木瓜蛋白酶水解鸡骨泥制备短肽工艺优化

为了探究酶解鸡骨泥制备抗氧化肽的最佳工艺,研究了以木瓜蛋白酶酶解鸡骨泥时各因素对短肽得率的影响,以及制备的抗氧化肽对羟自由基、超氧阴离子自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除能力。试验探究了酶解过程中不同底物质量分数、加酶量、反应温度和反应时间对短肽得率的影响。采用响应曲面优化得到了以短肽得率为目标的木瓜蛋白酶酶解鸡骨泥的最优工艺,反应条件为:底物质量分数11.44%,加酶量211.11 mg·g~(-1),反应温度57℃,反应时间3 h,在该条件下酶解液短肽得率预期为59.20%,实测为58.87%±0.51%。采用优化工艺制备的抗氧化肽,在达到32 g·L~(-1)时与维生素C清除羟自由基、超氧阴离子自由基和DPPH自由基的能力相近,说明鸡骨泥肽具有一定的抗氧化活性。     

青蛤酶解物抗氧化活性研究

以DPPH自由基清除活性为指标对青蛤酶解条件(即时间、温度、pH、酶添加量和固液比)进行正交试验设计,研究了青蛤蛋白酶解物的抗氧化活性。结果表明,酶解条件为温度40℃、pH 11.5、酶添加量3000U/g原料以及固液比为1∶2(w/w)时,酶解物的DPPH自由基的清除活性最高。对最佳水解条件下所获得的酶解物进行抗氧化活性测试,内容包括DPPH自由基清除活性、超氧阴离子清除活性、羟基自由基清除活性和还原能力。结果显示,酶解物有较低超氧阴离子清除活性,但却具有较高DPPH自由基清除活性、羟基自由基清除活性和还原能力。     

胰蛋白酶制备乌贼缠卵腺抗氧化活性多肽的研究

[目的]探讨胰蛋白酶制备乌贼缠卵腺抗氧化活性多肽的工艺及体外抗氧化活性.[方法]以乌贼缠卵腺为原料,用胰蛋白酶进行酶解,采用单因素和正交试验优化乌贼缠卵腺抗氧化活性肽的提取工艺;将酶解液超滤分成4个分子段,通过体外检测DPPH清除率、·OH清除率和还原力评价其抗氧化活性.[结果]胰蛋白酶酶解乌贼缠卵腺在加酶量2000 U/g、pH为8.5、料液比1:3、酶解时间8 h条件下得到的酶解物对DPPH的清除率最大.酶解液经超滤得到的<3 kD分子段的多肽具有良好的DPPH清除能力、·OH清除能力和还原能力.[结论]胰蛋白酶酶解制备的乌贼缠卵腺多肽具有较好的体外抗氧化活性,可作为抗氧化肽的理想来源.     

大西洋鳕鱼皮多肽体外抗氧化活性研究

[目的]探讨大西洋鳕鱼皮多肽的体外抗氧化活性。[方法]选择胰蛋白酶酶解鳕鱼皮,分别以氨基氮滴定法和DPPH自由基清除率作为筛选指标,通过正交试验,筛选出酶解的最优条件;将超滤液分成5段,分别进行DPPH自由基清除率、ABTS自由基力及亚铁离子螯合能力的体外抗氧化活性。[结果]胰蛋白酶酶解大西洋鳕鱼皮的最优条件为料液比1∶1,加酶量2 500 U/g、酶解时间4 h、温度45℃、pH 9.0。当分子量小于5 k D时,DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力和Fe2+离子螯合能力最强。[结论]经胰蛋白酶酶解,获得的大西洋鳕鱼皮多肽存在较好的抗氧化活性。     

