金黄色葡萄球菌蛋白A的提取、纯化及鉴定

为了获得纯度高、活性好的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA),取改良营养肉汤培养基上生长18h的金黄色葡萄球菌培养物,采用溶菌酶裂解细胞壁释放蛋白质,用磷酸盐缓冲溶液(PBS)溶解后转入透析袋透析,透析物用小鼠IgG-sephrose4FF亲和层析柱纯化,采用二喹啉甲酸(BCA)法测蛋白质浓度。结果表明:SPA浓度为0.933mg/mL;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果在42ku处有明显的电泳条带,蛋白免疫印迹(Western-blot)进一步证实小鼠IgG与SPA在42ku处发生较强的反应;以SPA为抗原,提纯的小鼠IgG为样品进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测,结果小鼠IgG稀释到1∶25600时仍能与SPA结合,说明提取的SPA活性较高。