酵母异源互补法鉴定MbNramp1基因的功能

【目的】研究MbNramp1基因的功能。【方法】通过异源互补试验鉴定该基因转运铁的功能,并对MbNRAMP1蛋白进行亚细胞定位研究。【结果】MbNramp1基因转化酵母突变株DDY4在缺铁的培养基上恢复生长。在供试BPDS浓度的培养基上,MbNramp1基因转化酵母突变株DDY4生长状况均明显好于空载体转化后的突变株。培养基中BPDS增加到15μmol·L-1时,转化了MbNramp1的酵母细胞生长状况与野生型相差无几。在30μmol·L-1BPDS时,MbNramp1转化的细胞与低浓度BPDS相比生长延缓,但是明显优于空载体转化的DDY4突变株。与较低浓度BPDS相比,野生型酵母(DY1457)的生长量也减少了。亚细胞定位表明,MbNRAMP1主要位于部分质膜上而非整个膜上。【结论】初步证明MbNramp1编码具有功能的铁转运蛋白,能够使酵母吸收铁的突变株恢复突变,MbNRAMP1主要位于部分细胞膜上行使铁营养转运功能。     

月季茎尖玻璃化法超低温保存技术研究

研究月季茎尖玻璃化法超低温保存技术,以期为月季茎尖超低温保存提供理论和实践依据.试验选用金奖章、粉玛雅、韩红、博共4个月季品种进行简单玻璃化法和玻璃化超低温保存试验.结果表明:简单玻璃化法保存时.不同品种的茎尖存活率差异显著,金奖章的茎尖存活率最高(55.3%);通过研究预培养、装载处理和植物玻璃化溶液PVS2脱水时间对粉玛雅茎尖存活率的影响,初步构建了月季茎尖玻璃化法超低温保存体系,即将长1.0cm的茎尖在含0.3mol·L-1蔗糖的培养基上预培养5～6d后,取1.5mm茎尖,室温下A液(MS+2mol·L-1甘油+0.4mol·L-1蔗糖)装载40min或B液[60%PVS2+40%(MS+0.15mol·L-1蔗糖)]装载30min,用PVS2(300g·L-1甘油+150g·L-1乙二醇+150g·L-1二甲基亚砜+0.4mol·L-1蔗糖+MS)于0℃下处理40min,然后液氮保存24h,在40℃水浴中化冻90s,用1.2mol·L-1蔗糖培养液洗涤,最后转入MS+6-BA1.0mol·L-1+IBA0.1mol·L-1上再培养,存活率高于53.3%.     

H2O2对Caco-2细胞氧化应激的影响

研究H2O2对Caco -细胞抗氧化应激能力的影响。试验按培养时间不同分为3组（12,24和48 h）,每组的H2O2浓度分为4个水平（0,50,100和200 μmol·L-1）,细胞培养至12,24和48 h时测定细胞活性,培养上清液和细胞裂解液中的抗氧化指标。结果表明,50 μmol·L-1 H2O2对Caco-2细胞并没有产生明显的氧化损伤,100 μmol·L-1 H2O2对Caco-2细胞产生了可恢复的氧化损伤, 200 μmol·L-1 H2O2则对Caco-2细胞产生了严重的、不可逆的氧化损伤;24 h时细胞的各项清除自由基能力较高,48 h时细胞的氧化损伤加重,细胞产生抗氧化物质的速度减慢。表明100 μmol·L-1 H2O2对细胞产生了比较合适的氧化应激。     

苦瓜愈伤组织的诱导及悬浮培养体系的建立

以苦瓜子叶、上、下胚轴为外植体,在添加不同浓度激素组合的培养基上诱导和继代愈伤组织,比较愈伤组织的状态与生长情况,并对悬浮细胞培养条件进行了优化。结果表明,上下胚轴在添加2,4-D2.0mg·L-1+6-BA4.0mg·L-1或NAA1.0mg·L-1+6-BA4.0mg·L-1的MS培养基上均可诱导出状态良好的愈伤组织,愈伤组织在添加2,4-D0.5mg·L-1+6-BA1.0mg·L-1的继代培养基上能长势最好,添加30g·L-1蔗糖和3.0g·L-1活性炭的B5培养基有利于苦瓜悬浮细胞的快速增殖。     

