甘蓝根系再生植株技术研究

【目的】研究甘蓝根系再生植株技术,为小孢子单胚再生双单倍体(DH)植株当年快速扩繁提供参考。【方法】以甘蓝DH15-1A的根段为外植体,设置预培养后再进行共培养和直接共培养2种培养方式,共培养的培养基为MS+4.5mg/L 6-BA+6mg/L AgNO_3,再向其中添加不同质量浓度(0.045,0.03,0.025,0.018和0.015mg/L)的NAA,筛选适宜的培养方式和NAA质量浓度;选择根龄分别为15,20和25d的DH15-1A的根段在适宜培养基上培养,比较根龄的诱导效果;以DH15-1A、DH15-2B和DH15-3C无菌植株苗的须根作为外植体,分析基因型对植株再生的影响。【结果】采用直接共培养并选用MS+0.030mg/L NAA+4.5mg/L 6-BA+6mg/L AgNO_3培养基可获得甘蓝根段诱导培养的最佳效果,其中愈伤诱导率、外植体诱导率和不定芽诱导率均最高,分别达100.0%,90.0%和430.0%,培养3周后分化芽生长健壮,叶片翠绿;根龄20d外植体的愈伤诱导率最高,达96.0%,并且愈伤分化芽点多,芽点周围褐化少,外植体诱导率和不定芽诱导率均最高,分别为84.0%和420.0%。DH植株基因型是决定根系再生植株效果的一个主要因素,3个供试基因型中,以DH15-2B根段的再生效果最好,愈伤诱导率、外植体诱导率和不定芽诱导率分别为83.3%,76.7%和430.0%。【结论】选用DH15-2B基因型甘蓝20d的根段在MS+0.03mg/LNAA+4.5mg/L 6-BA+6mg/L AgNO_3培养基上培养,最有利于根段再生植株形成,植株再生率高达100%。     

杜仲愈伤组织诱导和植株再生体系的建立

【目的】研究在BA、NAA、IBA、2,4-D等激素作用下,杜仲愈伤组织诱导、愈伤组织诱导丛生芽及丛生芽诱导生根各阶段的最佳培养基配方,建立杜仲植株再生体系,为杜仲转基因研究提供基础材料。【方法】以杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段为外植体,使用BA、NAA、IBA、2,4-D等激素,配制成不同质量浓度的培养基,进行杜仲愈伤组织诱导,同时分析愈伤组织诱导丛生芽和丛生芽诱导生根培养基的最佳配方,建立杜仲植株的再生体系。【结果】杜仲愈伤组织诱导的培养基分别为:成熟胚MS+BA 2.0mg/L+NAA 2.5mg/L,诱导率77.8%;幼嫩胚MS+BA 0.5mg/L+2,4-D 2.0mg/L,诱导率88.9%;叶片MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L,诱导率100%;茎段MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,诱导率为100%。愈伤组织诱导不定芽形成的适宜培养基为MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L,不定芽诱导率为88.9%,增殖系数为3±1;杜仲在1/4MS的基本培养基中生根最好,生根率达80%,激素的存在反而会抑制生根。【结论】杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段均可通过愈伤组织途径诱导不定芽的形成,并诱导生根,建立杜仲愈伤组织再生体系,但不定芽的增殖系数较低。     

藏红花愈伤组织的诱导及植株再生

以藏红花(Crocus sativus L.)当年新生小球茎为材料,在MS+0.5 mg/L BA+1.0 mg/L NAA+7%CM(椰乳)培养基上进行初代培养,再转入MS+5 mg/L BA+5 mg/L NAA中进行愈伤组织的诱导,黑暗条件下继代1-2次,51 d就可以获得高诱导串的愈伤组织,愈伤诱导率可达65%.将愈伤组织转入分化培养基MS+5 mg/L BA+5 mg/L NAA中分化丛生芽,丛生芽诱导率高达95%,将丛生芽分成单个植株,最终形成完整再生植株.     

