利用甘蓝游离小孢子不定芽叶片再生DH植株技术研究

【目的】探索一种能将有限的DH株快速扩繁的植株再生技术,扩大DH株数量以提高育种效率。【方法】以甘蓝小孢子胚状体不定芽叶片为试材,MS为基础培养基,分别添加不同质量浓度的6-BA(1.0,2.0,3.0,4.0 mg/L)和NAA(0.05,0.1,0.2,0.4 mg/L),筛选出最优质量浓度组合;在6-BA和NAA最优质量浓度组合上,继续添加不同质量浓度的GA-3(0.5,1.0,1.5,2.0 mg/L),比较筛选小孢子不定芽叶片的最佳再生方法。最后,在MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L不定芽诱导培养基上,研究不同生长日龄DH株叶片的诱导效果。【结果】 在MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L中,不定芽再生频率最高,为64.29%,分化系数4.03;添加6-BA、NAA和 GA-3 3种激素,对不定芽再生频率促进作用更大,其中MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA-3 1.5 mg/L诱导效率最高,不定芽再生频率达到了80.36%,分化系数为4.15。当DH株叶片生长日龄为25 d时,不定芽再生频率相对最大,达到68.76%,分化系数为3.62,35 d后诱导效果下降。【结论】 甘蓝DH株叶片诱导植株再生的适宜培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L+GA-3 1.5 mg/L;以生长日龄为25 d左右的甘蓝DH株叶片作为外植体诱导植株再生效果较好。     

利用甘蓝游离小孢子不定芽叶片再生DH植株技术研究

【目的】探索一种能将有限的DH株快速扩繁的植株再生技术,扩大DH株数量以提高育种效率。【方法】以甘蓝小孢子胚状体不定芽叶片为试材,MS为基础培养基,分别添加不同质量浓度的6-BA(1.0,2.0,3.0,4.0mg/L)和NAA(0.05,0.1,0.2,0.4mg/L),筛选出最优质量浓度组合;在6-BA和NAA最优质量浓度组合上,继续添加不同质量浓度的GA3(0.5,1.0,1.5,2.0mg/L),比较筛选小孢子不定芽叶片的最佳再生方法。最后,在MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L不定芽诱导培养基上,研究不同生长日龄DH株叶片的诱导效果。【结果】在MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L中,不定芽再生频率最高,为64.29%,分化系数4.03;添加6-BA、NAA和GA33种激素,对不定芽再生频率促进作用更大,其中MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA31.5mg/L诱导效率最高,不定芽再生频率达到了80.36%,分化系数为4.15。当DH株叶片生长日龄为25d时,不定芽再生频率相对最大,达到68.76%,分化系数为3.62,35d后诱导效果下降。【结论】甘蓝DH株叶片诱导植株再生的适宜培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA31.5mg/L;以生长日龄为25d左右的甘蓝DH株叶片作为外植体诱导植株再生效果较好。     

结球甘蓝离体下胚轴不定芽再生研究

以结球甘蓝强力50（QL50）和甘19 CMS下胚轴为外植体,研究不同激素配比、苗龄和AgNO3浓度等对其不定芽再生的影响。结果表明,在不含任何激素以及单独附加不同浓度的6 BA和NAA的MS培养基上,均不能诱导外植体不定芽的分化;QL50下胚轴在MS+6 BA 2 mg·L-1+NAA 0.02 mg·L-1+AgNO3 6 mg·L-1分化培养基上再生频率最高,为93.0%,最适宜的苗龄为9 d,再生系数为9.17;甘19 CMS在MS+6BA2 mg·L-1+NAA0.2 mg·L-1+AgNO3 6 mg·L-1分化培养基上再生频率最高,为73.8%,最适宜的苗龄为6 d,平均再生系数为4.27。外植体在1/2 MS生根培养基中添加0.5 mg·L-1 NAA时,不定芽的生根效果较好,生根率达1000%,且根系生长健壮。     

