SPA—固相免疫电镜快速诊断轮状病毒感染

SPA—固相免疫电镜技术(SPA—SPIEM)是将 SPA 吸附于支持膜上,和动物 IgG 的Fc 端结合,活化 Fab 端,充分暴露抗原结合位点,促进抗原体反应,大大提高了电镜敏感性的一种免疫电镜技术。国外已有人用于植物病毒,腺病毒及轮状病毒。国内动物病毒方面,王正党等用于诊断犬出血性肠炎病毒及猫泛白细胞减少症病毒的感染,我们用此技术检测轮状病毒的感染,收到良好效果,结果报告如下:     

SPA与鸭IgG的结合性研究

金黄色葡萄球菌细胞壁中的A蛋白(staphylo-coccal protein A,SPA)能与多种动物的γ-球蛋白发生非特异性结合反应,而且IgG的Fc片段与SPA结合后并不影响Fab片段的免疫活性,因此在酶联免疫吸附试验(ELISA)中,常用SPA与辣根过氧化酶(HRP)交联而成SPA-HRP结合物,用于抗原、抗体的定量测定及组织切片中抗原或抗体的定位、免疫复合物的检测等[1].     

SPA/SPG融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达

葡萄球菌A蛋白（SPA）和链球菌G蛋白（SPG）的IgG结合区编码基因融合后，克隆到大肠杆菌表达载体PGEX，SPA／SPG融合蛋白（SPAG）得到高效表达。可溶性SPAG～GST产物可被谷胱甘肽亲和柱一次性纯化。用琼扩和ELISA试验测定了表达产物与不同种属动物血清反应的性能。SPAG—GST与所有SPA、SPG各自反应的动物IgG结合，对小鼠IgG的反应优于SPA或SPG。在所测试的23种动物血清中，融合蛋白与大部分哺乳动物Ig反应。     

SPA诊断鸡传染性支气管炎

SPA是金葡萄菌细胞壁抗原的主要成分。目前已知在90%以上的金葡萄菌中均含有这种成份。但不同菌株产生SPA的量相差十分悬殊,且只有金葡萄菌含之,表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌不含SPA。SPA能同人类和多种哺乳类动物的IgG产生沉淀反应。SPA具有天然地和人类及其它一些哺乳动物IgG分子Fe段结合的能力,而不影响该抗体与抗原的反应性。应用这一特性,我们对标准毒株:IBV_(M_(41))、IBV_(M_(21))周、IBV_(H_(52)_、IBV_(H_(120))分别作试验,其结果均为阳性。对照组均为阴性。本试验和IBV在鸡胚内对B(NDV—B)干扰试验,电镜观察,对流免疫电泳实验结果取得一致。一、材料与方法一、标准毒株来源:(一)IBV_(H_(120))、IBV_(H_(52))由上海农科院畜牧兽医研究所引入。     

葡萄球菌A蛋白与动物血清结合力的测定

用单向扩散、双向扩散,对流免疫电泳、微量环状沉淀试验、吸收实验和抑制实验等方法测定了SPA与四种动物血清的结合力,证明SPA与猪血清的结合力最强,可结合大部分的IgG及少量的IgM;与牛和绵羊血清的结合均只发生在IgG_2上;与马血清的结合则主要是通过IsGa、IgGb、IgGc和IgG(T)。     

金黄色葡萄球菌蛋白A的提取、纯化及鉴定

为了获得纯度高、活性好的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA),取改良营养肉汤培养基上生长18h的金黄色葡萄球菌培养物,采用溶菌酶裂解细胞壁释放蛋白质,用磷酸盐缓冲溶液(PBS)溶解后转入透析袋透析,透析物用小鼠IgG-sephrose4FF亲和层析柱纯化,采用二喹啉甲酸(BCA)法测蛋白质浓度。结果表明:SPA浓度为0.933mg/mL;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果在42ku处有明显的电泳条带,蛋白免疫印迹(Western-blot)进一步证实小鼠IgG与SPA在42ku处发生较强的反应;以SPA为抗原,提纯的小鼠IgG为样品进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测,结果小鼠IgG稀释到1∶25600时仍能与SPA结合,说明提取的SPA活性较高。     

SPA在免疫学上的研究

SPA(葡萄球菌A蛋白)是多数金黄色葡萄球菌细胞壁的主要成分，它能与正常人和多种哺乳动物IgG(免疫球蛋白G)呈非特异性(先天遗传比较初级的识别功能)结合出现沉淀“假免疫反应”。与之结合的IgG仍保持抗体。SPA生物学活性十分广泛，包括与IgG的FC(可结晶片段)结合，固定补体激活B(囊依赖淋巴)细胞，抑制K(荚膜抗原)细胞的ADCC(抗体依赖性细胞介异细胞毒)。     