菊花叶片离体高效再生体系的建立

本文报道了以菊花叶片为外植体，诱导植株再生，建立高效植株再生体系。获得诱导愈伤组织、芽和根的最佳培养基。在有6-BA、NAA的MS培养基上获得较高的愈伤组织诱导率，在有2，4-D的培养基上其愈伤组织诱导率很低。带有愈伤组织的外植体转移到有6-BA、NAA的MS培养基上催化芽的产生，并筛选出能直接诱导芽再生的培养基(MS 6-BA(3mg／L) NAA(1mg／L))。AgNO3可明显提高芽的再生率。茎段在1／2MS和有IBA或NAA的1／2MS培养基上诱导生根。生根的小苗在温室里生长良好。     

川芎的组织培养技术研究

探索川芎的不同组培条件,优化其诱导和分化培养基。以川芎根、茎段和叶片作外植体进行组织培养,获得了大量的组培苗,建立了相应的植株再生系统。川芎根诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 1.2 mg/L;茎段及叶片诱导愈伤组织的最佳培养基均为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L;根愈伤组织分化不定芽的最佳培养基为MS+6-BA 2.2 mg/L+IAA 0.3 mg/L;茎段及叶片愈伤组织分化不定芽的最佳培养基为MS+KT 2.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L。根外植体在愈伤组织、分化不定芽和生根方面的诱导率分别为84%、86%和87%;茎段和叶片愈伤组织的诱导率达到92%和96%,其不定芽分化率为98%,生根率为93%。经炼苗后,获得的组培苗的移栽成活率达98%。提出了优化激素搭配的培养基,得到了高效的诱导率、分化率和生根率。     

白魔芋快繁体系研究

以优良白魔芋新品种——大青秆不同组织为外植体,进行愈伤组织的诱导和植株再生,试验结果表明:以叶柄为外植体,污染率低,愈伤诱导率达85.71%,继代培养中以MS BA2mg/L NAA0.01mg/L作为芽分化增殖的最佳培养基,将芽转接到MS NAA0.5mg/L生根培养基上诱导生根,生根率达100%。     

桑树毛状根再生条件研究

为建立桑树毛状根的再生体系,以桑树毛状根作为外植体,研究不同质量浓度6-BA和NAA配比对桑树毛状根愈伤组织诱导和不定芽分化的影响,并对再生植株进行PCR检测。结果表明,桑树毛状根的最佳愈伤组织诱导培养基为MS+0.2mg/L 6-BA+2.0mg/L NAA,最佳不定芽分化培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA,3周愈伤组织不定芽分化率为16.7%。应用该不定芽获得再生植株的根系生长旺盛,叶片提取的基因组中含有rolB生根基因。     

灰楸体外植株再生体系建立

以灰楸茎段为试验材料,进行了灰楸的植株再生研究.结果表明:灰楸茎段愈伤组织和芽诱导最适培养基为MS+0.3mg/L IBA+5 mg/L BA,丛生芽诱导最适培养基为MS+0.1 mg/L NAA+12 mg/L BA,根诱导最适培养基为1/2MS+0.5mg/L NAA.     

野生梭梭的离体培养和植株再生

以野生梭梭带腋芽茎段为外植体进行离体再生研究,探讨不同植物生长调节剂、硝酸银和蔗糖的质量浓度对其愈伤组织诱导、不定芽分化和生根的影响。结果表明,野生梭梭带腋芽茎段愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.0 g/L,诱导率为100%;不定芽分化的最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+TDZ 1.0 mg/L+AgNO33.5 mg/L+蔗糖26 g/L+琼脂6.5 g/L,不定芽分化率为97.8%;影响野生梭梭再生的最主要因素是NAA,其次是TDZ和AgNO3,蔗糖影响最小。     

令箭荷花组织培养与植株再生的研究

采用令箭荷花植株顶端幼嫩茎段作为外植体,以MS为基本培养基,采用不同激素配比分别诱导获得了愈伤组织、丛生芽和根。筛选出了适合令箭荷花植株再生的最佳激素浓度配比:6-BA 2 mg/L+NAA 0.2 mg/L适合愈伤组织的诱导,6-BA 1 mg/L+NAA 0.1 mg/L适合诱导丛生芽,IBA 0.2 mg/L有利于根的分化。     

防风愈伤组织诱导及植株再生体系研究

以防风为材料,研究不同外植体、激素组合、培养基对愈伤组织诱导及植株再生的影响。结果表明,茎段是防风组织培养较为理想的外植体材料。诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+1.5 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L KT+1.0 mg/L 6-BA,最高出愈率为96.7%;诱导不定芽的最佳培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,最高诱导率为75%;诱导根的最佳培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA,生根率达65%;组培苗的移栽成活率达80%。     

