抗菌肽CMIV在大肠杆菌中的表达与纯化

用PCR定点突变技术将改造的家蚕抗菌肽CMIV引入6×His·Tag序列,构建大肠杆菌硫氧还蛋白融合型表达载体pTrxFus-CMIV,转化GI724得到阳行Ni2 预装柱进行"一步纯化法"分离及纯化,得到了重组的抗菌肽.纯化产物与经过非变性凝胶电泳目的带的电洗脱、脱盐、肠激酶切割后、初步抑菌实验的结果一致.试验结果为以后的研究和生产奠定了基础.     

重组猪干扰素α的纯化工艺研究

[目的]研究重组猪干扰素α的纯化工艺,为进一步研究该蛋白的分子结构及rPoIFN-α标准品的制备奠定基础。[方法]将含重组菌E.coliBL21诱导表达后得到的粗制rPoIFN-α,分别用2种方案进行纯化。方案1,依次用GST亲和层析法、DEAE阴离子交换法及分子筛法层析三步法进行纯化;方案2,依次用GST亲和层析和分子筛法层析两步法进行纯化。纯化结果用SDS-PAGE及Western-blot进行纯度检测及鉴定。[结果]诱导表达后的表达产物经SDS-PAGE检测,发现在45Kd分子量处有目的条带,Western-blot检测有特异性条带。通过两步法纯化后的rPoIFN-α纯度达96%,蛋白得率为42.8%,三步纯化纯度为98.8%。[结论]两步法得到的蛋白纯度非常接近三步法,但与三步法相比工艺更为简单方便。     

新疆家蚕抗菌肽(Cecropin-XJ)特性的研究

探讨了新疆家蚕抗菌肽 (Cecropin -XJ)的抗菌特性。根据琼脂糖孔穴扩散法 ,检测抗菌肽的热稳定性、抑菌效价、对氨苄青霉素抗性菌的抑菌作用 ,检测抗菌肽对酸碱盐、人造胃液的耐受性及其抗菌谱。结果表明新疆家蚕抗菌肽 (Cecropin -XJ)具有很强的热稳定性、能够杀灭氨苄青霉素抗性菌、对酸碱盐、人造胃酸有一定的耐受性 ,其杀菌活力为 :1μg/ μl抗菌肽与 2 4 0 0 0单位的氨苄青霉素杀菌活力相当。新疆家蚕抗菌肽能够杀灭革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌 ,而对革兰氏阳性菌的抗菌活力高于革兰氏阴性菌 ,这一发现将为抗菌肽在农业、医疗卫生、畜牧业等方面的应用奠定基础 ,同时为深入研究抗菌肽作用机制提供了依据     

Bacillus mycoides磷脂酶C纯化制备研究

通过离子交换吸附(pH7.2)、超滤、离子交换层析(pH8.5)、疏水层析及凝胶层析等多步纯化过程对Bacillus mycoides 970 发酵所产胞外磷脂酶C的分离纯化进行了研究.纯化倍率为40.8倍,纯化酶活收率为25%.纯化样品比活力达到15370 U/mg.样品纯度经过SDS-PAGE检测达到电泳纯.     

蛋白质的层析分离

文章对蛋白质纯化过程中经常使用的层析方法,即凝胶过滤层析、离子交换层析和亲和层析这三种层析方法的原理、主要介质和操作步骤进行了综述。     

黑曲霉D226乳糖酶分离纯化研究

为从黑曲霉D2-26发酵液中得到单一的乳糖酶组分,以便研究其酶学性质。试验通过采用过滤、超滤、硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25脱盐、DEAE-纤维素-32离子强度梯度层析、Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE-纤维素-32 pH梯度层析等方法从发酵液中分离纯化乳糖酶,纯化酶液经PAGE电泳鉴定得到单一蛋白条带。为此建立了一套简单易行的黑曲霉D2-26乳糖酶分离纯化方法。     

DEAE-Sepharose Fast Flow分离纯化刺芹侧耳木质素降解酶

[目的]为Pleurotus eryngii—Co60-7木质素降解酶的分离纯化和综合利用提供试验依据。[方法]采用DEAE—Sepharose^TM Fast Flow离子交换介质,分别考察缓冲液pH值、流速和洗脱方式等对刺芹侧耳木质素降解酶分离纯化的影响,确定了最佳分离纯化层析条件。[结果]DEAE-Sephalose^TM Fast Flow分离纯化Pleurotus eryngii-Co60-7木质素降解酶的最佳层析条件为：选择20mmol／L,pH值为5．0醋酸钠一醋酸缓冲体系,3ml／min的流速,进行分步洗脱（100、200～300和1000mmoL／L NaCl的三步洗脱）,可较好地实现刺芹侧耳发酵液木质素降解酶初分,该纯化操作目标蛋白回收率达85％,纯化分离因素为2．71。[结论]该技术在分离纯化刺芹侧耳木质素降解酶上可行,具有潜在的工业应用价值。     

