产酶溶杆菌OH11菌株几丁质酶基因的克隆与表达

利用PCR方法从产酶溶杆菌OH11菌株中克隆到编码几丁质酶的chiA基因.同源性比较发现,其推测产物与产酶溶杆菌C3菌株和N4-7菌株的ChiA有97%以上的序列一致性.基因经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后连接到含T7启动子的高表达载体pET21a( )上构建重组质粒pChiA,并转化宿主菌BL21(AI)产生BLChiA表达菌株.经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后发现,BLChiA菌株产生相对分子质量约为75×103的蛋白质.生物活性试验表明,该蛋白能水解几丁质,在几丁质培养基上产生一透明的水解圈,并对立枯丝核菌菌丝的生长有抑制作用.因此该蛋白具有一定的生物防治作用.     

粘质沙雷氏菌几丁质酶(ChiC)基因克隆及其生物信息学分析

从粘质沙雷氏菌(Serratia marcescensATCC14041)中克隆出几丁质酶基因(ChiC),将回收纯化的PCR产物与载体pMD18-T连接,构建成的重组质粒命名为pMD-Ch iC,将重组质粒转化到受体E.coliDH5α中进行克隆,经BamHI和NheI双酶切验证、核酸序列测定证实,重组质粒pMD-Ch iC含有几丁质酶C基因(ChiC)。利用生物信息学的方法,推测该粘质沙雷氏菌ChiC基因编码的蛋白质由480个氨基酸组成。预测该蛋白的等电点为5.63,分子量约为52kD。针对粘质沙雷氏菌中的几个几丁质酶基因做了进化树,进而验证了粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)几丁质酶(ChiC)在沙雷氏菌几丁质酶中的分类;同时对粘质沙雷氏菌几丁质酶C(ChiC)蛋白的高级结构作出了预测,得到其编码的属于18家族的蛋白质高级结构图谱。     

苏云金芽孢杆菌几丁质酶基因chiA在枯草芽孢杆菌中的分泌表达

[目的]研究来源于苏云金芽孢杆菌的几丁质酶基因chiA在枯草芽孢杆菌中的表达情况。[方法]以苏云金芽孢杆菌染色体DNA为模板,PCR扩增获取几丁质酶基因chiA,将其与枯草芽孢杆菌表达载体pHSG连接,构建重组菌,经IPTG诱导后,检测培养液中的几丁质酶活性。[结果]扩增得到几丁质酶基因chiA大小为2.5 kb。构建的重组菌对底物[4-MU-(GlcNAc)3]显示出一定的水解活性,培养液酶活约为2.8 U/ml,而pHSG空质粒转化子在同样条件下其培养液没有明显酶活。该重组酶的最适pH值为6.5,最适反应温度为50℃,与苏云金芽孢杆菌自身产生的几丁质酶性质一致。[结论]几丁质酶基因chiA能在枯草芽孢杆菌中成功表达,表达产物可成功分泌到细胞外。     

产酶溶杆菌OH11菌株β-1,3-葡聚糖酶基因的克隆与表达

利用PCR方法从OH11菌株中克隆到β-1,3-葡聚糖酶基因,通过同源性比较发现其推测产物与产酶溶杆菌C3菌株和N4-7菌株的β-1,3-葡聚糖酶有90%以上的同源性。该基因经NdeⅠ、XhoⅡ或HindⅢ酶切后连接到含T7启动子的高表达载体pET21a( )和载体pET30a( )上构建重组质粒,并分别转化宿主菌BL21(AI)和BL21(DE3)产生表达菌株。表达菌株BLGluA和BLGluC经IPTG诱导后分别产生相对分子量约为29 000(GluA蛋白)和44 000(GluC蛋白)的蛋白。酶活性和抑菌活性测定结果表明,GluA蛋白和GluC蛋白能将海带多糖水解,在海带多糖培养基上产生透明的水解圈,并对立枯丝核菌菌丝的生长有抑制作用,具有一定的生物防治作用。     

黏质沙雷氏菌3种几丁质酶基因的克隆及功能预测

黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)可产生多种几丁质酶,为比较黏质沙雷氏菌Txch-1中几丁质酶系在结构上的差别,利用3对特异性引物从Txch-1中扩增获得了3种几丁质酶SeChiA、SeChiC、SeChi40基因,并进行生物信息学分析与比较.结果表明:SeChiA基因全长2196bp,含有1个1 ...     

高温纤维素降解菌的筛选及内切酶基因的克隆表达

以滤纸条作为唯一碳源从以牛粪和砻糠为原料的堆肥样品中分离到了8株具有纤维素降解特性的微生物,其中菌株T1和T2在刚果红培养基上培养48 h后的水解圈明显大于其他菌株。对菌株T1和T2进行了生理生化和16S rRNA序列分析,克隆了菌株T2的内切酶基因并对该基因进行了结构域分析,同时构建了表达载体p28-egB并将其转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中进行表达。研究结果表明:(1)菌株T1和T2可分别鉴定为Bacillus cereus和Bacillus subtilis;(2)菌株T2的内切酶基因片段大小为1500 bp,编码499个氨基酸,结构域分析显示该酶由两个不连续的结构域组成,其一为N端催化结构域,由糖基水解酶家族5组成,其二为C端底物结合结构域,由碳水化合物绑定结构域家族3组成;(3)在E.coli BL21中成功表达了菌株T2的内切酶基因,SDS-PAGE电泳图谱显示该蛋白大小约为50 KD,浓度约为93.14 mg·L-1。     

黏质沙雷氏菌产几丁质酶的诱变

分析了紫外线、NaNO2及其复合处理对黏质沙雷氏菌产几丁质酶的诱变效果,经几丁质平板透明圈初筛与摇瓶复筛,筛选出1株几丁质酶活较高的诱变菌株NU2,产量为出发菌株的2.75倍.研究发现,原生质体紫外线诱变对酶活的提高效果比菌悬液NaNO2诱变更明显;复合诱变中,菌悬液经NaNO2诱变后再经原生质体紫外线诱变的方法产酶能力更强,且菌株遗传稳定性较好.     