超声协同复合酶法提取番茄红素及体外模拟消化对抗氧化活性的影响

[目的]优化圣女果番茄红素提取工艺,并分析其抗氧化活性,为提高圣女果番茄红素的开发利用提供理论依据.[方法]在单因素试验基础上,通过响应面法优化圣女果番茄红素超声协同复合酶提取最佳工艺条件,并考察经人工胃液和肠液体外模拟消化后番茄红素清除1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH·)能力的变化情况.[结果]各因素对圣女果番茄红素提取量的影响排序为超声时间>酶解温度>复合酶添加量>料液比.3个单因素(复合酶添加量、酶解温度和超声时间)及料液比与复合酶添加量、料液比与超声时间、复合酶添加量与酶解温度、酶解温度与超声时间的交互作用对圣女果番茄红素提取量影响极显著(P<0.01).圣女果番茄红素最优提取工艺条件为:料液比1:40、复合酶添加量3.6%、酶解温度54℃、超声时间22 min,在此工艺条件下,圣女果番茄红素的提取量为410.94±1.78μg/g,与模型预测值(412.62μg/g)接近.圣女果番茄红素对DPPH·、羟基自由基(·OH)和超氧阴离子(O-2·)的清除能力具有一定的量效关系,均明显高于同浓度的2,6-二叔丁基对甲酚(BHT).体外模拟消化后的圣女果番茄红素对DPPH·的清除率减小,且圣女果番茄红素浓度越高,清除率降幅越小.[结论]采用响应面法优化的工艺条件可用于圣女果番茄红素提取,且提取得到的圣女果番茄红素具有较强的抗氧化能力,可为后续圣女果的开发利用提供技术支持.     

蝇蛆抗氧化肽的制备及其纯化

以DPPH自由基清除率为评价指标,通过单因素试验和正交试验优化碱性蛋白酶水解蝇蛆蛋白制备抗氧化肽的工艺条件。采用超滤、Sephadex G25凝胶过滤层析对蝇蛆蛋白水解物进行分离纯化,筛选高抗氧化活性组分。结果表明,酶法制备蝇蛆蛋白抗氧化肽的最佳工艺条件为:加酶量7000 U/g,底物质量浓度1%,酶解时间15 min,酶解温度50℃,p H值7.5。水解物经超滤得到相对分子量大于10 k D、5~10 k D以及小于5 k D的组分,以小于5 k D组分清除DPPH自由基活性最强。该组分通过凝胶过滤层析进一步分离得到2个组分,其中组分Ⅱ的清除DPPH活性明显高于组分Ⅰ,达到81.83±0.80%。酶解产物经2步纯化后,其DPPH清除活性得到了显著提高,提高约57.88%。     

藏鸡蛋卵白蛋白酶解制备抗氧化肽及其体外抗氧化活性

采用碱性蛋白酶水解藏鸡蛋卵白蛋白,制备抗氧化活性肽,以水解度和超氧阴离子自由基(O_2~-·)清除率为指标,通过单因素试验和正交试验确定最佳酶解参数,并对酶解多肽的体外抗氧化活性进行测定。结果表明:碱性蛋白酶酶解的最适条件为底物质量分数2%、酶解时间5 h、酶添加量7 000 U/g;在最适条件下,碱性蛋白酶酶解所得抗氧化肽的O_2~-·、DPPH自由基、羟基自由基(·OH)清除率分别为71.75%、56.47%、84.46%;还原力、抗脂质过氧化能力分别为0.87、82.83%。     

草鱼鱼鳞抗氧化肽的酶法制备及其抗氧化稳定性研究

【目的】采用碱性蛋白酶水解草鱼鱼鳞制备抗氧化肽,并探讨其稳定性。【方法】运用单因素及正交试验对酶解条件进行优化,并进行体外抗氧化活性的测定,对酶解得到的抗氧化肽进行体外模拟胃肠消化实验。【结果】在优化工艺条件下,鱼鳞酶解液中羟自由基清除率为88.71%;其体外抗氧化能力随肽质量浓度增大而增大,在浓度为0.5 mg/m L时,鱼鳞抗氧化肽清除DPPH自由基能力达到Vc的81.1%;对超氧阴离子自由基清除率为98.97%。在胃肠消化前4 h内抗氧化活性较稳定,之后随时间延长抗氧化稳定性显著下降。【结论】在酶解草鱼鱼鳞的较佳工艺条件:温度60℃、料液比1∶15、加酶量800 U/g、时间3 h下,碱性蛋白酶水解草鱼鱼鳞制备的抗氧化肽具有良好的抗氧化活性及稳定性。     