盐桦(Betula halophila)愈伤组织的高效诱导和不定芽的分化

设计不同激素、不同水平的单因子试验和正交试验,统计盐桦出愈率、分化率,筛选出诱导盐桦愈伤组织的最适外植体和最适培养基.盐桦愈伤组织高效诱导和不定芽分化的最适外植体为茎段;诱导愈伤组织的最适培养基为:LS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.4;愈伤组织分化抽枝的最适培养基为:LS+BA 0.5 mg/L+NAA0.02 mg/L;高效诱导愈伤组织和不定芽分化的最适培养基为:LS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L.琼脂7;,蔗糖浓度20 g/L.愈伤组织诱导率和不定芽分化率分别达到82;和93.6;以上.     

羊踯躅嫩叶离体培养和植株高效再生技术研究

【目的】建立羊踯躅嫩叶离体培养及植株高效再生体系。【方法】以羊踯躅新生嫩叶为外植体,筛选嫩叶愈伤组织诱导、再分化及生根培养基,并以再生植株茎节为试材,建立高效植株再生体系。【结果】最适合羊踯躅嫩叶愈伤组织诱导的培养基为1/2 DR+2.40 mg/L 2ip+0.80 mg/L NAA,诱导率为99.5%;愈伤组织再分化的最佳培养基为1/2 DR+2.90 mg/L 2ip+0.01 mg/L NAA+1.75 mg/L KT,分化率为99.7%;适宜生根的培养基为1/4 DR+0.06 mg/L ZT+0.02 mg/L NAA,生根率达99.0%。利用再生植株茎节的快繁结果表明,在28 d的培养周期内,每节段平均增殖达5倍以上。【结论】成功建立了羊踯躅嫩叶愈伤组织诱导、再分化芽苗和植株高效再生体系,可以满足羊踯躅工厂化育苗的需要。     

轮叶党参叶片的组织培养研究

以轮叶党参叶片为外植体,研究了培养基及不同激素组合对愈伤组织诱导及植株再生的影响。结果表明,叶片作为外植体可以比较容易地诱导出愈伤组织,最佳诱导培养基为MS+2,4-D 1.0mg/L+6-BA 1.0mg/L+KT 0.5mg/L,最高出愈率为94.2%;诱导不定芽的最佳培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L,最高诱导率可达69.2%;根诱导的最佳培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA 0.5mg/L,生根率达85.9%,建立了较为完善的轮叶党参再生体系。     

甜魔芋芽鞘分化及植株再生条件的研究

以甜魔芋芽鞘为外植体,进行愈伤组织诱导、芽分化及植株再生的研究.结果表明:芽鞘在培养基MS +6-BA0.6 mg/L + NAA 0.1 mg/L+蔗糖 30g/L上愈伤组织诱导率最高,达92.3 %;芽分化最适培养基是MS +6-BA 1.5 mg/L + NAA 0.5 mg/L+蔗糖 30g/L,分化率达93.8 %;切割后的芽在生根培养基1/2MS +NAA 0.1mg/ L+蔗糖 30g/L上,能100%形成完整植株.     

甘薯品种南薯88的组织培养及植株再生研究

[目的]为南薯88的离体筛选及遗传转化奠定基础。[方法]以南薯88的叶片和叶柄为外植体,置于不同激素配比的培养基中,进行组织培养及植株再生,研究不同激素及外植体对南薯88植株再生的影响。[结果]单独使用6-BA、NAA诱导愈伤组织的效果不理想。过高浓度的2,4-D不利于外植体根的形成,也不利于芽的诱导。在MS+NAA1 mg/L+6-BA0.5 mg/L、MS+2,4-D0.05 mg/L+KT1 mg/L培养基中,两种外植体的出愈率均达100%,根分化率均达100%,叶片的芽分化率分别为20%、7%,叶柄的芽分化率均为7%,成功获得再生植株。相同的培养基,不同外植体的愈伤组织生长情况差异不大,器官的分化表现出一定的差异。[结论]南薯88组织培养较适宜的培养基为MS+NAA1 mg/L+6-BA0.5 mg/L、MS+2,4-D0.05 mg/L+KT1 mg/L。南薯88叶片的分化能力大于叶柄。     