猪源抗菌肽的粗提及生物学活性的初步验证

将新鲜猪小肠超声破碎,经高温处理、乙酸浸提后,高速离心提取上清,上清液再经Sephadex G-50凝胶层析纯化,收集洗脱液.用纸片法检测抗菌肽粗提物的抑菌活性;鸡胚接种试验检测抗菌肽粗提物抑制病毒的作用.结果表明,抗菌肽粗提物有明显的抑制菌、病毒增殖的活性.     

家蚕抗菌肽的诱导及其抑菌作用研究

家蚕抗菌肽是存在于家蚕及蚕蛹的血淋巴内具有抗菌活性的多肽物质,在家蚕的天然免疫中起到至关重要的作用。采用不同剂量的γ-射线照射家蚕、对家蚕进行饥饿、电击和注射大肠杆菌等诱导处理后,提取家蚕抗菌肽,测定其抑菌效果。结果表明：以上的处理均能有效诱导抗菌物质的产生,其中饥饿法处理的家蚕产生抗菌肽的抑菌活性最强。本试验利用家蚕生产抗菌肽为家蚕的综合利用提供了一种新的途径。     

侧孢芽孢杆菌2-Q-9菌株外泌抗菌肽的纯化与鉴定

采用75%乙醇沉淀、阴离子交换色谱层析和阳离子交换色谱层析等方法,分离并纯化侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterospours)2-Q-9菌株外泌抗菌肽BL2Q9.结果表明,BL2Q9的相对分子质量为7 800,等电点为10.2.Edman降解测序发现其N末端封闭,串联质谱测序结果表明其与细菌第Ⅳ类鞭毛合成蛋白p...     

链霉菌702所产抗细菌组分S2的分离纯化

用硅胶柱层析进行链霉菌702所产抗细菌物质的初步纯化,柱层析硅胶为160~200目,以乙酸乙酯作为洗脱剂,收集R f值为0.46的洗脱液,45℃减压浓缩后在-20℃下静置24 h得到黄色针状结晶(组分S2)。此结晶甲醇溶解液经紫外吸收光谱测定结果表明,该抑细菌活性物质在199 nm有强吸收峰,而在240.2 nm处有弱吸收峰。此结晶用HPLC分析得到分离抑细菌物质的最佳条件为流动相:乙腈溶液600 g/L,检测波长200nm,从HPLC图谱峰面积来看有效物质含量达到961.1 g/L。使用制备型液相色谱进行扩大制备,收集峰尖物质,冻干后可得红色絮状物,此物质经生物检测,其抑菌效果良好,再经分析型液相色谱分析,可得其有效物质达994.7 g/L。     

一种微生态制剂中抑菌物质的分离与鉴定

植物乳杆菌发酵产生的抑菌物质经乙醇浸提、SephadexG-15层析、氨基酸组成分析、反相液相色谱分离及鉴定，发现该植物乳杆菌产生的抑菌物质为一类分子量较小（小于1000Da)，且比较接近，极性不同的多肽。     

一种微生态制剂中抑菌物质的分离与鉴定

植物乳杆菌发酵产生的抑菌物质经乙醇浸提、SephadexG-15层析、氨基酸组成分析、反相液相色谱分离及鉴定，发现该植物乳杆菌产生的抑菌物质为一类分子量较小（小于1000Da)，且比较接近，极性不同的多肽。     

土壤链霉菌CaiF1抗菌物质的分离纯化及活性研究

[目的]从土壤链霉菌CaiF1发酵液中分离纯化抗菌物质,并研究该物质的活性。[方法]采用乙酸乙酯萃取、大孔吸附树脂吸附、硅胶层析和制备型高效液相色谱（HPLC）等分离技术纯化抗菌物质,以金黄色葡萄球菌、白粉病菌为指示菌进行活性研究。[结果]土壤链霉菌CaiF1发酵液中抗菌物质得到分离纯化;该物质在pH 2.0～10.0、100℃和紫外照射24 h条件下抑菌活性几乎不变,对白粉病的防治效果达69.7%。[结论]分离纯化的土壤链霉菌CaiF1抗菌物质具有很好的稳定性,为其结构鉴定和开发应用提供理论依据。     

