Kiss-1基因在不同发育阶段五指山猪睾丸中的表达及定位研究

试验采用荧光定量技术研究亲吻素-1(Kiss-1)基因mRNA在30、60、80(初情期)和120日龄五指山公猪睾丸中的表达情况,并采用免疫组化技术定位其表达。结果显示,Kiss-1mRNA在五指山猪睾丸中的表达随着年龄的增长表达量逐渐升高,到初情期(80日龄)时达到最高(P0.05),随后到120日龄时显著降低(P0.05);免疫组化结果显示,睾丸间质细胞、精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、圆形精子细胞及间质细胞中均发现Kiss-1阳性反应产物,而在精子中未发现Kiss-1阳性表达产物。结果证实,Kiss-1基因在五指山猪精子发生过程中发挥着重要作用。     

羊驼睾丸细胞凋亡及凋亡相关蛋白的定位

本研究旨在观察羊驼睾丸的出生后发育和精子发生过程中的细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl2和Caspase3 的定位.取材新生、12月龄和24月龄羊驼的睾丸,用TUNEL法检测睾丸发育和精子发生过程的细胞凋亡,用免疫组织化学技术检测凋亡相关蛋白Bcl2和Caspase3在羊驼出生后发育和精子发生过程中的定位.结果显示在新生羊驼睾丸未检测到TUNEL阳性细胞,Caspase3和Bcl2表达于间质细胞,提示在新生期凋亡蛋白参与间质细胞凋亡的调节,为曲精小管的发育提供空间;12月龄羊驼睾丸TUNEL阳性细胞定位于曲精小管中央部分,Caspase3 和Bcl2定位于间质细胞和曲精小管中央生殖细胞,提示在青春期(12月龄)羊驼睾丸,细胞凋亡和凋亡相关蛋白参与曲精小管管腔形成的调节;24月龄羊驼睾丸TUNEL阳性细胞定位于精原细胞、精母细胞和精子细胞,Caspase3 和Bcl2定位于间质细胞和各个发育阶段的生精细胞,Caspase3阳性细胞在精原细胞最高,向精母细胞和精子细胞逐渐减少,Bcl2在精原细胞弱阳性表达,在血睾屏障以内的曲精小管近腔室部分呈弥散性强阳性表达,提示在性成熟(24月龄)羊驼睾丸精子发生过程中,细胞凋亡主要发生于精原细胞和早期精母细胞,Bcl2可能抑制精母细胞之后生殖细胞的凋亡.结果提示在羊驼睾丸出生后发育和精子发生过程中存在细胞凋亡现象;凋亡蛋白Caspase3和Bcl2参与羊驼睾丸发育和精子发生过程中细胞凋亡的调节.     

生长分化因子9及其受体在成年狗睾丸中的表达与定位

本研究旨在探讨生长分化因子9(GDF9)及其受体在雄性成年狗睾丸中的定位与表达。采用RT-PCR、免疫组织化学法、免疫印迹法检测GDF9及其受体ALK5蛋白在成年狗睾丸中的表达与定位。GDF9蛋白在成年狗睾丸中的表达显示,GDF9阶段特异性地定位在成年狗睾丸生精上皮的圆形精细胞和粗线期精母细胞胞质。GDF9I型膜受体ALK5蛋白在成年狗睾丸中的表达显示,ALK5主要定位在圆形精细胞。本研究显示,GDF9及其膜受体ALK5在成年狗睾丸中均有表达,提示,GDF9由圆形精细胞和粗线期精母细胞特异性分泌,通过旁分泌形式调控支持细胞间紧密连接及支持细胞与生殖细胞间的细胞连接,并以自分泌形式调控生殖细胞的生长与迁移。     

PHGPx在体外共培养山羊睾丸生精细胞中的定位研究

为探讨磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)在雄性动物生殖机能中的作用及其在体外培养山羊睾丸生精细胞的定位,在已成功构建的山羊睾丸支持细胞-生精细胞共培养的基础上,制作细胞爬片,采用免疫细胞化学技术定位PHGPx的表达。结果显示,PHGPx在支持细胞、精原细胞中不表达,在圆形精子细胞细胞质检测到阳性表达产物。表明PHGPx在精子发生后期圆形精子的变态发育中起特定的调节作用,但作用机制有待深入研究。     

