增殖率较高,而且叶柄较容易获得,故叶柄较适合作为三七快繁的外植体,其较适合的培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L,蔗糖浓度3%,琼脂浓度0.6%,pH值5.8。     

虎杖叶愈伤组织的诱导和白藜芦醇含量的测定

[目的]诱导虎杖叶的愈伤组织并测定其中白藜芦醇的含量。[方法]以虎杖叶为组织培养材料,在28℃和黑暗培养条件下,在含有浓度0.2 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）和浓度1 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）的MS诱导培养基中进行诱导,15 d后把诱导出的愈伤组织转接到相同培养基中培养15 d,转接3次后,把愈伤组织切下放置在相同培养基上继续培养3次后,采用HPLC法测定虎杖叶愈伤组织中白藜芦醇的含量。[结果]诱导出的愈伤组织生长状况良好,并且测得虎杖叶愈伤组织中白藜芦醇的含量为0.24 mg/g。[结论]由叶诱导出的愈伤组织中含有白藜芦醇成分,用HPLC法测定其含量,方法简便、迅捷,结果可靠。     

八角莲的愈伤组织和组培根及野生根状茎的鬼臼毒素含量比较研究

比较研究了峨眉山野生八角莲根、组培愈伤组织及其诱导根的鬼臼毒素含量,为八角莲的快速繁殖和利用生物技术生产鬼臼毒素提供科学依据.高效液相色谱技术(HPLC)显示组织培养的八角莲愈伤组织和诱导根中均含有鬼臼毒素,分别为0.117%和0.148%,野生品的根中其含量为0.600%.通过组织培养可在不破坏自然资源的前提下快速生产鬼臼毒素,从而为开发鬼臼毒素类抗癌药物提供大量原料.     

银杏愈伤组织细胞生长及其黄酮苷含量

对银杏不同外植体愈伤组织生长进行研究,并应用高效液相色谱(HPLC)法测定黄酮苷含量.结果表明:银杏胚乳Ⅰ愈伤组织诱导率高达100%,其生物量最高,达893mg·瓶-1;以MS为基本培养基,添加2mg·L-16 BA、1mg·L-1NAA,有利于次生代谢物的合成和积累,黄酮苷含量高达8.7mg·g-1.     

沙棘中白雀木醇表征方法及其分布规律

目的本论文基于一种高效、准确白雀木醇表征方法，对沙棘资源中的白雀木醇进行准确定量，探究沙棘资源中白雀木醇的含量变化规律，为沙棘中白雀木醇的开发利用提供参考。方法对比了气相色谱法（GC）和高效液相色谱法（HPLC）两种测试手段的优缺点，采用较优的液相色谱测试方法对包括沙棘果、沙棘籽、沙棘叶在内的沙棘资源中白雀木醇含量变化进行了研究。结果采用液相色谱?蒸发光散射法测定沙棘资源中的白雀木醇，该法呈现良好的线性关系（R2 = 0.998 5），且精密度高（RSD ≤ 0.53%）、准确度高（RSD ≤ 1.16%）、重复性好（RSD ≤ 1.71%）。研究结果显示，沙棘中不同部位的白雀木醇含量差异显著（P < 0.01），其中沙棘叶中白雀木醇含量最高（59.73 mg/g，干叶），其次为沙棘果肉（2.19 mg/g，鲜果肉）和沙棘籽（0.39 mg/g，鲜籽）；收集5月份至9月份不同生长阶段的沙棘叶，研究表明，随着叶子生长白雀木醇含量呈现为逐渐升高趋势，且7月份至8月份期间增速最大，9月份含量积累至最高（64.79 mg/g，干叶）。结论液相色谱?蒸发光散射法检测白雀木醇含量，操作简便、并且精密度、准确度高、重复性好；沙棘叶中白雀木醇含量较果实丰富，沙棘叶中白雀木醇含量9月份累积至最高，本研究可为沙棘资源中白雀木醇的开发应用提供有效数据支撑。      

葡萄松散型愈伤组织的培养及其白藜芦醇含量的测定

【目的】获得葡萄(Vitisvini fera L.)松散型愈伤组织,并了解其白藜芦醇含量的变化。【方法】以葡萄的叶、叶柄和茎分别作为外植体,在不同激素组合(6-卞氨基嘌呤(6-BA)、激动素(KT)、吲哚丁酸(IBA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D))的培养基(以B5培养基为基本培养基,含30g/L蔗糖和6g/L琼脂)上,进行愈伤组织的诱导和继代培养,并利用高效液相色谱法(HPLC)对不同来源愈伤组织中的白藜芦醇含量进行测定。【结果】以葡萄叶为外植体时,诱导的愈伤组织出愈率很低;以叶柄和茎为外植体时,愈伤组织的出愈率均较高。利用叶柄和茎获得松散愈伤组织时,其诱导培养基组成分别是:B5培养基+6-BA0.5mg/L+IBA0.1mg/L和B5培养基+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L,其继代培养基均为B5培养基+6-BA1.0mg/L+2,4-D0.1mg/L。在诱导培养基产生的愈伤组织中,白藜芦醇含量由高到低的顺序为叶柄>叶>茎。以叶、叶柄和茎为外植体诱导愈伤组织时,其白藜芦醇含量最高的培养基分别为B5培养基+6-BA0.5mg/L+IBA0.2mg/L、B5培养基+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L和B5培养基+6-BA0.5mg/L+IBA0.2mg/L。【结论】葡萄叶柄和茎易被诱导产生松散的愈伤组织,且经多次继代可以用于建立悬浮培养体系;葡萄愈伤组织中的白藜芦醇含量随外植体及培养基组成的不同而有所差异。     

