猪流行性腹泻的研究进展

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种以呕吐、腹泻和脱水等为主要特征的急性肠道传染病。本文综述了该病的病毒特性、基因组结构、临床症状、流行规律、疫苗、预防等方面的国内外研究进展。     

猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒的RT-PCR鉴别诊断

猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）为套式病毒目冠状病毒科、冠状病毒属的病毒，引起猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea，PED）。该病是一种猪肠道传染病，以水泻、呕吐和脱水为特征，各种年龄的猪均易感染，哺乳仔猪、架子猪或育肥猪的发病率可达100％，尤其是哺乳仔猪受害最严重，该病主要发生于冬季，夏季也可发生。猪传染性胃肠炎病毒（porcine transmissible gastroenteritis virus，TGEV）为套式病毒目冠状病毒科、冠状病毒属的病毒，是猪传染性胃肠炎（porcine transmissible gastroenteritis，TGE）的主要病原。该病是一种急性、高度接触性传染病，以呕吐、严重腹泻、脱水为特征的传染病，对新生仔猪具有高度致死率。虽然不同年龄的猪对这种病毒均易感，但5周龄以上的猪死亡率较低，多成僵猪，使养猪饲料报酬降低。     

国家自然基金项目《猪流行性腹泻病毒细胞感染受体理化及功能特性的研究》通过验收

<正>由李一经教授主持的国家自然基金项目《猪流行性腹泻病毒细胞感染受体理化及功能特性的研究》通过验收。猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)可导致仔猪的严重腹泻,     

浙江及周边地区猪流行性腹泻病毒S基因分子特征分析

对2013年4月至2017年4月间浙江省及周边24个地区共282份病料进行猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、轮状病毒A型(porcine group A rotavirus, GARV)、猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCo V)和猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus, TGEV)等病原的检测,并选取其中的16份PEDV阳性样品进行S基因克隆和序列分析。结果显示:PEDV的检出率为64.89%(183/282),GARV为0.35%(1/282),PDCo V为4.25%(12/282),而未检出TGEV;PEDV在11月1日至次年4月1日间的累计检出率为74%,其余时间段的累计检出率为26%。对PEDV的S蛋白进行分子演化分析表明,PEDV可分为3个群,其中16份阳性样品均位于Ⅲ群,与疫苗毒株CV777、SM98和DR13株相比,核苷酸同源性为93.6%～95.2%,氨基酸同源性为92.4%～94.9%。16份PEDV阳性样品与中国PEDV的CV777疫苗毒株相比,形成了3个新的N-糖基化位点,破坏了1个N-糖基化位点。综上表明,当前仔猪腹泻主要病原为PEDV变异株,防控猪流行性腹泻需要注意季节的变化,也需要加快流行株疫苗的开发。     

仔猪流行性腹泻感染机制及其调控措施

猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的一种传染性肠道疾病，以呕吐、腹泻和脱水为特征。PED在仔猪中具有高发病率和死亡率，已成为我国养猪业的主要威胁。综述PED的发展历史、中国流行PEDV的分子特征和致病性、PEDV感染仔猪的分子机制，列举营养素及植物提取物对仔猪PED的调控作用，强调通过营养手段调节仔猪免疫功能、提高抗病能力的可行性，为通过营养手段预防或缓解仔猪PED提供理论参考。     

猪流行性腹泻病毒变异株RT-PCR检测方法的建立

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)可引起猪呕吐、腹泻和脱水,各年龄段的猪均可发病,而哺乳仔猪发病和死亡最为严重。2010年末发生的仔猪腹泻综合征的主要病原为PEDV变异株。根据PEDV变异株S基因发生碱基缺失和插入的特征设计并合成了1对特异性引物,首次建立了PEDV变异株的RT-PCR检测方法。结果表明,所建立的PCR检测方法特异性强,不和PEDV经典毒株反应,也不与其他动物病原反应;敏感性较高,最低可检测10~(-3)ng/μL,且重复性较好。用该方法对2013—2014年我国华东地区猪场的318份临床样品进行检测,结果发现109份样品(34.3%)为PEDV变异株阳性,表明我国腹泻猪群中PEDV变异株感染较为普遍。本研究建立的PCR方法可以作为PEDV变异株在临床上的一种鉴别诊断技术。     