响应面法优化鸭蛋清肽酶解条件及蛋清肽功能活性研究

用响应面分析法对鸭蛋清肽酶解工艺进行优化。在单因素试验基础上,选择酶解温度、加酶量、酶解时间为自变量,鸭蛋清抗超氧阴离子能力为响应值。利用中心组合3因素3水平的试验设计,作响应面分析。试验结果表明,曲面回归方程拟合性好,制备鸭蛋清肽的最佳酶解条件为酶解温度48.5℃,加酶量2.85%,酶解时间4.33 h。所得鸭蛋清肽的总抗氧化能力3.24 U·mL~(-1),抑制羟自由基能力51.76 U·mL~(-1),抗超氧阴离子能力110.3 U·L~(-1),DPPH自由基清除率17.49%,a-葡萄糖苷酶抑制活性52.73%。     

马氏珠母贝肉酶解条件优化及其产物活性分析

[目的]优化超声波辅助酶解马氏珠母贝肉工艺条件,并对酶解产物进行自由基清除活性分析,为马氏珠母贝肉的高值化利用提供参考依据.[方法]以马氏珠母贝肉为原料,采用单因素及响应面试验分析酶解温度、加酶量、超声功率和酶解时间对珠母贝肉蛋白质水解度的影响,确定最佳工艺参数,并测定酶解产物对羟基自由基(·OH)、超氧自由基(O2)及DPPH自由基(DPPH·)的清除能力.[结果]影响马氏珠母贝肉酶解效果的4个因素主次顺序为:超声波功率>加酶量>酶解温度>酶解时间,其中酶解温度、加酶量和超声波功率影响极显著(P<0.0 1),酶解时间及加酶量与超声波功率的交互作用影响显著(P<0.05).马氏珠母贝肉最佳超声波辅助酶解条件为:酶解温度48℃、加酶量2200 U/g'超声波功率13%(总输出功率900W)、酶解时间12 min,在此条件下的蛋白质水解度为21.937%,与预测值(22.140%)的相对误差为0.92%.酶解产物对·OH、O2-和DPPH·的清除能力随酶解产物质量浓度的增加而增强,当质量浓度为2.0 mg/mL时,清除率分别为68.85%、83.62%和82.36%.[结论]优化得到的超声波辅助酶解马氏珠母贝肉工艺参数准确可靠,酶解时间显著缩短,酶解产物具有明显的清除自由基活性,可作为具有抗氧化作用的保健食品、保健酒等产品的优质原料.     

响应面试验设计优化鲢鱼鳞胶原蛋白抗氧化活性肽的制备条件

采用酶解法制备抗氧化活性肽,研究了鲢鱼鳞胶原蛋白抗氧化活性肽制备的优化条件。以水解度(DH)、DPPH·、超氧阴离子(O-2·)和羟基(·OH)自由基清除率为指标,比较碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶对鲢鱼鳞胶原蛋白的酶解效果及酶解产物的抗氧化活性。结果表明:碱性蛋白酶酶解产物的抗氧化活性最强,对DPPH·、O-2·和·OH自由基的清除率分别为76.9%、43.1%和58.2%;采用响应面试验设计优化碱性蛋白酶制备鲢鱼鳞胶原蛋白抗氧化活性肽的条件,得到最优的制备条件为底物浓度5.47%,酶解时间4.24 h,酶添加量4 200 U/g,在此条件下,所得抗氧化肽对DPPH·、O-2·和·OH的清除率分别为79.6%、46.3%和63.5%。     

鲍鱼性腺小肽的制备及抗氧化活性的初步研究

以雄性皱纹盘鲍性腺为原料,建立了蛋白酶酶解制备抗氧化活性蛋白肽的工艺条件．分别对木瓜蛋白酶和中性蛋白酶进行单因素研究,并以二者的复合酶为工具酶进行响应面分析．结果显示,雄性鲍鱼性腺的最优酶解条件为木瓜蛋白酶与中性蛋白酶的比例为1：4、pH=6．6、酶解温度为53．7℃、酶解时间为70．4min．高效液相色谱（HPLC）分析结果表明,酶解液中多肽的分子质量主要分布在1ku以下．制备的酶解液具有较强的清除自由基效果,清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）的EC50值为6．8mg／mL,还原力的AC0.5值为12．87mg／mL．     

