温度和pH对异育银鲫消化酶稳定性及其活力的影响

从酶学分析的角度研究温度、pH值对异育银鲫Carassius auratus gibelio消化酶稳定性及其活力的影响.结果显示,蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶在30～50℃分别保留相对酶活力达82%、87%和90%以上,蛋白酶相对酶活力在pH值6.0～9.2达71%以上,淀粉酶相对酶活力在pH 5.8～9.0达75%以上,纤维素酶在pH值3.6～7.0保留相对酶活力达70%以上,在不同温度条件下,蛋白酶活性顺序为前肠＞后肠＞中肠,淀粉酶活性顺序为中肠＞前肠＞后肠,纤维素酶活性顺序为后肠＞中肠＞前肠.蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶获得较大活性的部位分别分布在前肠、中肠和后肠,其最适温度分剐为25～30℃、35～40℃和20～25℃.在不同的pH值条件下,蛋白酶活性顺序为中肠＞后肠＞前肠,淀粉酶活性顺序为后肠＞中肠＞前肠,纤维素酶活性顺序为后肠＞前肠＞中肠.蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶获得较大活性的部位分别分布在中肠、后肠和后肠,其最适pH值分别为7.6～8.4、6.4和3.6～4.8.表明消化酶对热和pH值具有一定的稳定性;蛋白酶、淀粉酶在适宜条件下具有较大酶活力.     

壳聚糖固定化海洋低温碱性蛋白酶YS-80-122的研究

以壳聚糖为固定化载体,采用吸附交联法,以戊二醛为交联剂,对海洋低温碱性蛋白酶YS-80-122进行固定化。通过单因素和正交试验优化得到最佳固定化条件为pH7·0,戊二醛终浓度0·2%,吸附时间50min,酶载体比例40mg/g,交联时间16h,交联温度10℃,固定化酶酶活回收可达47·52%。固定化酶和游离酶的最适作用温度均为30℃,最适作用pH分别为9·0和10·0,相比游离酶,固定化酶可在更宽的温度和pH范围内发挥高活性,且其温度和pH稳定性得到显著提高。室温下经冷冻干燥的固定化酶贮存90d后活性基本保持不变,贮藏半衰期约为190d。以酪蛋白为底物,重复使用7次后酶活仍保留有79·2%,操作半衰期约为21次使用率。     

斑点叉尾鮰源嗜麦芽寡养单胞菌胞外蛋白酶的纯化及性质研究

采用硫酸铵盐析，DEAE Sephadex A－50凝胶层析等方法从嗜麦芽寡养单胞菌胞外产物中提纯了一种分子量为45.7 ku的单一多肽蛋白酶。该酶对小鼠和斑点叉尾鮰具有明显的致死作用，其LD50分别为4.33 μg•g-1体重和3.49 μg•g-1体重。酶的最适温度为20 ℃，热稳定性差，100 ℃作用15 min酶活完全丧失，最适pH为9.0，PMSF对酶活无影响，部分金属离子如Ca2+、Hg2+、Cu2+能使酶活性明显下降，而Co2+对酶有一定程度的激活作用，EDTA能完全抑制酶活性，表明该酶为一种金属蛋白酶。图1表4参29     

卤虫无节幼体谷胱甘肽转硫酶部分活性及性质

采用紫外分光光度法测定了卤虫无节幼体谷胱甘肽转硫酶(GST)的活性,并研究温度、pH对GST活力的影响及酶的冷、热稳定性。试验结果表明,卤虫无节幼体内存在GST,酶的最适温度为45℃,最适pH为7.0,该酶高温下不稳定,60℃时酶基本失活。低温下较稳定,4℃保存12 h,活力下降50%;-20℃保存12 h,活力下降20%。     

罗非鱼肠蛋白酶的分离纯化及其性质

以罗非鱼肠为原料,采用超声波辅助提取技术、电泳技术和层析技术等对罗非鱼肠道蛋白酶进行研究,结果表明:将鱼肠匀浆经超声波提取的粗酶液,用30%～70%的硫酸铵盐进行盐析、HitrapTM Q FF阴离子交换柱纯化及Sephadex G-100凝胶柱分离纯化,得到罗非鱼肠蛋白酶纯品,其比活为335U/mg,得率为32.8%;SDS-PAGE电泳为单一蛋白酶带,分子量为28ku。该酶最适pH为8.0～8.5,在pH7.0～9.0的条件下稳定;最适温度为37～42℃,热稳定性好;该酶的Km值和Vmax值分别为0.605g/L和9.407μg/min。金属离子Ag+、Pb2+对蛋白酶有完全抑制作用,Na+、K+对该酶无抑制作用。丝氨酸蛋白酶抑制剂能完全抑制该酶活性,胃蛋白酶抑制剂和脲素对该酶有一定抑制作用,EDTA没有明显抑制作用,DTT能激活该酶活性,该酶为丝氨酸蛋白酶。     