高产果胶酶细菌的筛选及其Pel基因克隆

用透明圈法筛选50份产果胶酶菌株,通过PCR方法从菌株的基因组DNA克隆果胶酶Pel基因,Pel基因与PMD18-T载体连接后转化到大肠杆菌DH5α,用菌落PCR方法和透明圈法筛选阳性重组菌株.结果表明,成功筛选出一株透明圈大的T85-166菌株,初酶液果胶酶活力达213.30 U/ml,克隆了877 bp的Pel基因片段并在大肠杆菌DH5a中有表达,其表达产物具有生物学活性.     

黏质沙雷氏菌灵菌红素合成基因簇异源表达及其潜在的温度调控机制

【目的】构建黏质沙雷氏菌FZSF02灵菌红素合成基因簇的异源表达菌株,探究其合成灵菌红素可能的温度调控机制。【方法】构建3种携带不同启动子的异源表达大肠杆菌菌株,并利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测FZSF02中pig基因簇pigA、pigF、pigN基因在37℃与28℃培养条件下的转录水平差异。【结果】在28℃低温条件下,3种不同的启动子均能在大肠杆菌中启动各自重组质粒所携带的pig基因簇表达并合成灵菌红素,其中携带T7强启动子的重组菌株经IPTG诱导后可以在37℃少量合成色素,其余菌株37℃不能合成色素。RT-qPCR结果显示在黏质沙雷氏菌中上述基因转录水平在37℃条件下较28℃出现下调。【结论】黏质沙雷氏菌FZSF02之所以能够在28℃合成灵菌红素而在37℃无法合成灵菌红素,一方面由于pig基因簇的编码基因转录水平下调,另一方面是由基因簇编码的合成灵菌红素所需前体MBC和MAP的一种或者几种关键酶在相对较高的温度(37℃)条件下活性受到抑制导致。     

嗜热毁丝霉菌多糖裂解单加氧酶基因的克隆及生物信息学分析

多糖裂解单加氧酶(LPMO)是近来发现的一类裂解结晶多糖(如纤维素和几丁质)的氧化酶,它通过单加氧的形式断裂多糖底物之间的糖苷键。为研究LPMO的功能和结构特性,采用基因工程技术从嗜热毁丝霉菌中克隆出LPMO基因(MtLPMO9F)并构建重组表达载体和重组表达菌株,采用生物信息学在线工具和软件分析MtLPMO9F基因编码的蛋白质MtLPMO9F的理化性质、亲/疏水性、信号肽、结构域及空间结构等。结果表明:成功构建了MtLPMO9F真核表达载体及毕赤酵母表达菌株。生物信息学分析结果表明,MtLPMO9F的预测分子量约35.19kDa,理论等电点为5.13,有4个潜在的N-糖基化位点和16个O-糖基化位点。系统进化分析显示MtLPMO9F与嗜热子囊菌(Thermoascus aurantiacus)的同家族酶TaLPMO9A有亲缘关系,序列相似性为43%。     

石玉8号

<正> 该品种由石家庄市农科院玉米室于1995年用山东省莱阳市农科院选育的自交系478做母本,自选系石140-3为父本杂交选育而成,1998年参加河北省夏玉米中熟组区域试验,平均亩产519.9公斤,比对照冀单29号增产2.91％,6个试点中,4点增产,增     

G8心事

西方八国(G8)财长虽然每年都要以极其隆重的形式进行4至5次的集体会面,但于2月11日在俄罗斯落幕的2006年首次G8财长会议却凸显出了不同的格调:第一次拿到G8轮值主席国权杖的俄罗斯扮演着东道国的角色并出尽威风;诸如人民币升值等细枝末节的问题被搁置一边,而能源问题跃上了焦点     

生防菌菌株C8-8产几丁质酶的条件研究

几丁质又称为甲壳素或甲壳质(Ch itin),是一种由N-乙酰氨基葡萄糖以-β1,4糖苷键连接而成,广泛存在于自然界的直链状高分子生物多聚体[1]。许多微生物都可以产生几丁质酶,随着对微生物几丁质酶及其特征的研究深入,人们发现大多数产几丁质酶的微生物对真菌具有抵抗作用,而且多数     

拮抗细菌C8-8培养条件的研究

就拮抗细菌C8-8的最适培养条件进行了研究。结果表明,在NA培养基上,拮抗细菌C8-8的最适培养温度为30～35℃,最适pH值范围为7.0～8.0;培养时间、初始接种量对菌株C8-8的生长有明显的影响,培养27 h后菌液OD值最高;最佳初始接种量应是培养液体积的0.5/300～1/300;不同通气量对菌株生长无明显影响。     

黑玉34-8

黑玉34-8特用玉米杂交种是从农科院刚育成引进的水果玉米新品系.2年示范证明产量和经济价值均优于其他玉米(意大利黑玉米、圣尼墨宝、中华黑糯、黑糯一号、黑珍珠)产干籽粒,一般栽培水平亩产超过500千克.     

川苎8号

川茔8号由四川省达州市农科所配而成,2002年3月通过四川省农作物品种审定委员会审定,适宜长江中、下游及华南麻区的平坝、丘陵、低山地区种植.……