甘蓝根系再生植株技术研究

【目的】研究甘蓝根系再生植株技术，为小孢子单胚再生双单倍体(DH)植株当年快速扩繁提供参考。【方法】以甘蓝DH151A的根段为外植体，设置预培养后再进行共培养和直接共培养2种培养方式，共培养的培养基为MS+4.5 mg/L 6BA+6 mg/L AgNO3，再向其中添加不同质量浓度（0.045,0.03,0.025,0.018和0.015 mg/L）的NAA，筛选适宜的培养方式和NAA质量浓度；选择根龄分别为15，20和25 d的DH151A的根段在适宜培养基上培养，比较根龄的诱导效果；以DH151A、DH152B和DH153C无菌植株苗的须根作为外植体，分析基因型对植株再生的影响。【结果】采用直接共培养并选用MS+0.030 mg/L NAA+4.5 mg/L 6BA+6 mg/L AgNO3培养基可获得甘蓝根段诱导培养的最佳效果，其中愈伤诱导率、外植体诱导率和不定芽诱导率均最高，分别达100.0%，90.0%和430.0%，培养3周后分化芽生长健壮，叶片翠绿；根龄20 d外植体的愈伤诱导率最高，达96.0%，并且愈伤分化芽点多，芽点周围褐化少，外植体诱导率和不定芽诱导率均最高，分别为84.0%和420.0%。DH植株基因型是决定根系再生植株效果的一个主要因素，3个供试基因型中，以DH152B根段的再生效果最好，愈伤诱导率、外植体诱导率和不定芽诱导率分别为83.3%，76.7%和430.0%。【结论】选用DH152B基因型甘蓝20 d的根段在MS+0.03 mg/L NAA +4.5 mg/L 6BA+6 mg/L AgNO3培养基上培养，最有利于根段再生植株形成，植株再生率高达100％。     

大白菜“早熟5号”不定芽再生体系的优化

选用大白菜品种“早熟5号”为材料,分析了外植体、苗龄、AgN03和植物激素对其不定芽再生的影响.结果表明:不同外植体类型中,采用4～5d苗龄的带柄子叶为外植体再生频率最高,添加AgN03后在3～7 mg/L的浓度范围内外植体分化率大幅度提升,分化率最高达到78.33％,带柄子叶于MS+6- BA 5 mg/L+ NAA 1 mg/L+ AgNO33 mg/L培养基上不定芽分化率最高,达到86.41％.     

菊花叶片不定芽再生体系的研究

以7个不同菊花品种的叶片为外植体，探讨了基因型、苗龄、叶片着生部位、Vc、活性炭、AgNO3以及不同生长调节剂组合等因素对菊花叶片不定芽再生的影响.试验结果表明，基因型是影响不定芽再生的重要因素；15～35d苗龄的无菌苗中、上部幼嫩叶片不定芽再生能力较高；高浓度NAA有利于提高‘紫妍’叶片外植体的再生能力和消除褐化现象；AgNO3未能促进叶片外植体的再生；适宜‘紫妍’再生的培养基是MS+6-BA 1mg/L+NAA 0.5mg/L和MS+6BA 2mg/L+NAA1mg/L；适宜‘L12M57’再生的培养基是MS+6BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L和MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.1 mg/L      

2种基因型大白菜高效子叶离体不定芽再生研究

以2个优质大白菜材料德高早熟长江5号(DG)和双耐(SN)的子叶为外植体,研究了不同激素配比、苗龄和AgNO3浓度对子叶不定芽再生的影响,建立了2种大白菜的子叶不定芽高效再生体系,为进一步有效的利用基因工程技术改良大白菜品种奠定了基础.结果表明:与6-BA相比,TDZ对诱导子叶不定芽再生更有效.在单独附加细胞分裂素(6-BA或TDZ)的MS培养基上,不能诱导子叶不定芽的分化.DG在MS+ 1.5 mg/L TDZ+0.2 mg/LNAA+6 mg/L AgNO3分化培养基上再生频率最高,为73.80％,最适苗龄为6d,平均再生系数为4.27.SN在MS+1 mg/L TDZ +0.4 mg/L NAA+6 mg/L AgNO3分化培养基上再生频率最高,为59.09％,最适苗龄为6d,再生系数为4.03.     

优质魔芋组培快繁技术研究*

 以魔芋的根状茎为外植体,用正交试验法研究了不同氮素含量的基本培养基、不同浓度的BA以及NAA对魔芋根状茎愈伤组织诱导的影响;不同激素组合对不定芽分化、组培苗生根诱导的影响,并针对魔芋组织培养中的褐变现象采取了有效措施。结果表明:诱导魔芋根状茎愈伤组织产生的最适培养基为NN基本培养基+1.0mg/L BA+1.0mg/L NAA;MS基本培养基+2.0mg/L BA+1.0mg/L IAA为不定芽分化的最适培养基,在不定芽诱导和生长上,BA与IAA的组合较与NAA的组合好;MS+0.5mg/L IBA+0.5mg/L GA3为组培苗的最佳生根培养基,生根率达100%;一定浓度的PVP,Vc或者AC能有效控制褐变现象的发生。     