冬春两季猪流行性腹泻的综合防控

猪流行性腹泻(PED),是一种接触性肠道传染疾病,由猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染所致,这一疾病的发病率与死亡率都很高,尤以仔猪最高,对养猪业造成了极大的影响和损失。冬末春初是猪流行性腹泻的高发期,必须做好该病的综合防控。     

抗PEDV血清对仔猪流行性腹泻防控效果研究

为研究仔猪病毒性腹泻的有效防控方案，选取陕西省某规模化猪场猪流行性腹泻( PED) 反复爆发的猪场开展防控试验。通过对陕西某频发PED猪场采取科学有效的返饲，获取抗PEDV高免血清，在本场进行PED防治效果观察。结果显示，制备的抗PEDV血清平均效价可达到1.82，可以提供的93.2％的保护率和87.5％的治愈率，表明该方法制备抗PEDV高免血清操作简单、质量安全，具有较好的防治效果。     

猪流行性腹泻病毒检测技术研究进展

猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪急性高度接触性肠道传染病,主要临床症状表现为呕吐、水样腹泻、脱水等。近年来,PED在全球范围内暴发流行,使养猪业遭受巨大的经济损失。对猪流行性腹泻的检测方法(病毒的分离和鉴定、免疫电镜法、免疫学检测法、分子生物学检测等)进行了综述,以期对猪流行性腹泻病毒的防控提供理论依据。     

阿克苏地区某规模化猪场猪流行性腹泻的诊断和疫苗效果评价

2021年1月阿克苏地区某规模化猪场腹泻病爆发，采用猪腹泻胶体金试剂盒检测发病仔猪腹泻物，结果显示猪流行性腹泻病毒（PEDV)阳性率为100%。为探究其原因，于2021年1—12月采集该猪场6 567份猪肛拭子，通过实时荧光定量法检测不同月份PEDV的感染情况，为防控猪流行性腹泻（PED），选用TGE-PED二联弱毒苗和灭活苗对妊娠85 d和105 d母猪进行联合免疫，应用间接ELISA法监测妊娠母猪的IgG、IgA抗体水平，并对该场PEDV疫苗免疫效果进行评价。结果显示PEDV的检出率在1月、2月、11月、12月较高，其余月份较低；妊娠母猪PEDV的抗体IgG和IgA抗体阳性率在产前15 d和分娩当天均达到了100%，离散度小于40%，免疫效果较好；产前1 d各批次PEDV的IgG抗体阳性率仍达到100%，但IgA抗体阳性率有不同程度下降，且离散度有不同程度升高，推测母猪可能存在排毒情况。本研究为该猪场PED防控提供了理论依据。     

猪Ⅲ型干扰素原核表达及其抗病毒效果研究

Ⅲ型干扰素(IFN-λ)具有较好的广谱抗病毒能力和免疫功能调节能力,一般在肠道等黏膜部位呈现高表达。猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)是引起仔猪腹泻的重要肠道病原,严重困扰生猪产业健康发展。研究构建了携带猪PoIFN-λ3基因的重组表达质粒,转化大肠埃希菌Rosetta感受态细胞原核表达后,经SDS-PAGE和Western blotting检测分析,重组PoIFN-λ3蛋白成功表达,大小约为27 ku,且以包涵体形式存在。变性、纯化、复性后的PoIFN-λ3重组蛋白刺激IPEC-J2细胞,ISG-15、OAS1、Mx-1、IFIT1、IFIT3、IFITM1和IFITM3等干扰素刺激基因(ISGs)表达均显著上调,且在12 h达到峰值(P0.001)。IPEC-J2细胞分别感染PEDV和PDCoV病毒时,用PoIFN-λ3重组蛋白预处理、同时处理和感染后处理这3种方式处理后观察病毒增殖情况,与对照组相比,PEDV和PDCoV病毒拷贝数均显著下降(P0.05)。上述结果表明,变性、纯化、复性后的PoIFN-λ3重组原核表达蛋白具有较好的生物活性,不仅可以诱导IPEC-J2细胞免疫刺激基因表达上调,在体外也可以抑制PEDV和PDCoV在IPEC-J2细胞中的复制,为防治仔猪病毒性腹泻提供了基础。     

