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葡萄球菌A蛋白(SPA)发现于1940年,70年代后得以广泛应用。尽管一些金黄色葡萄球菌可以分泌丰富的SPA,但其应用范围远不及链球菌G蛋白(SPG)。SPG发现于70年代,但G组链球菌难以培养,SPG的分泌量也少,而且纯化步骤复杂;此 相似文献
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葡萄球菌A蛋白(SPA)和链球菌G蛋白(SPG)的IgG结合区编码基因融合后,克隆到大肠杆菌表达载体PGEX,SPA/SPG融合蛋白(SPAG)得到高效表达。可溶性SPAG~GST产物可被谷胱甘肽亲和柱一次性纯化。用琼扩和ELISA试验测定了表达产物与不同种属动物血清反应的性能。SPAG—GST与所有SPA、SPG各自反应的动物IgG结合,对小鼠IgG的反应优于SPA或SPG。在所测试的23种动物血清中,融合蛋白与大部分哺乳动物Ig反应。 相似文献
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应用Y—DNA特异片段的PCR技术鉴定牛和绵羊胚胎性别及应用研究 总被引:5,自引:0,他引:5
本研究采用国际八十年代中后期研究成功的特定DNA片段扩增技术—聚合酶链反应(PCR)技术,进行牛和绵羊胚胎性别鉴定。采用删除富集法,构建富含牛和绵羊Y—DNA文库,筛选出特异克隆,并根据其序列,分别设计合成引物,用PCR技术分别扩增牛Y染色体上约140bp的片段,绵羊Y染色体上约130bp的片段。对已知性别的牛和绵羊血液样品进行检测,准确率均为100%(10/10;11/11)。应用已建立的简易、快速胚胎取样方法及防污染措施,以及设计合成的引物和PCR检测胚胎性别的技术方法,奶牛胚胎经性别鉴定后移植,产犊牛7头(4头公犊,3头母犊),准确率为100%(7/7)。在内蒙牧区生产现场,对绵羊胚胎经性别鉴定后移植,共移植成功18只受体母羊(每只母羊移植2-4枚同性别胚胎),产羔25只(8只公羔,17只母羔),准确率为80%(20/25)。 相似文献
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用国产光敏生物索标记20型蓝舌病病毒(BTV)全基因RNA,检测BTV、鹿流行性出血热病毒(EHDV)和实验感染绵羊的血样品。3、10、20、21型BTV RNA杂交阳性,与EHDV无交叉反应。0号感染羊的血样为阳性。试验表明,用乙二醛变性RNA样品,可检出10pg水平的BTV RNA样品,灵敏度高出热变性方法的10—100倍。 蓝舌病是由呼肠孤病毒科环状病毒属内的蓝舌病病毒引起的重要疾病。主要通过昆虫传播,感染反刍动物。本病上世纪发现于非洲,现在叫中东、北美、澳大利亚等国家和地区都有蓝舌病的报道。蓝舌病现有24个血清型,其痫毒的核酸由10个片段的双链RNA(dsRNA)组成。这些基因片段决定BTV衣壳蛋白的氨基酸序列上的差异。通常用补反、琼脂扩散或ELISA等血清学方法检查BTV抗体的存在。但这些方法除了敏感性低以外,一个重要缺陷是和EHDV等相关病毒存在交叉反应。K.R.E.Squire等人采用放射性同位素~(32)P,3'末端或5'末端标记全基因组BTV RNA作探针,检测BTV。P·P.C.Mertens和吴时友等,将基因组RNA用一定浓度的NaOH随机水解成150bp左右的片段,再进行末端标记,末端的增加使标记效率显著提高。由于同位素的使用受到经济和安全等方面的限制,为此我们采用非放射性的光生物素标记BTV RNA,打点杂交检测BTV,试验证明该方法是可行的。 相似文献