半夏再生体系的建立

【目的】优化半夏再生条件,以获得优质半夏种苗.【方法】筛选出适宜的外植体后,使用3种激素2,4-D,KT,IAA利用正交设计法设置9个处理组对半夏愈伤组织进行诱导.选取长势良好,大小均一的半夏愈伤组织接于4种培养基中进行愈伤组织增殖.选取半夏叶柄诱导出的愈伤组织将其接于5种培养基中进行愈伤组织分化,观察不同培养基对半夏愈伤组织生根和出芽的影响,最后进行炼苗与移栽.【结果】在叶柄、叶片及块茎3种外植体中,叶柄是半夏愈伤组织诱导的最佳外植体;最有利于半夏愈伤组织诱导的培养基为MS+0.5 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L KT+1.0 mg/L IAA;在暗培养条件下,将半夏愈伤组织继代于MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L KT+1.0 mg/L IAA中生长最快;MS+0.2 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA培养基最有利于半夏愈伤组织的生根和出芽.     

中药白芍愈伤组织的培养及其中芍药苷的测定

[目的]建立中药白芍愈伤组织培养的方法,并测定其中芍药苷的含量。[方法]以白芍叶、茎为外植体,接种于不同的愈伤诱导培养基和继代培养基上培养愈伤组织,并提取愈伤组织中的芍药苷,用TLC和HPLC法测定愈伤组织中芍药苷的含量。[结果]适合白芍茎的诱导愈伤培养基是1/2MS+0.2 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,叶的最适诱导培养基是1/2MS+1.0 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA,白芍愈伤继代培养适合培养基为1/2MS+0.1 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L ZT+0.5 mg/L NAA。经HPLC测定每克干白芍愈伤组织中的芍药苷含量为0.068 9 mg。[结论]中药白芍的叶和茎可诱导形成愈伤组织,且形成的愈伤组织中含有芍药苷。     

北五味子组织培养中愈伤组织的诱导

以北五味子的嫩茎段、叶片、叶柄、果柄为外植体,以MS和B5附加不同激素配比的培养基为基质,探讨了诱导北五味子愈伤组织较合适的外植体及培养基。结果表明:北五味子的嫩茎段是愈伤组织诱导的理想外植体,而培养基中以MS 6-BA1.0mg/L NAA0.2mg/L 2,4-D0.1mg/L IBA0.3mg/L和B5 6-BA1.0mg/L NAA0.2mg/L KT0.1mg/L的诱导效果较好。     

东北刺人参愈伤组织诱导和继代的研究

[目的]研究东北刺人参愈伤组织的诱导和继代方法。[方法]以取自长白山的刺人参植株为材料,研究不同外植体、培养基、激素对刺人参愈伤组织诱导的影响。[结果]叶片为刺人参组织培养的最适宜外植体;5月为外植体的最佳取材时期;以MS为基本培养基,并添加1.0 mg/L 2,4-D和1.0 mg/L 6-BA的培养基中愈伤组织诱导率最高;最佳继代培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2mg/L。[结论]东北刺人参的最适愈伤诱导培养基和继代培养基分别是:MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L和MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L。     

杜鹃红山茶愈伤组织诱导的初步研究

以杜鹃红山茶嫩茎、叶柄以及叶片为外植体,研究不同激素组合及不同外植体对愈伤组织诱导效应的影响,研究结果表明:MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA是杜鹃红山茶愈伤诱导的最佳培养基,MS+1.0 mg/L 2,4-D+3.0 mg/L6-BA+1.5 mg/L IAA是最佳的继代培养基。叶柄在愈伤诱导率及生长状况上优于其他外植体。     

黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的组织培养快速繁殖

【目的】建立黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的组织培养快速繁殖体系。【方法】以黄芩的幼茎、幼叶及叶柄为外植体,在MS培养基上添加不同质量浓度的6-BA、2,4-D与NAA诱导愈伤组织及再生芽;在1/2 MS培养基上添加IAA、IBA或NAA激素,单独或者组合使用,诱导黄芩试管苗生根。【结果】幼叶和叶柄容易褐化死亡,而幼茎显示很好的脱分化和再分化效果;BA与NAA组合可以诱导幼茎外植体脱分化与再分化,而BA与2,4-D组合只能诱导愈伤组织发生。IAA诱导生根率最高,但是茎基部会形成愈伤组织,后期无法驯化成活;IBA及NAA均可以诱导根的发生,但是以IBA效果为佳。【结论】幼茎为最佳外植体,MS+BA0.5mg/L+NAA 0.5mg/L为最佳的愈伤组织诱导及再生芽的分化培养基。1/2MS+IBA 0.1mg/L为最佳的试管苗生根培养基,生根率为70.3%。     

