来源于Thermomyces sp.的植酸酶基因在毕赤酵母中的组成型表达

[目的]研究植酸酶基因在毕赤酵母中的组成型表达。[方法]用PCR方法从嗜热真菌(Thermomyces sp.)中扩增到去除信号肽和内含子后约1.4 kb的phyT基因编码区片段,并对该片段进行克隆与序列测定。[结果]序列相似性分析表明,克隆的植酸酶基因无信号肽和内含子,与报道的嗜热真菌Thermomyces lanuginosus植酸酶基因相似性最高,DNA序列相似性为95%。从验证后的转化子筛选得到了表达嗜热真菌植酸酶的重组毕赤酵母菌株p-phy T,SDS-PAGE分析显示其分子量约为45 kD,重组毕赤酵母成功表达植酸酶。与野生型菌株相比,结果显示重组植酸酶酶活性提高了12.6%,最适温度65℃,75℃仍有64%以上酶活活性;最适pH值为5.5。[结论]嗜热真菌植酸酶基因用组成型质粒能在毕赤酵母中表达。     

水体污染指示微生物的初步研究

[目的]建立水体污染敏感微生物的指示机制。[方法]在太湖湖心处各监测点采取水样,通过培养基培养试验选出代表水样和适宜的指示微生物。[结果]菌株B在各水样中的百分比不小于50%,其数量随COD浓度的增加先增加后减少。当水样的COD浓度为15 mg/L时,菌株B的菌落数为6×103个/ml;当水样的COD浓度为40 mg/L时,其菌落数为1×104个/ml;当COD浓度从40 mg/L增至100 mg/L时,菌落数平稳地从1×104个/ml增至4×104个/ml;当COD浓度不小于100 mg/L时,菌落数的增幅骤然提高;当COD浓度为140 mg/L时,菌落数增至1.5×105个/ml。菌种B属于革兰氏阴性短杆菌,其最高可生长温度高于37℃,最低可生长温度范围为10~17℃,最适生长温度为30℃左右,适宜pH范围为5.0~9.0,最适pH为8.0。[结论]菌种B对水体有机污染程度有很好的预警指示作用。     

苏云金芽孢杆菌几丁质酶基因chiA在枯草芽孢杆菌中的分泌表达

[目的]研究来源于苏云金芽孢杆菌的几丁质酶基因chiA在枯草芽孢杆菌中的表达情况。[方法]以苏云金芽孢杆菌染色体DNA为模板,PCR扩增获取几丁质酶基因chiA,将其与枯草芽孢杆菌表达载体pHSG连接,构建重组菌,经IPTG诱导后,检测培养液中的几丁质酶活性。[结果]扩增得到几丁质酶基因chiA大小为2.5 kb。构建的重组菌对底物[4-MU-(GlcNAc)3]显示出一定的水解活性,培养液酶活约为2.8 U/ml,而pHSG空质粒转化子在同样条件下其培养液没有明显酶活。该重组酶的最适pH值为6.5,最适反应温度为50℃,与苏云金芽孢杆菌自身产生的几丁质酶性质一致。[结论]几丁质酶基因chiA能在枯草芽孢杆菌中成功表达,表达产物可成功分泌到细胞外。