复合酶法水解大麦虫蛋白制备酸性多肽及其抗氧化活性

采用复合蛋白酶(胰蛋白酶、碱性蛋白酶)对大麦虫蛋白进行控制酶解,研究酶解时间、酶活比、底物浓度、酶解温度、pH与加酶量等对酶解反应的影响;采用中心组合试验设计,优化酶解工艺;并对大麦虫酸性多肽清除自由基能力进行了测定评价.结果表明,酶解最佳条件为底物浓度5%,时间120 min,胰蛋白酶∶碱性蛋白酶1∶1,pH 8.71,温度48℃,加酶量16.91 mg/g.该酸性多肽对(O)_2~(-·))、DPPH·自由基有很好的清除作用,具有很强还原力.利用优化工艺制得酸性肽得率为79.05%.     

北太平洋鱿鱼缠卵腺抗氧化酶解寡肽的制备

为探讨北太平洋鱿鱼(Todarodes pacificus)缠卵腺酶解寡肽的制备和抗氧化活性,以北太平洋鱿鱼缠卵腺为原料,选择碱性蛋白酶进行酶解,以水解度和DPPH自由基清除率为指标,经单因素和正交试验方法获得最佳酶解条件,超滤得到不同分子段多肽,通过测定还原能力、DPPH清除率、Fe~(2+)螯合能力、OH自由基清除率、超氧阴离子清除率评价不同分子量酶解多肽的抗氧化性,得出最佳分子段;采用琼脂糖凝胶G-25对最佳分子段进行分离,检测各峰对DPPH清除能力,得出最佳峰段后经HPLC进一步分离获得单一组分,由氨基酸测序仪进行N端降解测序得出目标肽序列。结果表明,碱性蛋白酶的酶解条件为温度50℃、酶解时间7 h、加酶量3 500 U/g、pH 9.0、料液比1∶6。经超滤得到的3～5 ku分子段抗氧化活性最强,经琼脂糖凝胶G-25分离得到3个峰,其中峰Ⅰ组分对DPPH清除率最好,当浓度为0.5 mg/m L时其DPPH的清除率为61.87%。经HPLC纯化得到单一峰,氨基酸序列测定为Ala-Tyr-Ala-Ser-Ser,相对分子质量为497.50。北太平洋鱿鱼缠卵腺酶解寡肽有较好的抗氧化活性。     

复合酶制备抗氧化活性核桃多肽工艺优化

以碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶复合水解核桃蛋白制备抗氧化活性多肽的工艺条件优化为对象,通过研究酶解时间、酶解温度、酶与底物浓度比及复合酶比例对核桃蛋白酶解物清除DPPH·能力的影响,并利用正交试验优化工艺条件,以提高核桃蛋白多肽对DPPH·的清除率。结果表明,酶解时间、酶解温度、酶与底物浓度比及复合酶比例对核桃蛋白酶解物清除DPPH·能力有一定影响;当木瓜蛋白酶与碱性蛋白酶复合酶解温度为45℃、时间1.5h、酶与底物浓度1500U/g、pH值7.0、复合酶比例为2∶1时,酶解物清除DPPH·的能力最强,清除率达78.7%。     

象拔蚌酶解制备抗氧化肽的工艺研究

[目的]探讨酶解象拔蚌蛤肉制备抗氧化肽的最佳工艺条件。[方法]采用复合蛋白酶对象拔蚌蛤肉进行酶解获得抗氧化肽,以羟自由基清除率及蛋白水解度为指标,通过单因素试验与响应面分析法对酶解工艺条件进行优化。[结果]象拔蚌蛤肉的最佳酶解工艺条件为料水比1∶11.11,加酶量3 000 U/g,酶解时间1.2 h,酶解温度55℃,pH 7.52;在该条件下,酶解液获得较高的蛋白水解度,同时对羟基自由基和DPPH自由基显示出很好的清除效果,其EC50值分别为11.26和37.75 mg/ml。[结论]该研究为象拔蚌保健食品的开发提供了依据。     