藤茶植株叶果与组培物中二氢杨梅素含量的比较研究

为比较藤茶经组织培养后不同组织中二氢杨梅素的含量,采用高效液相色谱法(HPLC)测定藤茶叶片、果实、悬浮培养液、嫩叶、愈伤组织、老叶中二氢杨梅素的含量。结果表明:嫩叶、叶片、老叶、果实、愈伤组织、悬浮培养液中二氢杨梅素的含量分别为:25.528%、13.709%、13.337%、6.255%、11.616%、0.829%。愈伤组织中二氢杨梅素含量与叶片接近,悬浮液中含量最低,可以尝试运用愈伤组织培养法生产二氢杨梅素。     

朱砂根皂苷高产愈伤组织的诱导与筛选

采用比色法测定了以朱砂根(Ardisia crenata)胚、根、茎及叶等4种外植体诱导的愈伤组织中皂苷含量,筛选高皂苷含量的愈伤组织。结果表明,朱砂根的胚和根诱导出来的愈伤组织皂苷含量最高,达到24.07 mg/g和21.25 mg/g,茎和叶诱导的愈伤组织皂苷含量较低,根和茎诱导的愈伤组织生长较好。     

秦岭太白米中黄酮类成分的研究

将太白米鳞茎及组织培养诱导的愈伤组织、腋芽和不定芽的提取物进行紫外可见光光谱分析和高效液相色谱分析。结果表明,通过组织培养获得的愈伤组织、腋芽和不定芽中总黄酮的含量分别为12.6、8.29、.2 mg.g-1,其中愈伤组织中的含量与鳞茎12.9 mg.g-1无显著差异,为愈伤组织代替太白米鳞茎入药提供了一定的依据;太白米的鳞茎及愈伤组织、腋芽、不定芽中均不含有芦丁、槲皮素和儿茶素,含有黄岑素;提取物中黄岑素的含量差别明显,愈伤组织、腋芽、不定芽中黄岑素的含量基本相同,但约为鳞茎的1/2。     

不同品种茶树愈伤组织的培养与茶氨酸的积累

通过对福鼎大白、福云595、福安大白、福鼎大毫、福云六号5个茶树品种愈伤组织的继代培养,研究其愈伤组织生长与茶氨酸积累规律,建立Logistic数学模型.结果表明:愈伤组织生长量与茶氨酸含量呈显著正相关(P<0.01);福鼎大白的愈伤组织生长量与茶氨酸质量分数最高,分别是2.26g·瓶-1、176.143mg·g-1;愈伤组织生长量与茶氨酸含量的大小顺序均为福鼎大白茶、福云595、福安大白、福鼎大毫和福云六号;茶氨酸的最佳收获时间为培养后24-28d.     

外源添加物对半夏愈伤组织次生代谢的调控

以半夏[Pinellia ternate(Thunb.)Breit]愈伤组织为材料,研究不同外源添加物对半夏愈伤组织内GOGAT、GDH、GOT、PAL活性和总生物碱、鸟苷和腺苷含量的影响。结果表明,不同浓度的外源添加物SNP、ASA、Phe、Asp单一或两两复合添加,均能提高半夏愈伤组织中GOGAT、GDH、GOT、PAL的活性,增加总生物碱和鸟苷的含量。其中,1 mg/L ASA和150 mg/L Asp复合处理诱导GOGAT、GDH、GOT、PAL活性提高和可溶性蛋白含量增加的效果最好,此时半夏愈伤组织中总生物碱及鸟苷含量分别比对照增加131.0%、146.7%。适宜浓度的SNP、ASA、Phe、Asp可通过提高半夏愈伤组织中GOGAT、GDH、GOT、PAL活性加速无机氮的同化及转化效率,促进总生物碱、鸟苷和腺苷的合成与积累。     

银杏愈伤组织诱导及其双黄酮含量的测定

为了提高银杏中双黄酮的提取量,满足市场对双黄酮的需求,通过正交试验建立银杏诱导愈伤组织和增殖体系,采用高效液相色谱法测量愈伤组织中双黄酮的含量。试验结果表明:最适合的外植体为叶片,最适消毒组合为10%Na Cl O消毒6 min,75%乙醇消毒40 s;诱导愈伤组织最佳培养基为0. 4 mg/L KT+1. 0 mg/L 6-BA+1. 0 mg/L2,4-D;愈伤组织增殖最佳培养基为1. 5 mg/L KT+1. 0 mg/L 6-BA+2. 0 mg/L 2,4-D+1. 5 mg/L NAA;通过诱导愈伤组织提取双黄酮得率为15. 622 mg/g,比银杏叶中双黄酮含量高,可避免自然条件的限制。     

光质对龙眼胚性愈伤组织柯里拉京含量的影响

通过超声波提取‘红核子'龙眼胚性愈伤组织中的柯里拉京[β-1-O-galloyl-3,6-(R)-hexahydroxydiphenoyl-D-glucose],并优化色谱分离条件,采用超高效液相色谱法(ultra performance liquid chromatography,UPLC)测定其含量,探讨培养天数及光质对龙眼胚性愈伤组织柯里拉京含量的影响。结果表明,龙眼胚性愈伤组织黑暗培养25 d柯里拉京含量最高;不同光质处理下柯里拉京含量依次为:黑暗(18.81 mg·g-1)红光(16.99 mg·g-1)绿光(16.89 mg·g-1)白光(15.10 mg·g-1)蓝光(12.52 mg·g-1),黑暗条件最有利于其合成,而蓝光则抑制其合成。