土壤链霉菌CaiF1抗菌物质的分离纯化及活性研究(英文)

[目的]从土壤链霉菌CaiF1发酵液中分离纯化抗菌物质,并研究该物质的活性。[方法]采用乙酸乙酯萃取,大孔吸附树脂吸附,硅胶层析和制备型高效液相色谱(HPLC)等分离技术纯化抗菌物质,以金黄色葡萄球菌、白粉病菌为指示菌进行活性研究。[结果]土壤链霉菌CaiF1发酵液中抗菌物质得到分离纯化;该物质在pH2.0-pH10.0、100℃和紫外照射24h条件下抑菌活性几乎不变,对白粉病的防治效果达69.7%。[结论]分离纯化的土壤链霉菌CaiF1抗菌物质具有很好的稳定性,为其结构鉴定和开发应用提供了理论依据。     

日本鳗鲡不同组织器官的抗菌活性比较

用10%醋酸提取日本鳗鲡肝脏、鳃、脾脏、胆汁、肾脏和血清中的抗菌活性物质,检测其对养殖鳗鲡常见的4种致病菌,即肠杆菌Enterobacter sp.（B01）、迟缓爱德华氏菌Edwardsiella tarda（B09）、气单胞菌属Aeromona sp.（B18）和嗜水气单胞菌Aeromona hydrophila（B27）的抑杀作用.结果显示：1）肝脏、脾脏、胆汁和鳃的样品对4株试验菌株均有明显的抑菌作用,肾脏对B18、B27和B01三株致病菌有抑菌作用,血清仅对B18有抑菌作用.2）不同样品对同一种致病菌的抗菌活性差异显著（P〈0.05）,按平均抑菌圈半径计算,其抗菌活性大体呈现为：肝脏〉鳃〉脾脏〉胆汁〉肾脏〉血清;同一样品对不同细菌的抑杀作用差异显著（P〈0.05）.采用反相高效液相色谱法分析上述各组织/器官的醋酸提取物中的活性组分,结果显示：肝脏、脾脏、胆汁和鳃样品中的活性组分（以杀伤指数大于50%计）主要集中于乙腈洗脱质量分数为19.4%～35.4%时,肾脏和血清中没有明显的抗菌作用（杀伤指数小于50%）.     

贻贝抗菌肽的分离纯化

[目的]从贻贝中提取具有抗菌作用的多肽。[方法]以紫贻贝为原料,采用0.5%的乙酸直接提取方式提取抗菌肽,再经过Sephacryl S-100聚丙烯酰胺凝胶色谱进行纯化,收集各馏分并用滤纸片扩散法测定其抗菌活性及对各种细菌的最低抑菌浓度,使用SDS-PAGE测定抗菌肽的分子质量,测定其在100℃条件下不同处理时间和不同pH条件下抗菌活性的变化。[结果]使用0.5%的乙酸作为提取液粗提取抗菌肽具有较高的提取效率,使用Sephacryl S-100纯化抗菌肽,可将抗菌肽纯化为单一物质。分离纯化出的贻贝抗菌肽具有较强的抗菌性,分子质量为5 908,且具有耐高温、耐酸碱的性质。[结论]该研究为抗菌肽的大规模生产奠定了基础。     

柞蚕抗菌肽的分离纯化及杀菌效应

大肠杆菌（E.coli K12D31)诱导的柞蚕（Antheraea pernyi)蛹血淋巴，经加热处理后，进行CM－Sepharose阳离子交换层析，FPLC Pep RPC反相柱及HPLC Hi-Pore C18反相柱层析，纯化得到一类抗菌肽。SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其相对分子质量约为2400，氨基酸组成分析表明其富含赖氨酸、丙氨酸和甘氨酸，摩尔分数分别为18．6％、15．5％和13．6％，不含甲硫氨酸、半胱氨酸、酪氨酸和组氨酸。抗菌谱表明该肽对多种革兰氏阴性和阳性细菌均有抑制作用。     

大蒜超氧化物歧化酶的分离纯化及其性质的研究

以壳聚糖为基质的金属螯合亲和层析法纯化大蒜SOD ,得到比活为 1191U/mg的酶蛋白 ,回收率为 71% ,纯化倍数为7.2 9。实验表明 ,经 8mol/L的尿素处理后大蒜SOD活性不发生变化 ,并且可耐 6 0℃高温 1h而活性不下降