耧斗菜的组织培养

以耧斗菜幼嫩叶片及叶柄为外植体,研究了不同生长调节物质对外植体愈伤组织诱导、不定芽分化和生根的影响。结果表明,在培养基MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L上诱导叶柄产生愈伤效果最好,诱导率为80.5%;在培养基MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L上叶片愈伤诱导效果最好,诱导率为92.7%。继代培养基为MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L和MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 2.0 mg/L。在培养基MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L中分化芽;分化的芽在MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.5 mg/L中增殖。生根培养基为1/2 MS+NAA0.1 mg/L或1/2 MS+IBA 0.2 mg/L。     

越南紫薯胚性愈伤组织诱导及体细胞胚胎形成

【目的】越南紫薯〔Ipomoea batatas（L.）Lam〕品质优良,薯块均匀,商品性好,但产量偏低,产量性状亟待遗传改良,体细胞胚胎发生是快速繁殖和保持种性稳定的基础,对紫薯的遗传改良有重要意义。采用激素处理越南小紫薯外植体,研究越南紫薯的体细胞胚胎再生途径,为通过体细胞无性系变异筛选紫薯高产优质新材料提供新方法。【方法】以市场销售的越南紫薯为材料,以叶片和茎段作外植体,探讨植物生长调节物质种类（6-BA、NAA、2,4-D、ABA）及配比对越南紫薯培养的影响,建立越南紫薯体细胞胚胎发生及再生植株体系。【结果】叶片和茎段诱导愈伤组织培养基相同,难易程度一致,诱导配方为 MS+6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L;在普通愈伤组织诱导形成胚性愈伤组织过程中,2,4-D 起重要作用,其他激素起辅助作用,较好的诱导配方为 MS+6-BA 0.1 mg/L + 2,4-D 2.0 mg/L;在胚性愈伤组织诱导产生体细胞胚过程中,ABA 起着重要作用,并进一步发育和分化的适宜的培养基为 MS+6-BA 0.1 mg/L + NAA 0.2 mg/L + ABA 0.5 mg/L。【结论】叶片和茎段愈伤组织诱导最佳培养基为 MS+6-BA 1.0 mg/L+0.2 mg/L NAA,愈伤组织转化为胚性愈伤最佳培养基为 MS+6-BA 0.1 mg/L +2,4-D 2.0 mg/L;胚性愈伤形成体细胞胚胎最佳培养基为 MS+6-BA 0.1 mg/L + NAA 0.2 mg/L + ABA 0.5 mg/L。     

半夏叶柄愈伤组织诱导与分化最适培养基筛选

以半夏(Pinellia ternata(Thunb.)Breit)叶柄为外植体,研究不同培养基配方对诱导脱分化、愈伤组织增殖及分化的影响。结果表明,适合半夏叶柄诱导脱分化的最佳培养基是MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA;最适愈伤组织增殖培养基是MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA;最适分化培养基是MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA。     

黄芪愈伤组织的诱导及分化培养

通过对黄芪叶片和茎段愈伤组织进行诱导及分化培养,确定黄芪愈伤组织诱导和分化培养最佳培养基分别为MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L NAA和MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA+0.5 mg/L NAA,选择叶片作为外植体优于茎段,愈伤诱导率和直接分化出...     

番茄耐盐愈伤组织的筛选及显微结构观察

以番茄下胚轴为外植体诱导愈伤组织，转入含10g/LNaCl的筛选培养基上培养，经过3代高盐直接筛选，获得耐盐愈伤组织，进行电镜观察，结果表明，存活下来的耐盐绿色愈伤组织细胞及细胞器（与对照相比）形态结构正常，代谢活动旺盛，而处于死亡状态的浅褐色愈伤组织和解体死亡的黑色愈伤组织细胞及细胞器形态结构异常。     

玻璃化法超低温保存龙眼胚性愈伤组织的初步探讨

采用玻璃化法对不同基因型的龙眼胚性愈伤组织超低温保存进行了初步探讨.将保存一定时间的胚性愈伤组织于常温下用60%玻璃化溶液(2PVS2)装载30 m in,再于0℃下用PVS2溶液平衡60 m in;换新鲜的PVS2溶液,迅速投入液氮中保存;48 h后化冻.结果表明,具有原胚分化的胚性愈伤组织保存后的存活率明显高于普通胚性愈伤组织;40℃温水浴、25℃左右室温和自来水冲洗等3种不同的化冻方式对龙眼胚性愈伤组织玻璃化超低温保存后的存活率具有同样的效果.     

马铃薯试管苗愈伤组织的悬浮细胞培养

用马铃薯试管苗诱导的愈伤组织进行悬浮培养,每 ４５～５０ ｍＬ培养基中加入 ２ｇ愈伤组织。结果表明, ２０ ｄ苗龄的试管苗诱导效果最好;固体培养愈伤组织继代 ４～５次时最适于进行悬浮培养;良好的细胞悬浮培养物为浅绿色、清纯透明的液体,有数个到１０多个细胞组成细胞团。     