猪流行性腹泻病毒特异性SIgA抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

【目的】快速了解猪群感染猪流行性腹泻病毒或免疫猪流行性腹泻病毒相关疫苗后猪群特异性SIgA抗体水平。【方法】对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)ZJ08株进行纯化，采用纯化的病毒作为包被抗原，以辣根过氧化物酶标记的SC(Secretory component,SC)多克隆抗体为标记抗体，通过优化检测条件，建立乳汁中猪流行性腹泻病毒特异性SIgA抗体间接ELISA检测方法。【结果】成功建立了猪流行性腹泻病毒SIgA抗体检测方法。PEDV抗原的最佳包倍浓度为0.6μg·孔^-1，样本最佳稀释比例为1∶5，作用时间1 h;SC标记抗体最适稀释比例为1∶100，作用时间1.5 h。建立的ELISA方法能够特异性检测样本中抗PEDV SIgA抗体，与PoRV(Porcine rotavirus, PoRV)、 TGEV(Transmissible gastroenteritis virus, TGEV)的阳性乳汁均无交叉反应；批内、批间重复试验的变异系数小于10%，具有良好的特异性和重复性。通过临床采集的乳汁样品测定发...     

PCV与PEDV混合感染的实验室检测

对采自湖北省内16家规模化养猪场的650份组织样品分别进行猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)和猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的病原学检测.结果表明:除PCV4未检出阳性外,PCV1、PCV2、PCV3、PEDV单一感染的样品阳性率分别...     

猪流行性腹泻病病毒RT-PCR分子诊断及部分S基因同源性分析

2018年3月,河南焦作市某猪场发生疑似猪流行性腹泻(PED)感染,而该猪场进行过PED疫苗免疫,为确诊病原,采集患病仔猪肠管内容物,利用RT-PCR法,扩增猪流行性腹泻病毒(PEDV)部分S基因片段,并将产物送基因公司测序。所获测序结果,运用DNAStar和MEGA5软件,与GeneBank下载的不同毒株S基因片段进行同源性分析。结果显示:RT-PCR扩增产物与预期大小一致,为969bp;该毒株部分S基因与经典毒株CV777同源性为94.8%,亲缘关系较远;与近年来流行毒株同源性为98.1%～99.1%,亲缘关系较近。PEDV变异毒株的出现可能是导致免疫失败的重要原因。     

猪流行性腹泻病毒5株安徽流行株M基因的克隆与序列分析

为了解安徽省猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的遗传变异,对5株PEDV安徽流行株M基因进行RT-PCR扩增、序列测定和分析。结果表明,5株PEDV安徽流行毒株M基因的全长均为681 bp,编码226个氨基酸,核苷酸同源性为99.1%～99.9%,其与国内外PEDV参考毒株核苷酸同源性为96.9%～100%。进化树分析显示,5株流行毒株与CV777、attenuated DR13、LZC和CHS亲缘关系较远,与2011年后国内外PEDV分离株的亲缘关系较近。     

猪流行性腹泻病毒的RT-PCR鉴定及其 M、N和E基因的序列分析

对引起仔猪严重腹泻的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)进行RT-PCR检测,并对PEDV部分基因进行克隆和序列分析。从陕西省某发生严重仔猪腹泻的养猪场采集肠道内容物,利用RT-PCR技术成功检测到PEDV感染。克隆检测到的PEDV M、N和E基因片段,并将该基因核苷酸序列和推导的氨基酸序列与其他不同来源的PEDV毒株进行比较分析。结果表明,克隆的M、N和E基因与其他已经发表的PEDV毒株核苷酸的同源性分别为96.3%～99.9%、95.2%～99.5%和96.1%～96.9%,氨基酸同源性分别为95.6%～99.6%、96.1%～99.5%和96.1%～98.7%;系统进化树结果表明,试验检测的PEDV与国内分离株的PEDV株亲缘关系更近。可见:陕西省养殖场存在猪流行性腹泻病毒感染,其M、N和E基因变异不大。     