超声波辅助酶解鲭鱼制备抗氧化肽的研究

针对鲭鱼鱼肉蛋白质含量相对较高的特点,利用超声波辅助酶解制备抗氧化肽。以双缩脲法测得多肽含量,以对DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基的清除率为指标,探究制备鲭鱼抗氧化肽的最佳工艺条件。结果表明,最佳的酶解制备条件为:中性蛋白酶加酶量3%、酶解温度50℃、底物浓度4%、超声波辅助酶解时间2.5 h,在此条件下,得到的多肽抗氧化能力较强,对DPPH自由基的清除率达到89.33%,采用中性蛋白酶在超声波辅助下酶解鲭鱼蛋白制备抗氧化肽是可行的。     

传统工艺和新工艺金华火腿中抗氧化肽的比较

[目的]本文旨在比较传统工艺与新工艺金华火腿中抗氧化肽的活性。[方法]分别以传统工艺与新工艺生产的金华火腿为材料提取粗多肽,测定粗肽粉中粗肽含量及抗氧化肽活性。以谷胱甘肽(GSH)为对照,测定不同质量浓度粗肽液清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、螯合金属离子和清除超氧阴离子自由基的能力,以及还原力和总抗氧化能力,比较2种工艺条件下金华火腿中抗氧化肽活性的差异。[结果]传统工艺粗肽含量显著高于新工艺,并且当质量浓度1.0~5.0 mg·m L~(-1)时,传统工艺粗肽液清除超氧阴离子自由基的能力强于新工艺;当质量浓度为1.0 mg·m L~(-1)时,传统工艺粗肽液螯合亚铁离子能力显著高于新工艺(P0.05);新工艺粗肽液总抗氧化能力在4.0 mg·m L~(-1)时达到0.85 U,显著大于传统工艺;当质量浓度大于2.0 mg·m L~(-1)时,新工艺粗肽液清除DPPH自由基能力显著高于传统工艺,并且2种工艺提取的粗肽液还原能力均显著低于GSH。[结论]传统工艺比新工艺生产的金华火腿具有更高含量的粗肽,2种粗肽液还原能力相当,传统工艺粗肽液螯合亚铁离子能力及清除自由基能力强于新工艺,而新工艺粗肽液清除DPPH自由基能力和总抗氧化能力强于传统工艺。     

宽体金线蛭抗氧化活性肽的分离纯化及体外活性研究

采用三水平四因素的正交试验,用木瓜蛋白酶酶解,以肽含量为指标确定了宽体金线蛭最佳酶解工艺,即加酶量7 500 U·g-1底物,酶解温度40℃,料液比1∶4(m/V),酶解时间4 h,最初p H 8.5;测定了酶解原液及其经CM Sepharose FF分离纯化后活性较强部分清除ABTS自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基的活性。结果显示,宽体金线蛭短肽有较高的抗氧化活性,尤其经CM Sepharose FF分离纯化后的组分清除ABTS、羟基自由基活性明显强于抗坏血酸,但其清除超氧阴离子自由基活性较抗坏血酸弱。收集合并经CM Sepharose FF分离后活性强的部分,用Sephadex G-25脱盐,Q-TOF检测,抗氧化活性肽分子量大多为130.96~330.34 u。     

酶解鳙鱼蛋白制备活性肽的研究

以鳙鱼(Aristichthysnobilis)鱼肉蛋白为原料,采用木瓜蛋白酶对鳙鱼蛋白进行酶解,制备具有抗氧化活性的可溶性肽。研究酶浓度、底物浓度、温度、时间、pH对水解度和DPPH·自由基清除率的影响。通过正交试验设计对酶解工艺进行优化。结果表明,酶解的最佳条件是酶浓度1 400 U/g,底物浓度3.0%,温度60℃,酶解2 h,pH 7.0,在此条件下,所得可溶性肽的活性最高,对DPPH·自由基的清除率为69.09%,对羟自由基的清除率为75.22%,对O_2~-·自由基的清除率为61.92%。