抗原在机体产生抗体分析

抗原经动物的口腔、粘膜或注射等途径进入动物体内，抗原在动物的体内，经过一系列免疫应答产生抗体。抗体的产生，首先抗原在机体内通过透导，在透导的过程中，根据透导时间的长短，决定抗体——IgG或IgM的产生。抗原在体内透导时间长短，它决定于抗原的性质和动物机体的反应程度，在体内透导的时间越长，产生IgG的可能性就越大(IgG在体内的产生晚于IgM)，再次反应需借助T细胞和B细胞的作用，与依赖性抗体FC(成熟的B细胞)结合，这种结合武装的白细胞，产生一种相应抗病原微生物的作用。     

应用葡萄球菌A蛋白协同凝集试验在多杀性巴氏杆菌分型上的研究

近年来,国内外对金黄色葡萄球菌A蛋白(简称SPA)及其在免疫学和血清学方面的应用已进行了广泛研究。SPA与IgG的Fc段结合后,有抗体活性的Fab段暴露于SPA的表面,当有特异抗原存在时,则可发生协同凝集反应。根据这一原理,在国外,已广泛应用SPA菌制剂进行细菌的分群(型)和鉴定。如Kronvall(1973)的肺炎球菌快     

葡萄球菌蛋白A(SPA)的性质与应用

葡萄球菌蛋白 A(StaphylococcalProtein A,简称 SPA)是大多数金黄色葡萄球菌细胞壁所特有的一种成分。它具有能与人及多种哺乳动物血清中 IgG 的 Fc 段发生非特异性结合,且不影响抗体与抗原相互反应的特性。由于 SPA 的此种特性,近年来,国内外在细菌、病毒等病原的快速诊断与分型和肿瘤的研究以及免疫学基础理论研究方面,均有广泛应用。一是以 SPA 作载     

葡萄球菌A蛋白及其在免疫学中的应用

葡萄球菌A蛋白(StaphylococcalProtein A,简称SPA)是多数金黄色葡萄球菌细胞壁上的一种蛋白成分,至今未发现其和致病性有明显的关系,具有与人及多种哺乳动物IgG的Fc段非特异性地结合的特性,这就弓f起了医学及生物科学界的极大重视。现在以SPA为指示系统建立了许多特异、敏感、快速的检测抗原或抗体的方法,应用范围也日益扩大。一、SPA的性质:SPA首先由Ver-wey     

HRP—SPA在兽医临床诊断上的应用

葡萄球菌A蛋白(SPA)具有与人和多种哺乳动物血清中IgG分子Fc段高度亲和的特异性。可用同位素、荧光素、铁蛋白、过氧化物酶标记SPA,而不影响天然蛋白质的生物学特性。国外自1977年开始将辣根过氧化物酶(HRP)标记的SPA(简称HRP—SPA)用于间接免疫酶染色以来,引起了许多医学工作者的极大兴趣。他们把抗原抗体的免疫反应和酶的高效催化     

利用蛋白A免疫组织化学技术检测试验感染山羊组织中的小反刍兽疫病毒抗原

本试验首次利用鸭沙门氏菌蛋白A与过氧化氢酶偶联,用于检测试验感染山羊组织中的小反刍兽疫病毒抗原。山羊用致病性小反刍兽疫病毒进行试验感染,这些病毒分离自2002年在沙特阿拉伯野生瞪羚自然爆发小反刍兽疫的严重疾病。该技术十分迅速,并且优于过氧化氢酶抗过氧化氢酶法（PAP）检测法,不需将组织中原本存在的过氧化氢酶失活,并且广泛用来检测很多种类动物。该技术优于其他免疫标记偶联技术的一个特点是,PA可以特异吸附于IgG的可结晶片段（Fc）,从而使抗原与IgG的抗原结合片段（Fab）结合,使IgG分子能与抗原特异性反应。所以,这并不是与抗原竞争与IgG分子的Fab部位结合。在目前的研究中,PA酶联用于检测试验感染山羊的各个组织中的小反刍兽疫病毒抗原。     

牛乳中IgG活性的影响因素研究

免疫球蛋白IgG具有中和毒素、固定病原菌、激活补体系统等作用。人或动物摄取免疫乳之后，特别是新生儿，可获得被动免疫保护。IgG的活性与其独特的立体结构有密切关系，当其受变性因素作用时，结构区域发生不同程度的变化，导致抗体结合抗原能力有所改变。饮用牛乳时，动物胃肠道的pH值、蛋白酶等对牛乳中IgG的活性有影响。试验采用单向琼脂扩散法研究酸、碱、胃蛋白酶、胰蛋白酶对牛乳中IgG活性的影响。     