雌激素β受体在大鼠睾丸中的表达与发育研究

为了研究雌激素β受体(ER-β)在不同年龄大鼠睾丸中的表达,试验采用免疫组织化学SP法对雌激素β受体在4,23,50周龄大鼠睾丸组织中的表达进行了研究.结果表明:4周龄大鼠睾丸雌激素β受体免疫反应产物表现出强阳性,主要分布在间质细胞和肌样细胞中;23周龄雌激素β受体免疫反应产物表现出中等阳性,主要出现在少量的间质细胞和大量的肌样细胞中;50周龄大鼠睾丸仅见极少数区域个别的阳性间质细胞与肌样细胞,免疫反应产物表现出弱阳性;随着大鼠年龄的增长,大鼠睾丸中的雌激素β受体的表达量呈下降趋势.     

雌激素β受体在大鼠睾丸中的表达与发育研究

为了研究雌激素β受体(ER-β)在不同年龄大鼠睾丸中的表达,试验采用免疫组织化学SP法对雌激素β受体在4,23,50周龄大鼠睾丸组织中的表达进行了研究。结果表明:4周龄大鼠睾丸雌激素β受体免疫反应产物表现出强阳性,主要分布在间质细胞和肌样细胞中;23周龄雌激素β受体免疫反应产物表现出中等阳性,主要出现在少量的间质细胞和大量的肌样细胞中;50周龄大鼠睾丸仅见极少数区域个别的阳性间质细胞与肌样细胞,免疫反应产物表现出弱阳性;随着大鼠年龄的增长,大鼠睾丸中的雌激素β受体的表达量呈下降趋势。     

氟对不同日龄雄性大鼠睾丸组织中表皮生长因子及其受体表达的影响

为探讨氟对不同日龄雄性Wistar大鼠睾丸组织中表皮生长因子（EGF）及其受体（EGFR）表达的影响,选用40日龄雄性Wistar大鼠200只,随机分为2组分别饮用含150mg/L氟化钠的去离子水和去离子水,并于50,80,100,120日龄时处死大鼠,对睾丸组织中EGF及其EGFR的表达情况进行分析。结果表明,染氟组50日龄时睾丸组织间质细胞、精原细胞和生精细胞中EGF的表达量极显著下降（P〈0.01）,精子细胞和管腔脱落物中EGF的表达量降低不明显（P〉0.05）;80,100,120日龄时虽有下降趋势,但无统计学意义（P〉0.05）。而染氟组睾丸组织中EGFR的表达量在50,80,100日龄时均降低,但50,80日龄睾丸组织精子细胞和100日龄睾丸组织曲细精管管腔脱落物中EGFR的表达量极显著下降（P〈0.01）,50日龄时生精细胞中EGFR的表达量显著降低（P〈0.05）;而120日龄时睾丸组织中EGFR的表达量均增高,且管腔脱落物中极显著增高（P〈0.01）。证明氟可降低雄性Wist-ar大鼠性成熟时EGF的表达量以影响精子的生长发育,长期抑制EGF的表达使EGFR的表达增高影响生殖功能。     

水牛精原细胞的体外培养及分化

以探讨水牛精原细胞体外培养的发育潜能为目的,对3～5月龄水牛睾丸组织进行精原细胞与支持细胞的体外共培养.两步酶法消化睾丸组织来制备水牛生殖细胞悬液,接种于含10%FBS的DMEM培养液中,在37℃、5%CO2、饱和湿度下培养30 d,观察细胞的生长和形态变化,并对培养4周的细胞进行RT-PCR分析,以检测PRM-2和TP-1基因的表达情况.结果显示,水牛精原细胞体外培养24 h后,精原细胞(10.0～12.5μm)呈圆形并紧贴支持细胞上;养7～8 d后.精原细胞出现聚集状态;养10 d后,有细胞克隆形成;养30 d后,出现似长形精子细胞(8.0～10.0μm).对培养4用后的细胞进行RT-PCR分析,精子细胞特异表达基因PRM-2被检测出来.结果表明,采用本试验体外培养条件对水牛精原细胞进行培养,能够满足精原细胞体外长期培养的需要,并可以发生增殖与分化而形成似精子细胞.     

