利用巢式PCR方法筛选水稻OsIRT1突变体的研究

[目的]筛选得到水稻OsIRT1基因突变体。[方法]采用巢式PCR方法从水稻Tos17插入突变体库中筛选,共筛选近30000个单株。[结果]得到一个OsIRT1突变体单株。[结论]该突变体中的Tos17插入位点位于OsIRT1的内含子中。     

小麦根高亲和NO_3~-转运体全长基因(TaNRT2.1)的克隆和鉴定

 在前期获得的 pTaAF 的工作基础上,采用 RACE 方法进一步克隆和鉴定了小麦根 NO3 转运体全长基因-(TaNRT2.1)。将TaNRT2.1和已知的硝态氮转运体基因家族进行同源性比较,指出TaNRT2.1属于HATS中的NRT2家族。Southern　印迹揭示小麦基因组中有1个TaNRT2.1拷贝。Northern　分析示出硝态氮可瞬时诱导TaNRT2.1　mRNA积累,NO 处理 1 h　TaNRT2.1　mRNA很快增加,4　h 达到最大,24　h恢复至诱导前水平,具根专一表达特点。 - 3     

小金海棠抗缺铁相关基因-Nramp基因片段的克隆

 以高效抗缺铁苹果种小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et Jiang)为试材，以异源的小麦 Nramp基因为探针进行杂交分析。Southem杂交结果表明：小金海棠基因组中存在该家族基因。Northern杂交结果表明：在根和叶中，Nramp基因在正常供铁和缺铁胁迫下均能得以转录，且叶中的转录受缺铁胁迫的诱导而加强。通过PCR方法已从基因组DNA中扩增出了752 bp的特异性产物，该片段与水稻的OsNramp3具有83％ 的氨基酸序列同源性。     

铁胁迫小麦根DDRT-PCR分析及ABC基因的表达差异

 采用ＤＤＲＴ－ＰＣＲ技术比较了正常供铁和缺铁胁迫下铁高效型小麦（京－４１１）和铁低效型小麦（三属麦－３）的基因表达差异模式。利用从ＤＤＲＴ－ＰＣＲ中挑选出的ＡＢＣ的ｃＤＮＡ片段为探针进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交，证明它的基因表达受缺铁胁迫的抑制     

苹果属山荆子MbNramp1基因克隆、序列与表达分析

以苹果属山荆子为试材,根据Nramp1同源序列保守区设计两对简并引物进行PCR,结合RACE技术获得了3'末端和5'末端片段,将3段片段序列拼接,根据拼接序列获取了MbNramp1基因全长cDNA序列。MbNramp1cDNA长2090bp,包含一个长度为1656bp的开放阅读框,编码551个氨基酸的多肽,分子量约为59.7kD。该基因编码的蛋白是一个膜蛋白,76%以上的氨基酸为非极性。MbNRAMP1与二价铁、锰转运蛋白NRAMP基因家族保守性很高,具有NRAMP1金属转运蛋白家族基因典型特征,即含有推断的N–端相连的糖基化位点、10个预测的跨膜结构域(TMs),在第6和第7跨膜结构域间有一个相同的转运基序(CTM)。低铁胁迫时MbNramp1在根中表达量增加。     

酵母异源互补法鉴定MbNramp1基因的功能

【目的】研究MbNramp1基因的功能。【方法】通过异源互补试验鉴定该基因转运铁的功能,并对MbNRAMP1蛋白进行亚细胞定位研究。【结果】MbNramp1基因转化酵母突变株DDY4在缺铁的培养基上恢复生长。在供试BPDS浓度的培养基上,MbNramp1基因转化酵母突变株DDY4生长状况均明显好于空载体转化后的突变株。培养基中BPDS增加到15μmol·L-1时,转化了MbNramp1的酵母细胞生长状况与野生型相差无几。在30μmol·L-1BPDS时,MbNramp1转化的细胞与低浓度BPDS相比生长延缓,但是明显优于空载体转化的DDY4突变株。与较低浓度BPDS相比,野生型酵母(DY1457)的生长量也减少了。亚细胞定位表明,MbNRAMP1主要位于部分质膜上而非整个膜上。【结论】初步证明MbNramp1编码具有功能的铁转运蛋白,能够使酵母吸收铁的突变株恢复突变,MbNRAMP1主要位于部分细胞膜上行使铁营养转运功能。     

小金海棠中抗缺铁相关基因的杂交分析

 以高效抗缺铁胁迫基因型苹果种小金海棠 (MalusxiaojinensisChengetJiang)为试材 ,以异源的玉米Fe(II) 转运蛋白基因 (irt)和小麦Nramp基因为探针进行了杂交分析。Southern杂交结果表明 ,小金海棠基因组中该两家族基因均存在。Northern杂交结果表明 ,在根中 ,irt的转录受缺铁胁迫诱导 ,并随缺铁胁迫处理天数的增加而加强 ;在根和叶中 ,Nramp基因均能得以转录且叶中的转录受缺铁胁迫诱导而加强     

小麦根高亲和N03^-转运体全长基因（TaNRT2．1）的克隆和鉴定

在前期获得的pTaAF的工作基础上，采用RACE方法进一步克隆和鉴定了小麦根N03^-转运体全长基因(TaNRT2、1)。将TaNRT2．1和已知的硝态氮转运体基因家族进行同源性比较，指出TaNRT2．1属于HATS中的NRT2家族。Southern印迹揭示小麦基因组中有1个7aNRT2．1拷贝。Northern分析示出硝态氮可瞬时诱导TaNRT2．1 mRNA积累．NO3^-处理1h TaNRT2、1 mRNA很快增加，4h达到最大，24h恢复至诱导前水平，具根专一表达特点。     

基因芯片技术对过铁胁迫条件下酵母硫转运的分析

利用基因芯片技术在转录水平上对过铁胁迫条件下酵母中硫转运体系进行了分析。结果表明,在铁过量的时候,酵母硫转运系统相关基因上调表达。认为酵母在过铁条件下会增加细胞中的硫转运,以便维持细胞的铁稳态,降低过量铁对细胞的毒害作用。