苏云金芽孢杆菌普鲁兰酶编码基因amyX的鉴定与重组酶性质研究

[目的]研究苏云金芽孢杆菌konkukian亚种amyX基因在大肠杆菌中的表达及表达产物的性质。[方法]以苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)染色体DNA为模板,PCR扩增得到amyX普鲁兰酶结构基因,再与大肠杆菌表达载体pET28a连接,构建能表达普鲁兰酶的重组大肠杆菌。重组菌经IPTG诱导,表达有活性的普鲁兰酶,初步分析重组普鲁兰酶的酶学性质。[结果]结果表明,苏云金芽孢杆菌基因组序列有两条基因(pulA和amyX)可能编码普鲁兰酶。温度为50℃,pH为6.0时,重组酶不能水解淀粉,属于I型普鲁兰酶。[结论]amyX基因能在大肠杆菌细胞内成功表达,表达产物具有典型的I型普鲁兰酶的特性。     

产甘油假丝酵母产甘油关键酶基因的克隆、测序及植物表达载体的构建

用PCR的方法，从产甘油假丝酵母WL2002—5中扩增出了产甘油关键酶3-磷酸甘油脱氢酶（glycerol 3-phosphate dehydrogenase）和3-磷酸甘油磷酸酶（glycerol 3-phosphate phosphatase）的基因GPD和GPP。对这两个基因测序,发现基与酿酒酵母（5accharomyces.cereuisiae）的GPD、GPP基因的相似性达99％。并构建了其在植物中的表达载体。     

来源于Thermomyces sp.的植酸酶基因在毕赤酵母中的组成型表达

[目的]研究植酸酶基因在毕赤酵母中的组成型表达。[方法]用PCR方法从嗜热真菌(Thermomyces sp.)中扩增到去除信号肽和内含子后约1.4 kb的phyT基因编码区片段,并对该片段进行克隆与序列测定。[结果]序列相似性分析表明,克隆的植酸酶基因无信号肽和内含子,与报道的嗜热真菌Thermomyces lanuginosus植酸酶基因相似性最高,DNA序列相似性为95%。从验证后的转化子筛选得到了表达嗜热真菌植酸酶的重组毕赤酵母菌株p-phy T,SDS-PAGE分析显示其分子量约为45 kD,重组毕赤酵母成功表达植酸酶。与野生型菌株相比,结果显示重组植酸酶酶活性提高了12.6%,最适温度65℃,75℃仍有64%以上酶活活性;最适pH值为5.5。[结论]嗜热真菌植酸酶基因用组成型质粒能在毕赤酵母中表达。     

Monacolin K转化产物对HMG-CoA酶的抑制作用

采用分光光度法测定HMG-CoA还原酶的酶活性,探讨Monacolin K 微生物转化产物与普伐他汀、辛伐他汀对HMG-CoA还原酶抑制作用的关系.结果表明:Monaeolin K 微生物转化产物的IC50为377.69μg·mL-1,显著低于Monacolin K 和普伐他汀,而与辛伐他汀的IC50差异不显著.     

饲粮添加喹乙醇对肥育猪增重和养分消化率的影响

本试验选用全同胞(杜X大)杂种肥育猪6头(其中4头去势公猪,2头去势母猪),按照配对试验设计,进行了饲粮添加咬乙醉(50ppm)和不添加的饲养对比试验和消化试验,为期1个月,基础饲粮含消化能3o78kcal/kg,粗蛋白质17.4%,     

产甘油假丝酵母基因CgZWF片段的克隆与序列分析

以产甘油假丝酵母基因组DNA为模板,通过简并PCR和反向PCR扩增得到了一个长为1 244bp片段,并将其克隆到pMD18-Tvector.基因序列分析表明,此片段编码的氨基酸序列与Kluyveromyces lactis的G6pdp同源性最高(62.7%),表明已经得到编码葡萄糖6-磷酸脱氢酶的目的基因片段.该研究为阐明磷酸戊糖途径在产甘油假丝酵母耐高渗和甘油高产中的作用奠定了基础.     

苏云金芽孢杆菌几丁质酶基因chiA在枯草芽孢杆菌中的分泌表达

[目的]研究来源于苏云金芽孢杆菌的几丁质酶基因chiA在枯草芽孢杆菌中的表达情况。[方法]以苏云金芽孢杆菌染色体DNA为模板,PCR扩增获取几丁质酶基因chiA,将其与枯草芽孢杆菌表达载体pHSG连接,构建重组菌,经IPTG诱导后,检测培养液中的几丁质酶活性。[结果]扩增得到几丁质酶基因chiA大小为2.5 kb。构建的重组菌对底物[4-MU-(GlcNAc)3]显示出一定的水解活性,培养液酶活约为2.8 U/ml,而pHSG空质粒转化子在同样条件下其培养液没有明显酶活。该重组酶的最适pH值为6.5,最适反应温度为50℃,与苏云金芽孢杆菌自身产生的几丁质酶性质一致。[结论]几丁质酶基因chiA能在枯草芽孢杆菌中成功表达,表达产物可成功分泌到细胞外。