pH及温度对半滑舌鳎幼鱼消化酶活性的影响

研究了不同pH及温度对半滑舌鳎幼鱼三种主要消化酶活性的影响。实验结果显示半滑舌鳎胃、肝胰腺、肠蛋白酶的最适pH分别是3.0、7.5、8.0;淀粉酶的最适pH分别是8.0、7.5、7.5。随着温度的增加,半滑舌鳎消化酶的活性均呈现先升高后下降的趋势,半滑舌鳎胃、肝胰腺、肠蛋白酶的最适温度分别是50℃、45℃、40℃;脂肪酶最适温度分别是35℃、45℃、40℃;胃和肠淀粉酶最适温度均为20℃;而在15～30℃范围内,肝胰腺均呈现高的淀粉酶活性。不同组织酶活力比较:蛋白酶活力以肝胰腺>胃>肠;淀粉酶活力是肠>胃>肝胰腺;脂肪酶活力以胃>肝胰腺和肠,肠道中以前肠的消化酶活力最高。     

温度和pH值对斜带髭鲷蛋白酶、淀粉酶活性的影响

研究了温度和pH值对斜带髭鲷Hapalogenys nitens蛋白酶、淀粉酶活力的影响。结果表明,斜带髭鲷胃内pH值范围为4.9～5.4;肝胰脏pH值为5.8～6.2;肠道pH值为6.5～6.9。蛋白酶活性随温度的上升而增加,在40℃达最大,40℃以上酶活性随温度的上升而下降。在不同消化器官中,蛋白酶活性大小顺序为：胃〉前肠〉幽门盲囊〉后肠〉肝胰脏。在15～50℃范围内,斜带髭鲷消化道不同部位淀粉酶活性的最适温度均为35℃,淀粉酶活性由高到低顺序为：肝胰脏〉幽门盲囊〉前肠〉后肠〉胃。在pH值为2.2～7.6范围内,胃蛋白酶活性的最适pH值为2.8;在pH值为4.8～8.0范围内,其他消化器官蛋白酶的最适pH值均为7.2;在最适pH值下,各消化器官中的蛋白酶活性由高到低顺序为：前肠〉幽门盲囊〉后肠〉肝胰脏。在pH值为4.8～8.0范围内,胃淀粉酶活性的最适pH值为6.0,肠、肝胰脏与幽门盲囊淀粉酶的最适pH值均为6.8,活性由高到低顺序为：肝胰脏〉幽门盲囊〉前肠〉后肠〉胃。在最适温度和pH值下,蛋白酶活性由高到低顺序为：胃〉前肠〉幽门盲囊〉后肠〉肝胰脏;淀粉酶活性由高到低顺序为：肝胰脏〉幽门盲囊〉前肠〉后肠〉胃。     

饲用植酸酶和纤维素酶最佳酶解条件的研究

采取正交试验的方法，研究植酸酶和纤维素酶对配合饲料的酶解效果以及酶解的最适条件。结果表明：饲料经植酸酶酶解后，无机磷含量增加了6．1％～47．2％，平均增加了25．9％；植酸酶酶解的最适条件为：55℃，pH4．6，作用时间为80分钟。饲料经纤维素酶作用后，葡萄糖含量增加了36．7％-80．7％，平均增加了54．8％；在50℃，pH5．0，作用时间为80分钟时，纤维素酶的酶解效果最好。     

温度对泥鳅消化酶活性影响的研究

在5～75 ℃以10 ℃为梯度差,pH 7.5时研究了温度对泥鳅肝胰脏及肠道不同部位消化酶活性的影响.试验结果表明,泥鳅肝胰脏淀粉酶活性最适温度为45 ℃,肠道各部位淀粉酶活性最适温度为35 ℃;蛋白酶活性最适温度肝胰脏及前肠为55 ℃,中肠及后肠为45 ℃;肝胰脏及中肠脂肪酶活性最适温度为55 ℃,前肠及后肠脂肪酶活性在45 ℃时最高.     