雪里蕻高效再生体系的建立

以雪里蕻(Brassica juncea Coss. var. multiceps Tsen et Lee)子叶、带柄子叶、子叶柄和下胚轴为外植体,在添加不同植物生长调节剂的MS培养基上进行分化培养.结果表明:在4种外植体中,带柄子叶不定芽分化能力最强.子叶和带柄子叶不定芽分化的最适培养基分别为MS+2 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA+5 mg/L AgNO3和MS+2 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+5 mg/L AgNO3.带柄子叶和子叶不定芽分化的最佳苗龄都为5 d.AgNO3能显著地促进带柄子叶不定芽的分化,以5 mg/L的浓度为最佳.不同基因型对带柄子叶不定芽分化影响不大,但对子叶影响较明显.不定根诱导的最佳培养基为MS+0.2 mg/L NAA.     

铁炮百合离体再生体系的建立

以铁炮百合无菌苗的叶片、鳞片为外植体,进行铁炮百合再生体系的研究。结果表明:鳞片的诱导分化能力高于叶片,鳞片分化培养基(MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA、MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA)的分化率高达90.98%。用叶片为外植体,不同部位对不定芽的诱导影响较大,以叶片中部分化能力最强,上部次之,下部最差。叶片分化培养基为MS+1.0 mg/L BA+0.2 mg/L NAA,分化率为85.36%。2,4-D浓度对愈伤组织的诱导影响显著,愈伤诱导培养基以MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D为佳,愈伤率达80%以上。     

不同浓度的外源激素对香石竹组织培养的影响

研究了不同浓度的外源激素对香石竹组织培养过程中愈伤组织诱导、芽分化和芽增殖的影响。结果表明,愈伤组织的诱导与BA与NAA浓度比及KT浓度有关;芽诱导与BA、KT、NAA均有关;芽增殖与BA的浓度及BA和NAA的浓度比有关。MS+BA 0.3 mg/L+KT0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L培养基对愈伤组织诱导效果最好;最佳的芽分化培养基为MS+BA 0.5 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 2.0 mg/L,芽分化率达65%;芽增殖培养基以MS+BA 0.3 mg/L+NAA 0.1 mg/L为最佳,增殖芽数最多,玻璃化率最低。     

南盐油1号油菜的组织培养及植株再生研究

以南盐油1号油菜的下胚轴为外植体,利用组织培养的方法,研究苗龄、预培养时间、预培养基的激素配比、分化培养基的激素配比及AgNO3浓度等对芽再生的影响.结果表明,6 d苗龄的下胚轴在MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA培养基预培养4 d后,转入分化培养基MS+2.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+8 mg/L AgNO3培养,可以获得较高的芽再生频率.     

萝卜组织和器官的离体培养

本试验以萝卜品种"鲁萝卜一号"为试材,对其不定芽和愈伤组织的诱导、增殖和分化进行了探讨。结果表明:带下胚轴的茎端为不定芽诱导适宜外植体;MS+3mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA为不定芽继代增殖的适宜培养基,但在该种培养基上继代5次后,需适当提高6-BA浓度,才能保持较高的增殖水平;以子叶为外植体,培养基为MS+3mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA时,有利于愈伤组织的诱导;在此培养基中添加5mg/L AgNO3有利于愈伤组织继代与保存;愈伤组织转接在培养基MS+6mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+5mg/L AgNO3上,获得了再分化芽。     

澳洲青苹离体叶片不定芽再生体系的建立

以澳洲青苹试管苗的叶片为外植体诱导不定芽再生,研究不同的BA浓度、TDZ浓度、暗培养时间、叶片放置方式和AgNO3对叶片不定芽再生的影响。结果表明:最适宜的叶片不定芽再生的培养基为MS TDZ 2.0mg/L NAA 0.3 mg/L 琼脂6.0 g/L 蔗糖30.0 g/L和MS BA 4.0 mg/L NAA 0.2 mg/L 琼脂6.0 g/L 蔗糖30.0 g/L,最适的暗培养时间是20 d,在上述2种培养基中澳洲青苹离体叶片不定芽的再生频率分别达到100.0%和91.7%。     

苹果组培苗离体叶片诱导不定芽分化

以福早红、鲁加3号和鲁加6号3个苹果品种的组培苗叶片为试材,研究了植物生长调节剂、基因型、暗培养、AgNO3对苹果叶片不定芽分化的影响.结果表明:福早红、鲁加3号和鲁加6号3个苹果品种的组培苗叶片分化最佳培养基分别为MS+6-BA 4 mg/L+NAA 0.20 mg/L,MS+6-BA 4 mg/L+NAA 0.10 mg/L,MS+6-BA 4 mg/L+NAA 0.05 mg/L;基因型是决定苹果组培苗叶片分化的重要因素,3个苹果品种叶片分化不定芽的能力从大到小依次是福早红、鲁加6号、鲁加3号;暗培养可以明显促进苹果叶片进行脱分化,提高叶片的分化率,苹果叶片暗培养处理的最佳时间为15 d;AgNO3抑制苹果叶片愈伤组织的形成,不能促进其叶片不定芽的形成.     