引起公牛繁殖障碍的因素分析

1遗传性繁殖障碍1.1隐睾隐睾睾丸因位于腹腔,在公牛出生后的生长发育过程中睾丸发育受阻,不仅体积小,而且内分泌机能和生精机能均受到影响,甚至不产生精子。解剖腹腔内睾丸发现,虽然间质细胞数量增加,但精细管上皮只有一层精原细胞和支持细胞。两侧隐睾的精液中,只有副性腺分泌液而无精子,单侧隐睾的精液中可见到精子,只是精子密度较低。隐睾症为隐性遗传病,单纯淘汰同胞不能完全消除群体中的隐睾症基因。为了防止隐睾症的发生,在一个群体一旦发现隐睾症,就必须淘汰所有与之有亲缘关系的个体。1.2睾丸发育不全睾丸发育不全是指精细管生殖层…     

热应激对猪睾丸Hsp60和Hsp90表达与定位的影响

建立了环境热应激和睾丸局部热处理猪动物模型,用RT-qPCR和Western blot法检测了热休克蛋白家族成员Hsp60和Hsp90 mRNA和蛋白表达水平的变化,用免疫组织化学方法检测Hsp60和Hsp90在猪睾丸的组织细胞学定位。RT-qPCR和Western blot结果显示,与对照组相比,环境热应激组和局部睾丸热应激组Hsp60和Hsp90 mRNA和蛋白的表达量均显著升高。免疫组织化学结果显示,对照组Hsp60主要表达在精母细胞和支持细胞的细胞质,环境热应激组和局部睾丸热应激组Hsp60免疫阳性从精母细胞的细胞质转移至精原细胞的细胞核。热处理前后Hsp90定位于精原细胞和长形精子细胞。环境高温热应激和局部睾丸热刺激导致Hsp60和Hsp90表达升高,提示Hsp60和Hsp90在热应激猪睾丸精子发生过程中发挥重要作用。     

生精细胞特异性敲除ARHGEF15基因对小鼠精子发生的影响

本实验旨在探究鸟苷酸交换因子15(ARHGEF15)基因在小鼠睾丸中的表达模式及其对精子发生的影响，本研究通过免疫组化和免疫荧光双染色实验检测ARHGEF15蛋白在5日龄和成年（8～9周龄）小鼠睾丸中的表达模式，并利用Cre-LoxP系统特异性敲除小鼠生精细胞内的ARHGEF15基因。结果显示：在5日龄小鼠睾丸中，ARHGEF15蛋白主要表达于精原细胞的细胞质和/或细胞膜，在成年小鼠睾丸中ARHGEF15蛋白主要定位于支持细胞的细胞核；条件性敲除（cKO）组小鼠睾丸的形态大小、组织学结构、精子的运动性能及形态与对照组相比无显著差异，且cKO组小鼠的繁育力也不受影响。因此，ARHGEF15基因主要在发育早期小鼠睾丸的生精细胞中表达，敲除生精细胞内的ARHGEF15基因不影响小鼠的繁殖能力和精子发生。     

雄激素受体基因在绵羊公羔不同组织中的表达特性及性腺中的定位

旨在研究雄激素受体(Androgen receptors,ARs)基因在绵羊公羔不同组织中的表达特性及在性腺中的定位。本研究以QRT-PCR法检测各组织ARmRNA表达规律,免疫组化技术对睾丸和附睾中AR进行定位分析,蛋白质印迹技术对AR蛋白表达量进行定性研究。结果显示:(1)AR在不同组织中均有不同程度的表达,其中在睾丸和心脏中大量表达;(2)在附睾头、体、尾部单层柱状上皮细胞和间质细胞中检测到较弱的阳性信号;睾丸组织间质细胞、精原细胞、管周肌样细胞检测到强阳性信号。综上表明:AR在绵羊不同组织中广泛表达,AR在性腺的发育和精子的成熟过程以及对心脏的保护方面发挥重要作用,其作用机制需进一步研究。     