镉对龙葵种子萌发及子叶抗氧化酶活性的影响

龙葵(Solanum nigrumL.)是Cd超累积植物,可用于植物冶金和Cd污染土壤的植物修复。超累积植物的生理基础研究有助于提高其对Cd的富集效率。龙葵种子在含有不同浓度CdCl(20、30、50、100、150、200μmol·L-1和300μmol·L-1)的琼脂培养基上萌发7d。结果表明,龙葵在200μmol·L-1和300μmol·L-1Cd时发芽率显著降低,而低浓度Cd(30～150μmol·L-1)胁迫下无显著差异;在Cd≥30μmol·L-1时,活力指数、发芽势均显著降低,幼苗的生长受到显著抑制。幼苗生长分析表明:在30～150μmol·L-1Cd处理下根长下降约17%～35%,显著低于200～300μmol·L-1Cd处理(下降79%～90%);株高随Cd浓度的升高逐渐下降。子叶抗氧化酶活性分析表明:100～150μmol·L-1Cd胁迫下,CAT和APX活性显著上升;在Cd胁迫下,SOD活性降低但维持在较高的活性水平。表明龙葵幼苗能忍耐小于150μmol·L-1Cd,抗氧化酶活性在抵抗Cd毒害方面发挥重要作用。     

蕙兰种子无菌萌发及植株再生

以中国传统国兰之一的蕙兰‘大一品'种子为外植体进行无菌萌发,然后对形成的根状茎进行诱导、增殖和成苗.结果表明:种子离体培养在附加HAA0.5 mg·L-1的改良Ms培养基上,3个月后开始萌发形成原球茎;低无机盐浓度的培养基适合蕙兰种子萌发.将原球茎转移到附加NAA2.0 mg·L-1的培养基上后,原球茎逐渐转变为根状茎形式进行增殖.50 ml·L-1椰子汁可大大促进根状茎的诱导和增殖.MS基本培养基中添加0.5～2.0 mg·L-1BA和1 g·L-1活性炭,60 d后根状茎可形成芽苗.     

铜离子胁迫对嗜铁钩端螺旋菌生理特性的影响

研究铜离子胁迫对嗜铁钩端螺旋菌ML-04生理特性的影响.以野生菌嗜铁钩端螺旋菌ML-04和驯化菌嗜铁钩端螺旋菌ML-04-ADP为材料,比较吸附及胞内的总铜含量,驯化菌对闪锌矿的吸附率、zeta电位、傅立叶变换红外光谱、疏水性和氨基酸组成的影响.结果表明:初始时,驯化菌吸附及胞内总铜含量明显高于野生菌,在0.5 mol·L-1CuSO4培养基中培养lh后.驯化菌增加的铜也远比野生菌多,当将驯化菌放入到无铜培养基中培养1h后.总铜含量又显著减少:驯化菌对闪锌矿的吸附率提高了20.76%,驯化菌的等电点从野生菌的4.0提高到5.0.FT-IR结果表明,驯化菌表面产生了更多的蛋白物质.疏水性增强:正十六烷一9K培养基两相分层试验表明,驯化菌和野生菌水相中菌体的数量分别减少了14%和2%:氨基酸组成分析表明,两株菌的蛋白在种类上是有差别的.在高浓度铜离子环境下,驯化菌表面产生更多的蛋白物质,使细菌的疏水性增强.细胞表面的电荷数和等电点发生变化.在pH值2.0时,驯化菌表面带的正电荷大于野生菌,此时闪锌矿带负电荷.静电引力和疏水性的共同作用使驯化菌?闪锌矿的吸附能力大于野生菌对闪锌矿的吸附能力.     

荷兰水仙组织培养再生体系关键技术研究

利用双鳞片法进行荷兰水仙组织培养,研究继代培养过程中影响出芽、小鳞茎形成和生根等的生长因子,并用多效唑(PP333)处理组培材料,研究PP333对继代培养材料生长的影响.结果表明,MS培养基中添加6-BA 1.0 mg·L-1、蔗糖15.0 g·L-1时出芽效果最好;MS培养基中添加6-BA 4.0 mg·L-1、NAA 0.2 mg·L-1、活性炭2.0 mg·L-1、蔗糖60.0 g·L-1时或MS培养基中添加6-BA 2.0 mg·L-1、2,4-D 1.0 mg·L-1、活性炭2.0 mg·L-1、蔗糖90.0 g·L-1时小鳞茎形成效果最好;MS培养基中添加6-BA 1.0 mg·L-1、2,4-D 0.5 mg·L-1、NAA 0.5 mg·L-1、活性炭2.0 mg·L-1、蔗糖30.0 g·L-1时生根效果最好.最适合荷兰水仙组培继代培养材料矮壮的PP333浓度为0.5 mg·L-1.该研究可为荷兰水仙种苗工厂化生产提供技术支持.     