渤海口虾蛄消化酶活性与酶学性质初步研究

探讨了渤海口虾蛄的消化酶活性及部分酶学性质。结果表明：口虾蛄的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性均以肝胰腺最高,胃最低;口虾蛄胃的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的最适pH均为6,肝胰腺和肠道淀粉酶和脂肪酶的最适pH均为7,肝胰腺和肠道蛋白酶的最适pH均为8;口虾蛄肝胰腺淀粉酶最适温度为30℃,胃的蛋白酶和淀粉酶及肠道淀粉酶的最适温度均为35℃,胃脂肪酶、肝胰腺蛋白酶和脂肪酶及肠道蛋白酶和脂肪酶的最适温度均为40℃。     

温度、pH对克氏原螯虾血清酚氧化酶活力及稳定性的影响

以克氏原螯虾(Procam barus clarkii)为材料,研究温度、pH对其血清酚氧化酶活力及稳定性的影响。实验以L-dopa为反应底物,在试验设计的温度范围(20,30,40,50,60,70℃)内,测得酚氧化酶活力的最适温度为20℃,随温度升高酶活力迅速下降,该酶在20~40℃范围内表现出较高的热稳定性,而30℃时最稳定;该酶的最适pH 7.0,在pH 6.0和7.0的缓冲系统中表现出较强的稳定性。     

金乌贼肌肉中三甲胺脱甲基酶的分离纯化及酶学性质

为了提取纯化金乌贼肌肉中的三甲胺脱甲基酶(TMAOase),本研究采用含有0.1 mol/L NaCl、pH 7.0、浓度为20 mmol/L的三羟甲基氨基甲烷(Tris)-醋酸缓冲液提取粗酶液,经透析、浓缩处理后,通过DEAE-52阴离子交换柱层析和Sephacryl S-300柱层析得到了纯化的TMAOase,并对其酶学性质进行了研究。结果显示,经Sephacryl S-300柱层析的TMAOase相比粗酶纯化了209.54倍;粗酶和纯化酶的最适温度分别为55和50°C,当温度高于最适温度时,酶活性开始出现显著下降,粗酶在80°C仍残留21.9%的活性;而纯化酶在80°C时,几乎检测不到酶活;粗酶和纯化酶的最适p H均为7.0,中性条件下表现稳定,在酸性和碱性条件下稳定性下降,p H为9.0时,粗酶残留60.7%的活性,而纯化酶的活性仅为20.5%。以双倒数作图法(Lineweaver-Burk法)测得纯化的TMAOase的Km值为22.8 mmol/L;经SDS-PAGE电泳分析,测得其分子量为21.3 ku;在化学物质中,柠檬酸和CaCl_2对酶活性具有显著的促进作用,H_2O_2和Na_2S对TMAOase活性有显著抑制作用。     

产海洋细菌MP-2酯酶菌株的鉴定及酯酶理化性质的研究

从渤海海泥样品中分离获得1株新型酯酶菌株,经鉴定为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis。所得的MP-2酯酶的最适作用温度范围50～70℃,在60℃表现出了最高活性,属于耐热酶;最适作用pH为10,属于碱性酶,其pH值作用范围比较窄;具有良好的热稳定性;金属离子Co2＋,Li＋对酶具有激活作用,Ca2＋对酯酶的活力没有显著影响,化学试剂SDS、EDTA及Tween-20对酯酶的抑制效果显著,对常见有机溶剂具有良好的耐受力;该酯酶对碳链长短不同的底物表现出不同的酶活。     

Expression of recombinant phytase of Bacillus subtilis E20 in Escherichia coli HMS 174 and improving the growth performance of white shrimp,Litopenaeus vannamei,juveniles by using phytase‐pretreated soybean meal‐containing diet

To produce a thermostable and neutral phytase (phy) of Bacillus subtilis E20 in Escherichia coli HMS174 and evaluate its efficiency in improving growth performance. The phy C of B. subtilis E20 was expressed in E. coli HMS 174, and then the 42‐kDa recombinant phy C was purified by Ni‐NAT and analysed by SDS–PAGE. The recombinant phy C had optimal ranges of pH of 6 ~ 7 and temperature of 50 ~ 60 °C. A thermostability analysis showed that the enzyme is a thermostable phytase, and around 33% of residual activity was detected after being incubated at 90 ~ 100 °C for 10 min. The recombinant phy C‐pretreated soybean meal for feed preparation improved white shrimp, Litopenaeus vannamei, growth and feed efficiency. Overall, the neutral and thermostable phy C is suitable for aquafeed, and it is able to improve the nutritional utilization, resulting in enhanced shrimp growth and reduced feed costs.     