不同品种软枣猕猴桃愈伤组织诱导及植株再生

以软枣猕猴桃(Actinidia arguta)品种"魁绿"和"佳绿"的无芽茎段、叶片、叶柄为外植体,研究外植体及生长调节剂组合对软枣猕猴桃愈伤组织诱导及植株再生的影响,从而建立"魁绿"和"佳绿"的离体再生体系。结果表明:6-BA对软枣猕猴桃愈伤组织的诱导效果好于KT,"魁绿"和"佳绿"叶片分别在MS+2,4-D0.5 mg/L+6-BA 2 mg/L和MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 1 mg/L的培养基上愈伤诱导率最高,分别为93.3%和96.2%。在不定芽再生培养过程中,6-BA和TDZ不能诱导不定芽发生,而ZT对不定芽的分化具有较好的诱导作用;"魁绿""佳绿"均在培养基MS+NAA 0.05 mg/L+ZT 3 mg/L上不定芽分化率最高,分别为72.0%、37.8%。不同品种及不同外植体的愈伤组织诱导率和不定芽再生率均存在差异,"魁绿"的不定芽分化率明显高于"佳绿";无芽茎段和叶片的愈伤组织诱导率均90%;叶片的不定芽分化率最高,显著高于茎段和叶柄。再生苗在培养基1/2 MS+IBA 0.1 mg/L上的生根率为97%。     

榨菜下胚轴离体培养植株再生体系的建立

以榨菜(Brassica juncea Czern.et Coss.var.tumida)B2-1014的下胚轴为外植体,研究了不同浓度的激素以及不同激素组合对愈伤组织、不定芽和不定根诱导的影响.结果表明,榨菜茎段离体培养的植株高频再生体系中愈伤组织诱导培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.8 mg/L NAA,不定芽诱导培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,不定根诱导培养基为MS+0.2 mg/L NAA,在此培养条件下,B2-1014愈伤组织的诱导率达90.0％,不定芽诱导率达92.2％,不定根诱导率达97.8％.     

均匀设计在柑橘砧木离体培养再生体系建立中的应用

[目的]建立枳壳离体培养再生体系。[方法]采用均匀设计研究了不同时期枳壳茎尖、茎段、芽的愈伤组织诱导、增殖、分化、及生根情况。[结果]愈伤组织诱导率及生长量由高到低为春梢夏梢秋梢冬梢;不同时期外植体诱导愈伤组织所需生长调节物质种类、浓度、配比不同,春梢茎段外植体诱导愈伤组织以NAA 0.2 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L+KT 0.2 mg/L+IBA 0.1 mg/L为最好,夏梢茎段外植体诱导愈伤组织以NAA 0.2 mg/L+2,4-D 4.5 mg/L+KT 0.2 mg/L+IBA 0.1 mg/L为最好。愈伤组织增殖的最优配方是MT+6-BA 0.25 mg/L+NAA 0.2 mg/L。在MT+6-BA 0.25 mg/L+IBA 0.3 mg/L培养基上不定芽分化效果好,不定根发生率、根数、根的质量均在1/2MT+NAA 4 mg/L培养条件下最佳。[结论]为枳壳快速繁殖、脱毒技术和相关细胞工程的研究奠定基础。     

黑莓叶片组织培养及植株再生的初步研究

以美国黑树莓叶片作为外植体,以MS为基本培养基,添加不同浓度的6-BA、NAA或IAA进行愈伤组织诱导及植株再生试验.结果表明:树莓叶片外植体在培养基MS+6-BA 2.0～ 4.0 mg/L+NAA(IAA)0.01～0.5 mg/L都能不同程度地形成愈伤组织 ,但以MS+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L和MS+6-BA 4.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L愈伤组织的诱导率最高,诱导率可达100%;所试验的各种不定芽分化培养基,都能不同程度地诱导愈伤组织分化出不定芽,在添加6-BA 2.0 mg/L和NAA 0.01 mg/L的MS培养基上,愈伤组织分化不定芽的比例最高,达49.7%的;所产生的不定芽在1/2 MS+NAA 0.1 mg/L的培养基上的生根率可达89.3%.