东方百合Tiber叶部组织培养研究

以东方百合(Lilium"Oriental Hybrids")Tiber的嫩叶为材料进行了离体培养与植株再生研究.结果表明,在含有不同浓度NAA与BA的培养基上,叶柄的诱导分化能力明显优于叶片.叶柄的最佳诱导培养基为Ms+NAA 2.0 mg·L-1+BA 0.10mg·L-1;在培养基Ms+NAA 0.50 mg·L-1或2.0 mg·L-1+BA 2.0 mg·L-1上能诱导出愈伤组织.1/2 MS+NAA 0.20 mg·L-1是适宜的生根培养基.培养基中的蔗糖浓度影响再生植株小鳞茎的重量,以60.0 g·L-1为最佳.     

亚洲百合Strawberry and Cream花器官组培快繁技术研究

为完善百合种球繁殖技术体系,对亚洲百合Strawberry and Cream花器官进行组织培养及快速繁殖技术研究。结果表明:不同外植体分化能力不同,由强到弱依次为花瓣,花丝和花柱;花瓣诱导不定芽的最佳培养基为MS+1.00mg·L-1TDZ+0.1mg·L-1NAA,诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2.0mg·L-12.4-D+0.5mg·L-1KT;花丝诱导不定芽的最佳培养基为MS+1.0mg·L-1TDZ+0.5mg·L-1NAA,诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2.0mol·L-12.4-D+1.5mg·L-1KT;不定芽扩繁的最佳培养基为MS+1.0mg·L-1BA+0.1mg·L-1NAA。     

Antibodies to hepatitis B surface antigen potentiate the response of human T lymphocyte clones to the same antigen

Human t-helper lymphocyte clones specific for hepatitis B virus surface antigen (HBsAg) proliferate on stimulation with HBsAg in vitro. Antibodies specific for HBsAg, but no other antibodies, augment this proliferative response. In the presence of antibodies to HBsAg, the maximum response could be achieved at HBsAg concentrations that were 1 percent of those required in the absence of the antibodies. These findings suggest that antigen-specific antibodies exert regulatory controls on T cells that recognize the same antigens.     

Specific expression of hepatitis B surface antigen (HBsAg) in transgenic mice

Two transgenic mice were obtained that contain in their chromosomes the complete hepatitis B virus (HBV) genome except for the core gene. These mice secrete particles of HBV surface antigen (HBsAg) in the serum. In one mouse, HBV DNA sequences that had integrated at two different sites were shown to segregate independently in the first filial generation (F1) and only one of the sequences allowed expression of the surface antigen. Among these animals the males produced five to ten times more HBsAg than the females. A 2.1-kilobase messenger RNA species comigrating with the major surface gene messenger RNA is expressed specifically in the liver in the two original mice. The results suggest that the HBV sequences introduced into the mice are able to confer a tissue-specific expression to the S gene. In addition, the HBV transgenic mice represent a new model for the chronic carrier state of hepatitis B virus infection.     

鸡PERK的原核表达及多克隆抗体的制备

根据鸡的蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)基因序列进行抗原肽分析,选择含大片段抗原表位区约1 500 bp的一段基因(15~1 515 bp)设计一对特异性引物后进行RT-PCR扩增,并构建pET-32a(+)-PERK重组质粒,将其转化至BL21(DE3)感受态细胞中.优化诱导表达条件,纯化重组蛋白后免疫兔并制备多克隆抗体.PCR鉴定、酶切鉴定和测序结果表明,pET-32a(+)-PERK重组质粒构建成功.SDS-PAGE电泳鉴定结果表明,重组蛋白在1.0 mmol·L-1IPTG、25℃下诱导9 h时的表达量最大.蛋白纯化结果表明,100 mmol·L-1咪唑洗脱液可较好地洗脱重组蛋白,获得较多的纯化蛋白.免疫结束后,抗体效价检测结果表明,制备的多克隆抗体效价达1∶32 000,可以与重组蛋白特异结合.     

Anti-idiotypic antibody vaccine for type B viral hepatitis in chimpanzees

Anti-idiotypic antibodies (anti-Id) that contain an internal image component that mimics the surface antigen of hepatitis B virus (HBsAg) were used to immunize chimpanzees. Four injections of the rabbit anti-Id preparation elicited an antibody response to HBsAg (anti-HBs). The antibody specificity appeared to be against the anti-Id, since the anti-Id immunogen was shown to bind the chimpanzee anti-HBs. Two chimpanzees immunized with the anti-Id, along with two control animals that were either untreated or received a nonimmune rabbit immunoglobulin G preparation, were challenged with infectious hepatitis B virus. Both control chimpanzees developed clinical and serological characteristics consistent with an active hepatitis B virus infection, whereas the two anti-Id treated chimpanzees were protected from infection. Since chimpanzees provide a relevant model of a human response to hepatitis B virus immunization and infection, these results indicate that anti-Id preparations such as that described here might be candidates for vaccines against human diseases.     