GPR54基因在绵羊不同组织中的表达及其在睾丸中的定位研究

试验旨在研究GPR54(G-protein coupled receptor 54)基因在绵羊不同组织中的表达及其在4~6月龄公羔睾丸组织中的表达特性及定位。本研究采用实时荧光定量PCR法检测各组织GPR54 mRNA表达规律,以及其在不同月龄公羔睾丸中的表达量,运用免疫组化技术对睾丸中GPR54基因进行定位分析。结果显示,GPR54在不同组织中均有不同程度的表达,其中在下丘脑、垂体和睾丸中大量表达;GPR54在4~6月龄绵羊公羔睾丸组织中呈阶段性表达,6月龄表达量显著高于4和5月龄(P<0.05);4月龄时,在精原细胞和极少数的初级精母细胞中检测到较弱的阳性信号;6月龄性成熟时,在睾丸中分裂早期的精子细胞检测到强阳性信号。综上表明,GPR54基因在绵羊不同组织中广泛表达,在下丘脑-垂体-睾丸生殖轴中发挥重要的作用,并与动物的性成熟及雄性动物精子发生过程有密切的关系。     

纳米硒对性成熟前波尔山羊睾丸发育的影响

为了研究日粮中添加纳米硒时公羊睾丸发育的影响.试验选用体重、日龄接近的20只波尔山羊公羔羊,随机分为两组,一组日粮中添加0.3 mg/kg的纳米硒(以硒计),另一组饲喂基础日粮,预试2周,试验期每月测量睾丸周径、长度和高度,每组阉割1只公羔,按照常规方法制作石蜡切片,观察睾丸组织结构.结果显示:3月龄时纳米硒组睾丸间质组织增生发育,4月龄时纳米硒组睾丸曲精细管中精原细胞开始发育分化;5月龄时曲精细管中可见大量的精子,而时照组间质组织以及曲精细管发育、精母细胞发育分化较纳米硒组缓慢.试验表明,日粮中添加一定浓度的纳米硒能够促进睾丸间质组织及曲精细管的发育,促进精母细胞的分化.     

纳米硒对波尔山羊睾丸发育的影响

为了研究日粮中添加纳米硒对公羊睾丸发育的影响,试验选用体重、日龄接近的20只波尔山羊公羔羊随机分2组,1组日粮中添加0.3mg/kg的纳米硒(以硒计),另一组饲喂基础日粮,预试2周,试验期每月测量睾丸周径、长度和高度,每组阉割1只公羔,按照常规方法制作石蜡切片,观察睾丸组织结构。结果显示,3月龄时纳米硒组睾丸间质组织增生发育,4月龄时纳米硒组睾丸曲精细管中精原细胞开始发育分化;5月龄时曲精细管中可见大量的精子,而对照组间质组织以及曲精细管发育、精母细胞发育分化较纳米硒组缓慢。试验表明,日粮中添加一定浓度的纳米硒能够促进睾丸间质组织及曲精细管的发育,促进精母细胞的分化。     

公山羊Protamine 1 mRNA表达特性及与精液品质相关性的研究

旨在研究雄性山羊主要繁殖器官中PRM1mRNA表达特性,分析精子PRM1mRNA表达与精液品质参数的相关性。本研究通过荧光定量PCR技术分析PRM1mRNA表达规律,利用免疫组化技术对睾丸中PRM1蛋白进行定位,并应用GraphPad Prism 5软件分析精子PRM1mRNA表达量与精液品质指标的相关性。结果显示,PRM1mRNA在睾丸中高度表达,其次是附睾,睾丸中PRM1mRNA表达量是附睾头的247倍,附睾头显著高于附睾体和尾(P0.05),在剩余其他组织中微量表达。在周岁之前,睾丸中PRM1mRNA表达量随着月龄增加而增加,12月龄的表达量显著高于9月龄的表达量(P0.05),9月龄表达量显著高于其他低月龄的表达量(P0.05)。精子PRM1mRNA的表达量与精子活力(R2=0.586 0,P=0.000 5)、精子密度(R2=0.442 2,P=0.004 9)呈显著正相关。山羊PRM1在长形精子细胞和精子细胞中表达,睾丸其他生精细胞及间质细胞中无表达。山羊PRM1mRNA表达具有时空表达特性,PRM1mRNA表达量可以作为评价公羊繁殖力的指标。     