用基因枪法将Bt杀虫基因导入水稻愈伤组织的研究

从水稻成熟胚诱导出的愈伤组织经继代培养后可以产生大量的胚性愈伤组织。本研究采用基因枪法转化上述胚性愈伤组织 ,在附加羧苄青霉素 (5 0 0 μg· m L-1)和卡那霉素 (5 0 μg·m L-1)的选择培养基上进行抗性愈伤组织的筛选 ,在附加羧苄青霉素 (5 0 0 μg· m L-1)和卡那霉素 (2 5 μg· m L-1)的分化培养基上诱导抗性芽。GUS酶活性检测和对基因组 DNA作 PCR检测结果均为阳性 ,证明外源目的基因 (Bt)已在寒地水稻抗性愈伤组织中整合并表达。抗性再生植株的 GUS酶活性及 PCR检测正在进行中     

EMS诱变处理定向筛选杨树耐盐突变体研究

应用EMS(甲基磺酸乙酯)处理杨树胚性愈伤组织,通过组织培养方法定向筛选杨树耐盐变异体。对EMS处理"加引"杨树胚性愈伤组织的浓度和时间进行了研究,结果表明:在同一EMS浓度下,随着处理时间的增加,胚性愈伤组织分化芽的比率降低;处理相同时间,随着EMS浓度增加,胚性愈伤组织分化芽的比率降低;不同EMS浓度处理后的胚性愈伤组织分化芽的比率与处理时间呈线性关系。约200万胚性细胞经4‰(V/V)浓度EMS处理36 h,并经逐级耐盐定向筛选,可得在含NaCl 0.5%(m/V)的培养基上生根的组培苗40株。经筛选优系,组培成再生植株,进行植株水平的试管内耐盐性检测,结果表明:诱变处理所得植株与对照相比,其耐盐性明显提高。同时,在未经耐盐定向筛选实验中得到29株叶片颜色发生变异的畸变植株,耐盐定向筛选试验中也得到4株同类型畸变植株。     

雀舌黄杨(Buxus harlandii)愈伤组织遗传转化的研究

利用处在对数生长期的根癌农杆菌Bo Ss和T37菌株和雀舌黄杨愈伤组织共培养后,在无激素MS培养基上获得了转化愈伤组织,经测定转化的愈伤组织内存在相应的冠瘿碱,结果证明T-DNA编码的激素合成酶基因和冠瘿碱合成酶基因在转化愈伤组织内实现了转移和表达。     

潮霉素和PPT对水稻愈伤组织筛选效果的比较

分别以潮霉素磷酸转移酶基因(hpt基因)和除草剂抗性基因(bar基因)作为筛选标记基因的载体和农杆菌组合转化水稻光温敏核不育系粳稻品种农垦58S和籼稻品种培矮64S，以两个筛选标记基因的相应筛选剂潮霉素(Hyg)和PPT(Basta)对水稻愈伤组织进行筛选研究，初步确定了不同筛选剂对不同水稻愈伤组织的筛选浓度，并比较了两个筛选标记基因的筛选效果．结果表明，不同水稻品种对筛选剂的浓度要求不一样，粳稻品种以Hyg 50mg／L，PPT30mg／L较为适合；籼稻品种以Hyg 50mg／L，PPT 10mg／L，较为适合．PPT(Basta)对粳稻品种农垦58S筛选有效，而对籼稻品种培矮64S来说则易产生假阳性．Hyg作为水稻愈伤组织的筛选剂比PPT(Basta)好．     

高山红景天愈伤组织的玻璃化法保存及植株再生

采用玻璃化法对高山红景天的愈伤组织进行了超低温保存研究.高山红景天愈伤组织在8%蔗糖中暗培养5 d后,先用25℃的60%玻璃化保护剂PVS2预处理20 min,转至100% PVS2于-20℃乙醇浴中处理2 h后,投入液氮进行保存,48 h后使用40℃水浴快速化冻.冻存后的愈伤组织用液体培养基MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L+40%蔗糖洗涤3次,再转入MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.5 mg/L固体培养基中在22℃条件下进行暗培养,2周后转入光照培养（光照强度800 lx）. 6周后观察到高山红景天愈伤组织呈鲜绿色,长势较为旺盛,存活率可达到78.24%.冻存后的愈伤组织可诱导成苗.      

宜兴百合通过愈伤组织诱导再生鳞茎的研究

以宜兴百合外植体产生的小鳞茎为材料,用2,4-D诱导愈伤组织。结果表明,最适合的2,4-D浓度为0.01~0.10 mg/L,愈伤组织诱导再分化小鳞茎的最佳条件为:pH 5.8~6.2,温度22~28℃。光照强度对小鳞茎的生长无明显作用。     

两种培养基对小麦花培愈伤组织的影响

以愈组织的诱导率，颜色，质地，生长速度为指标，通过对９个小麦品种（系）在Ｃ１７和培养基上的培养对比试验，发现除９１３品系外，其余小麦品种（系）在Ｃ１７的愈伤的组织诱导率高于癸培基上培养的诱导率，但从愈伤组织的颜色，质地，生长速度方面考查愈伤组织的质量，在癸培养上诱导产生的愈伤组织的质量较Ｃ１７培养基上的好，最后还讨论了两种培养基的改进方法。