Studies on the Purification and Characterization of Soybean Esterase, and Its Sensitivity to Organophosphate and Carbamate Pesticides

Soybean esterase, a cholinesterase-like enzyme, was purified by differential centrifugation firstly, then, ammonium sulfate precipitation, dialysis, and finally, DEAE-cellulose-32 ion-exchange chromatography after extracting it from soybean seeds with phosphate buffer （0.3 mol L^-1, pH 7.0）. The extract recovery rate of the purified enzyme was 8.18% and purification fold was 91.58. The soybean esterase appeared as two bands on the denaturing SDS-PAGE with molecular weights of 24 and 37.2 kDa, respectively, which proved that it is a dimer protein consisting of two subunits. The result of nondenaturing PAGE revealed that the soybean esterase is a single band with cholinesterase-like activity using α- naphthyl acetate as the substrate and fast blue B salt as coloring agent. The esterase showed very high sensitivity to 18 kinds of organophosphate pesticides and 6 kinds of carbamate pesticides with the lowest detective limits of 0.03125- 0.0625 and 0.03125-0.25 mg kg^-1, respectively, and can meet the demands of MRL specified by the most countries.     

乙肝表面抗原植物表达载体构建及转化烟草的初步研究

为了探索用植物表达乙肝病毒抗原的可能性 ,将乙肝表面抗原基因插入带有 GUS报告基因的双元载体 p CAMBIA1 30 1。构建成转化烟草的双元载体 p CAMBIA1 30 1 s。用电击法将重组载体转入农杆菌 ,再侵染烟草。用抗生素筛选后 ,抗性小苗 PCR及 GUS染色呈阳性。表明这种载体不但能成功表达病毒蛋白 ,还具有快速鉴定转化株的优点     

Research on protoplast preparation and culture in Gladiolus hybridus Hort.

Protoplasts prepared from the aseptic leaves of Rose Supreme in Gladiolus hybridus Hort. were cultured. The yield of protoplasts with vigour was the highest under the following conditions: 1.5% cellulase Onzuka RS, 0.5% pectinase Y-23, 0.6 mol· L~(-1) mannitol, pH 5.8, digestion time 2 h, and temperature 27℃. After isolation and purification, protoplasts were cultured in solid and liquid combined medium, which included KM8P, 0.6 mol· L~(-1) mannitol, 1.0 mg· L~(-1) 2, 4-D, 0.2 mg· L~(-1) NAA and 0.2 mg· L~(-1) KT. The division of the protoplasts first emerged in medium after cultured 4 days, and emerged only a few times.     

用PCR和ELISA方法分析奶牛血清和奶中类乙型肝炎病毒

用人乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）表面抗原（ＨＢｓＡｇ）和ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）ＥＬＩＳＡ试剂盒检测８５份奶牛血清和９３份奶样。结果测出３３份血清为ＨＢｓＡｇ阳性，其中４价亦为ＨＢｅＡｇ阳性；２２份奶样为ＨＢｓＡｇ阳性，其中１１份亦为ＨＢｓＡｇ阳性。７个双阳性的样本，用针对ＨＢＶ表面抗原基因不同部位的两对引物作ＰＣＲ分析，结果未能扩增出特异片段，排除了奶牛ＨＢＶ血清学阳性是由人ＨＢＶ感染所致。     

健康人群乙型肝炎病毒感染血清标志模式及免疫状况的分析

目的:了解健康人群HBV感染及获得性免疫的状况,为更好的防治乙型肝炎提供客观依据.方法:采用ELISA法检测健康体检人群血清中HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb五项指标并对结果进行统计学分析.结果:8995例健康人群血清中HBV抗原抗体系统五项指标阴性者为48.4%,抗-HBs阳性者为44.7%,感染指标阳性者为6.9%,出现10种感染模式:五项指标均阴性;抗-HBs阳性;HBsAg阳性;抗-HBe阳性;HBsAg、HBeAg、HBcAb三项阳性;HBsAg、HBeAb、HBcAb三项阳性;HBsAg、HBeAb两项阳性;HBsAb、HBeAb、HBcAb三项阳性;HBeAb、HBcAb两项阳性和HBsAg、HBcAb两项阳性.结论:健康人群HBV感染近年来明显下降而免疫力明显上升,但尚有近1/2的人缺乏免疫力,并存在少数传染性强的乙型肝炎患者;应提倡健康人群普种乙肝疫苗,即使注射了乙肝疫苗也要注意自身一般性预防,常规检测乙肝五项指标,及时发现病情及早治疗.