驼海燕内脏中蛋白酶的提取及其酶学性质的研究

以驼海燕为原料,用丙酮沉淀法制备蛋白酶粗酶,并对其酶学性质进行研究。试验结果表明,提取蛋白粗酶的最佳条件为:原酶液与丙酮的体积比为1∶1.6;蛋白酶反应的最适温度为45℃,最适pH值为8.1;pH为7～9时可保持较高的酶活力;蛋白酶的酶活力在20～50℃基本稳定。酶促反应结果表明,Na+、K+、Li+、Mg2+对蛋白酶活力具有促进作用,而Zn2+、Cu2+、Hg2+能抑制蛋白酶的活力,EDTA对蛋白酶活力的影响甚微。酶动力学方程表明,最大反应速度vmax=5.99U/mL,米氏常数Km=0.69g/mL。     

克氏原螯虾酚氧化酶部分生化特性的研究

以克氏原螯虾(Procambarus clarkii)酚氧化酶(PO)为材料,采用L-DOPA为反应底物,分光光度计测定不同温度和pH条件下PO活力,研究克氏原螯虾PO的特性,为其免疫学研究及优化PO准确测定方法提供依据。结果显示PO活力最高时的温度为35℃,低于和高于35℃活力逐渐下降,45℃以上活力迅速下降;0℃仍具有最高活力的24%。在pH4.0～9.5内PO均具有活力,鳃组织最佳pH5.5,血清最佳pH6.5。因此测定克氏原螯虾PO活力的最佳参数为温度35℃,pH5.5(鳃)或6.5(血清)。以上结果说明冰浴终止反应法测定克氏原螯虾PO活力会影响结果的准确性,要慎用。     

齐口裂腹鱼的人工繁殖与苗种培育

流水培育齐口裂腹鱼,选择3龄以上雌雄亲鱼各60尾,使用绒毛膜促性腺激素、促黄体素释放激素A2和地欧酮3种药物混合对雌鱼进行注射催产,催产率为85%,受精率为79%,适宜催产的水温为9～16℃;在14～16℃的水温条件下,受精卵在202h内全部出膜,孵出仔鱼约61万尾,孵化率为80%。对孵出的61万尾仔鱼进行了逾90d的培养,共计出塘45万尾,成活率约为74%。试验结果表明,人工培育的齐口裂腹鱼亲鱼性腺能够发育成熟,经催产能成功繁殖。     

大泷六线鱼胚胎发育及其与水温的关系

对大泷六线鱼胚胎发育过程中各期特征及发育时间进行了详细的观察记录,并进行显微拍照。大泷六线鱼卵为球形沉性卵,端黄卵,卵径1.62～2.32mm,油球小而多且较分散,卵膜较厚,透明度差。温度实验结果显示,孵化水温对胚胎孵化有显著影响,适温范围内孵化时间随水温的升高逐渐缩短,孵化率随水温的升高呈先升高后降低的趋势,在16℃时达到最大值79%;畸形率随水温的升高呈先降低后升高的趋势,在16℃时达到最小值6%;在水温16℃、盐度为31、pH=8.0的自然海水中,光照条件600～1000lx,大泷六线鱼胚胎发育历时20d,仔鱼破膜而出。     

简单双眉藻培养的生态条件

采用单因子的方法,研究了生态因子温度、光照、盐度及pH对简单双眉藻生长的影响。结果表明,简单双眉藻生长的最适温度28~31℃,最适光照度4200~5200 lx,最适盐度15~20,最适pH 8~9。简单双眉藻是一种广温、广盐和对光照变化适应较强的底栖硅藻。     

海洋低温溶菌酶的制备及酶学性质

对一株海洋杆菌产低温溶菌酶的分离纯化及理化性质进行了研究。20℃下将菌株在含有葡萄糖、酵母膏、胰蛋白胨的标准海水培养基中震荡培养40h。获得活性大约为150U/ml的溶菌酶上清液。上清液经SMB-20生物型错流超滤系统浓缩、透析及CM-Sepharose-FF阳离子交换层析（