应用酶标记葡萄球菌A蛋白“ELISA”检测猪囊虫抗体的研究

作者进行了酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪囊虫抗体的研究,发现该法具有很高的敏感性和良好的特异性,少量假阳性主要由细颈囊尾蚴所致,可由细颈囊尾蚴液抑制而消除。以HRP-SPA代替HRP-兔抗猪γ球蛋白,对同一批猪血清进行了ELISA测定,发现两种结合物检测的结果一致,HRP-SPA完全可以代替HRP-兔抗猪γ球蛋白。SPA能与多种动物的IgG结合,而以与猪的IgG亲和力最强,同时它亦能与人的IgG结合。猪囊虫病为人猪共患的疾病,实验室只需准备HRP-SPA一种结合物,即可同时检测人和猪的囊虫病抗体,满足人医和兽医开展ELISA诊断囊虫病的需要。     

特异抗体标记金黄色葡萄球菌No.1800株在猪丹毒猪肺疫猪副伤寒及猪败血性链球菌病区别诊断上的初步应用

金黄色葡萄球菌 A 蛋白(简称 SPA)是大多数金黄色葡萄球菌细胞壁的主要成分。早在1940年 Verwey 首先描述了金黄色葡萄球菌的某些菌株的一种抗原成分,能与人的正常血清在双相琼脂扩散试验中出现沉淀线。1958年 Jensen 也报导了类似结果,并发现葡萄球菌的这种抗原成分是细胞壁的组成部分。1964年,Grov 等称葡萄球菌的这种细胞壁成分为 A 蛋白。1966年,Forsgren 等发现 SPA 能与人正常血清的 IgG 的 Fc 段发     

特异抗体标记金黄色葡萄球菌No.1800株在炭疽病诊断上的应用

自从Forsgren等发现金黄色葡萄球菌的细胞壁成分A蛋白(简称SPA)能和人及某些哺乳动物的IgG的Fc段发生非特异性结合以来,在国內外对SPA及其在免疫学和血清学方面的应用已进行了广泛的研究,但多限于医学方面,在兽医学领域尚少报道。家畜炭疽病的诊断一直应用细菌学检验、动物接种及沉淀反应等方法。这些方法     

应用SPA—ELISA法检测猪血清弓形体抗体的报告

1979年 Madore 开始把葡萄球菌 A 蛋白用于酶联免疫吸附试验(SPA—ELISA),现已广泛应用于血清学诊断,由于 SPA 具有与人及多种哺乳动物血清 IgG 的 Fc 段非特异相结合的特性,在 ELISA 中代替第二抗体,但它与多种哺乳动物各种属的亲和力不同,其中与猪的 IgG 亲和力最强,我们应用 SPA-ELISA 检测猪血清弓形体抗体,并与间接血凝法(IHA)进行比较结果满意,现报道如下。     

酶标SPA抑制染色法检测貉细小病毒的研究——(Ⅰ)酶标SPA抑制染色法试验程序的确立

应用感染貉细小病毒(RPV)的72h猫肾传代细胞(F_(81))制做细胞抗原片。利用超迷离心结合蔗糖密度梯度离心法提纯RPV病毒作为免疫用抗原,制备了豚鼠抗RPV高免血消。在酶标SPA染色法的基础上测得高免血清最佳工作范围为160~×、320~×、640~×;PPA的最佳工作效价为40~×;被检样品与标准阳性血清作用最佳温度为37℃,时间为60min。确立了酶标SPA抑制染色法的试验程序。并对有关试剂保存有效期进行了试验测定。     

猪圆环病毒抗原表位肽免疫层析试纸条的研制

猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)的感染与断奶仔猪多系统衰竭综合征(PostweaningMultisystemicWastingSyndrome,PMWS)的发生密切相关。为快速便捷地检测猪圆环病毒2型抗体,本次试验主要采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,运用金黄色葡萄球菌蛋白A蛋白(Staphylococal Protein A,SPA)作为标记蛋白制备金标垫,分别以猪圆环病毒抗原表位肽和SPA免疫兔血清纯化IgG作为检测带(T带)与质控带(C带),经多次重复试验,分别确定了胶体金的最佳标记浓度、最适pH、重悬液和样品垫处理液的最佳配方以及检测带(优势抗原表位肽)和质控带(多抗IgG)的最适包被浓度,最终装配成抗体检测试纸条,用以检测已知的PCV2阳性血清和阴性血清,验证其检测的敏感性、特异性与稳定性。结果表明,经纳米粒度仪检测可得知胶体金颗粒大小在10 nm～14 nm之间。用SPA标记胶体金的最适pH为6.0,最佳标记量为7μg/mL。检测带和质控带的蛋白包被浓度均为1mg/mL。经验证,该试纸条不同批次间以及同一批次内重复性较好,具有较好的灵敏度、特异性和稳定性,能够准确检测猪血清样品中的抗体水平,可以进一步评价猪圆环病毒病疫苗的免疫效果。