SOX5蛋白对公鸡精子发生和精子活力的作用及其定位

本研究旨在探明SOX5蛋白在家禽睾丸发育中的表达规律,分析其在睾丸发育和精子活力调控中的潜在作用。采用RT-qPCR和Western blot技术检测0、5、15、40和60周龄北京油鸡公鸡睾丸中SOX5mRNA和蛋白的表达,并比较其在40周龄正常公鸡与弱精子症公鸡睾丸中的表达差异,通过免疫组化技术对SOX5蛋白在睾丸组织中的表达进行定位。结果表明,SOX5 mRNA和蛋白在不同周龄公鸡的睾丸中均有表达,且差异显著(P0.05)。SOX5mRNA和蛋白表达量趋势一致;随着周龄的增加,其表达呈现先上升后降低的趋势:0和5周龄SOX5蛋白主要在精原细胞和支持细胞中表达;15周龄SOX5蛋白在支持细胞、各级精母细胞、圆形精子细胞和成熟精子中均高表达;40周龄表达量有所降低。SOX5基因和蛋白的表达趋势与公鸡性成熟和繁殖机能衰退的趋势一致,即性成熟前后和繁殖高峰期表达量较高,在性发育前和生精机能减退时表达量较低。此外,40周龄弱精子症公鸡睾丸中,SOX5的表达显著低于正常公鸡(P0.05)。综上表明,SOX5的表达量与公鸡睾丸发育水平和精子活力存在一定的相关,可能对其具有重要调控作用。     

鸡早期胚胎精原细胞和睾丸发生发育关系的研究

采用连续切片技术，研究了15～45期(孵化50h～19d)鸡早期胚胎发育过程中精原细胞与睾丸发生发育的关系。结果显示：孵化第22～28期(第3．5～5天)，原始生殖腺内的原始生殖细胞(PGCs)胞质内的糖原颗粒开始分解；第29期(孵化第6天)，鸡胚性腺开始分化，PGCs的糖原颗粒进一步分解；第31期(孵化第7天)，PGCs内的糖原颗粒完全消失。在雄性，性腺开始显示睾丸特征，PGCs分化为精原细胞；第34期(孵化第8天)，睾丸内曲精细管索开始形成，呈实心状，精原细胞位于其中；第35～37期(孵化第9～11天)，曲精细管索数量逐渐增加，索内精原细胞体积较大，呈圆形单层排列，且已分化出支持细胞，但数量不多，形态不易分辨，间质内有少量间质细胞；第38～40期(孵化第12～14天)，可见到典型的曲精细管，精原细胞数量增加，支持细胞亦增多；曲精细管间的间质细胞成群分布。第40～45期(孵化第16～19天)，两侧睾丸大小略有差异，右侧稍大于左侧，精原细胞数量明显增多，呈葡萄串状分布在曲精细管的中央；曲精细管的管腔已经形成，精原细胞已分层排列。     

不同饲喂水平对绵羊睾丸发育、睾酮合成相关基因及雄激素受体(AR)表达的影响

旨在研究不同饲喂水平对绵羊睾丸发育、睾酮（T）合成相关基因与雄激素受体（androgen receptor, AR）表达的影响。本研究采用单因素完全随机试验设计,将18只健康、体重相近（（35±0.5） kg）的杜泊羊（♂）×晋中绵羊（♀）杂F1代4月龄公羔随机分为3组,每组6只,分别按照自由采食（AL组）、自由采食量的65%（AL65组）和自由采食量的40%（AL40组）3个水平进行饲喂。当AL组任意1只羔羊体重达到50 kg时全部屠宰,测定睾丸的周径与长度后采集睾丸组织,通过苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,H-E）染色观察曲精细管生精上皮结构;酶联免疫（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法测定睾酮（testosterone,T）的水平;用定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测T合成相关基因和AR mRNA的表达情况;通过免疫组化和Western blotting的方法对绵羊睾丸组织中的AR进行定位与定量分析。结果表明,AL40组羔羊睾丸周径和长度显著低于AL组（P<0.05）,但与AL65组差异不显著（P>0.05）;AL40组曲精细管生精上皮厚度与AL65组差异不显著（P>0.05）,但均显著低于AL组（P<0.05）。随着饲喂水平的提高,生精细胞和间质细胞密度显著增加（P<0.05）,T水平和STAR、3β-HSD基因以及AR mRNA和蛋白表达量均显著提高（P<0.05）;睾丸间质细胞、初级精母细胞、精子细胞、管壁肌样细胞层和间质血管平滑肌细胞中均观察到AR阳性产物。综上所述,绵羊的睾丸发育、T含量、T合成相关基因和AR的表达均受到日粮营养水平的调控。日粮营养水平可能通过改变T水平和生精细胞对T的敏感性来调控精子发生过程,从而影响其性成熟和繁殖性能。