黑莓叶片组织培养及植株再生的初步研究

以美国黑树莓叶片作为外植体,以MS为基本培养基,添加不同浓度的6-BA、NAA或IAA进行愈伤组织诱导及植株再生试验.结果表明:树莓叶片外植体在培养基MS+6-BA 2.0～ 4.0 mg/L+NAA(IAA)0.01～0.5 mg/L都能不同程度地形成愈伤组织 ,但以MS+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L和MS+6-BA 4.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L愈伤组织的诱导率最高,诱导率可达100%;所试验的各种不定芽分化培养基,都能不同程度地诱导愈伤组织分化出不定芽,在添加6-BA 2.0 mg/L和NAA 0.01 mg/L的MS培养基上,愈伤组织分化不定芽的比例最高,达49.7%的;所产生的不定芽在1/2 MS+NAA 0.1 mg/L的培养基上的生根率可达89.3%.     

辣椒子叶再生体系及其卡那霉素筛选体系的建立

以中椒2号辣椒为材料,建立了高效的辣椒子叶再生体系和卡那霉素筛选体系。结果表明,最佳的不定芽诱导培养基为MS+BA5.0 mg/L+IAA0.5 mg/L+AgNO36.0 mg/L,最佳的不定芽伸长培养基为MS+BA5.0 mg/L+IAA0.5 mg/L+GA32.0 mg/L+AgNO36.0mg/L,最佳的生根培养基为MS+IAA1.0 mg/L,卡那霉素最终筛选浓度为50 mg/L。     

天蓝刺头组织培养及无性系建立

以生长旺盛的天蓝刺头生长点为外植体,以附加不同浓度的BA、IAA、IBA、NAA、2,4-D、GA的1/2 MS或1/3 MS为培养基,进行了天蓝刺头生长点生长、不定芽分化、试管苗生根、试管苗移栽与扦插和试管苗移植的研究.结果表明:1/2MS+BA 0.2 mg/L+NAA 0.1 mg/L是芽生长的理想培养基;1/2MS+AgNO31.2 mg/L+BA 0.9 mg/L+NAA 0.1 mg/L是天蓝刺头分化培养的理想培养基;1/3MS+IAA 0.3 mg/L是天蓝刺头试管苗生根培养的理想培养基;炉灰渣和河沙是试管苗移栽和扦插的理想基质;移植于山坡上的试管苗生长旺盛,根系发达.     

远志茎愈伤组织无性系建立的研究

为保护野生资源,实现人工栽培,以远志的叶片、嫩茎和嫩根为材料,采用组织培养的方法,进行愈伤组织的诱导和分化,试管苗的生根、移栽和定植的研究,建立远志嫩根无性系。结果表明:MS+BA 0.5 mg/L+2,4-D 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L是嫩根愈伤组织诱导培养和继代培养的理想培养基;MS+BA 0.8 mg/L+NAA 0.1 mg/L+AgNO3 1.8 mg/L和MS+BA 0.8 mg/L+NAA 0.1 mg/L+AgNO3 2.1 mg/L 2种培养基是嫩根愈伤组织分化培养的理想培养基;1/4 MS+NAA 0.2 mg/L是不定芽生根培养和试管苗生根继代培养的理想培养基;定植成活的试管苗保持了野生远志的所有生物学性状。     

贡菊再生体系建立及羧苄青霉素浓度筛选

以贡菊试管苗叶片为外植体,研究了影响不定芽分化和生根的因素,旨在建立贡菊高效的再生体系,同时探究了羧苄青霉素浓度对叶片不定芽分化的影响,为贡菊育种奠定基础。结果表明:在MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.6 mg/L的培养基中,贡菊试管苗叶龄为25 d的叶片中愈伤组织诱导和不定芽分化率达到最高(88.4%),每个叶盘平均分化4.6个不定芽。当MS培养基中的IBA浓度为0.25 mg/L时,最适合贡菊试管苗根的生长,根长为4.5 cm,根数达15条,同时地上部茎叶生长也较好。低于250 mg/L的羧苄青霉素不影响不定芽愈伤组织中的诱导,但浓度高于500 mg/L时,抑制不定芽的分化。