3株猪流行性腹泻病毒S1基因的克隆及序列分析

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)可感染各阶段的猪,使患病动物出现水样腹泻、呕吐,并伴随厌食和精神沉郁等临床症状,对哺乳仔猪危害尤为严重。为了解河南某猪场PEDV流行毒株S1基因的变异情况,以江苏农牧科技职业学院动物药学院实验室保存的感染PEDV临床病料为样本,对其进行S1基因扩增、克隆以及序列分析。对S1基因的进化分析结果显示,该猪场PEDV分离株S1基因推导的氨基酸序列之间的同源性高达99%,BLAST搜索结果显示与AHCZ-2株的相似性最高,将获得序列与经典毒株CV777相比在第57位插入了4个氨基酸NQGV,在第134位插入1个氨基酸D,而在第157、158位缺失2个氨基酸,在中和表位区域共有11处氨基酸突变,与国内其他毒株均位于G2-b进化分支,研究结果为进一步掌握该地PEDV的流行毒株和毒力变异情况提供了理论依据。     

乳酸菌表面表达PEDV S1蛋白的研究

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)可引起猪的急性腹泻和脱水,具有较高的致死率.为了研究基因工程疫苗来预防此病,从pQE-S质粒为模板,PCR扩增了PEDV抗原决定簇基因片段sl基因,并将其克隆到大肠杆菌中.克隆质粒鉴定后,将其连接到pLA载体上,并转化到干酪乳杆菌中,用SDS-PAGE和Western blot方法进行了鉴定.实验结果显示,S1蛋白可在干酪乳杆菌中正确表达,并为PEDV抗血清所识别.     

猪Ⅲ型干扰素原核表达及其抗病毒效果研究

Ⅲ型干扰素(IFN-λ)具有较好的广谱抗病毒能力和免疫功能调节能力,一般在肠道等黏膜部位呈现高表达。猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)是引起仔猪腹泻的重要肠道病原,严重困扰生猪产业健康发展。研究构建了携带猪PoIFN-λ3基因的重组表达质粒,转化大肠埃希菌Rosetta感受态细胞原核表达后,经SDS-PAGE和Western blotting检测分析,重组PoIFN-λ3蛋白成功表达,大小约为27 ku,且以包涵体形式存在。变性、纯化、复性后的PoIFN-λ3重组蛋白刺激IPEC-J2细胞,ISG-15、OAS1、Mx-1、IFIT1、IFIT3、IFITM1和IFITM3等干扰素刺激基因(ISGs)表达均显著上调,且在12 h达到峰值(P<0.001)。IPEC-J2细胞分别感染PEDV和PDCoV病毒时,用PoIFN-λ3重组蛋白预处理、同时处理和感染后处理这3种方式处理后观察病毒增殖情况,与对照组相比,PEDV和PDCoV病毒拷贝数均显著下降(P<0.05)。上述结果表明,变性、纯化、复性后的PoIFN-λ3重组原核表达蛋白具有较好的生物活性,不仅可以诱导IPEC-J2细胞免疫刺激基因表达上调,在体外也可以抑制PEDV和PDCoV在IPEC-J2细胞中的复制,为防治仔猪病毒性腹泻提供了基础。     

猪流行性腹泻病毒SHpd/2012株S蛋白的表达鉴定

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种可致仔猪严重腹泻的高度接触性肠道传染病。S蛋白在病毒感染和入侵宿主细胞的过程中具有重要作用。为了研究S蛋白的特点,本研究扩增了PEDV新流行毒株SHpd/2012的纤突蛋白S基因分段片段S11、S12、S13、S21和S22,将得到的目的片段导入原核表达载体pGEX-6P-1中,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行表达、鉴定,获得了正确的PEDV S的分段蛋白S11(24-277aa)、S12(272-571aa)、S13(560-797aa)、S21(793-1109aa)及S22(1102-1384aa),为后续单克隆抗体的制备和致病机制的研究奠定了基础。