初情期前后GPR54 mRNA在猪下丘脑-垂体-卵巢轴内的定位

研究应用原位杂交技术检测GPR54 mRNA在苏姜猪下丘脑-垂体-卵巢轴中的分布定位.在60日龄和初情期(160日龄)2个不同发育阶段的下丘脑-垂体-卵巢轴中均检测到GPR54 mRNA阳性杂交信号,结果表明:苏姜猪2个不同发育阶段的3种组织中均有GPR54 mRNA表达.其中下丘脑以弓状核、腹内侧核的阳性杂交信号最强,尤其是在初情期更明显;各级卵泡中以初情期时成熟卵泡的阳性杂交信号最强.     

PrRP-R在绵羊睾丸和其他组织中的表达与定位分析

为探讨促乳素释放激素受体(prolactin releasing peptide receptor,PrRP-R)基因在不同发育时期绵羊睾丸和不同组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、股二头肌、下丘脑、垂体、松果腺)中表达的差异,以0,2,5,12,24月龄的小尾寒羊为研究对象,应用荧光实时定量PCR(quantitative real-time PCR)和免疫组化(immunohistochemistry)技术分别分析了PrRP-R基因在组织中的差异表达与定位。结果显示:PrRP-R基因在睾丸与心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、股二头肌、下丘脑、垂体、松果腺之间的表达差异极显著(P<0.01),股二头肌、垂体、松果腺之间表达差异不显著(P>0.05),但背最长肌、下丘脑、垂体之间表达差异显著(P<0.05);0,2,5,12,24月龄的睾丸组织中均有一定量的表达,24月龄时表达最高(P<0.01);PrRP-R在0~24月龄绵羊睾丸组织中呈阶段性表达,0,2,5月龄时,可观察到PrRP-R在精原细胞中到阳性表达;12,24月龄时,在初级精母细胞和次级精母细胞中检测到强阳性表达。结果表明:PrRP-R在不同的组织和睾丸中表达并存在一定的差异,可能对绵羊的繁殖性能具有重要的调控作用。     

猪GPR54基因在下丘脑、垂体、卵巢发育性表达变化的研究

分别随机选取处于初生、60日龄、120日龄、初情期、180日龄的苏姜猪母猪各4头,进行屠宰,采集下丘脑、垂体、卵巢,采用反转录多聚酶链式反应（RT-PCR）,以-βactin作内标,定量分析下丘脑、垂体、卵巢中GPR54mRNA发育性变化。结果显示：苏姜猪GPR54 mRNA在下丘脑、垂体、卵巢组织内从初生到初情期表达量逐渐上升,初情期后呈下降趋势,初情期GPR54 mRNA表达丰度与初生、180日龄差异显著（P〈0.05）;在不同组织器官中,GPR54 mRNA表达丰度在卵巢中最高,下丘脑中表达丰度最低,下丘脑的表达丰度与垂体、卵巢中的表达丰度均差异显著（P〈0.05）。     

Kisspeptin/GPR54在哺乳动物繁殖上的研究进展

Kisspeptin是Kiss1基因的产物，它能够与其G蛋白偶联受体GPR54结合，激活PLC/PKC/MAPK信号通路，从而在抑制肿瘤转移、调节动物机体繁殖及初情期的启动中发挥重要作用。Kisspeptin/GPR54不但在动物的下丘脑中表达，还在动物的垂体和性腺中广泛表达，并参与动物繁殖的调控。本文就kisspeptin/GPR54在下丘脑-垂体-性腺轴上调控动物繁殖及动物初情期启动上的最新研究进行概括归纳，重点强调了kisspeptin/GPR54在性腺上的定位与分布及其对配子发生可能的直接调控作用，同时总结了kisspeptin/GPR54相关研究面临的问题及未来的研究方向，这将为更好的开展kisspentin/GPR54在动物繁殖上的研究及应用提供帮助。     

雄激素受体基因在绵羊公羔不同组织中的表达特性及性腺中的定位

旨在研究雄激素受体(Androgen receptors,ARs)基因在绵羊公羔不同组织中的表达特性及在性腺中的定位。本研究以QRT-PCR法检测各组织ARmRNA表达规律,免疫组化技术对睾丸和附睾中AR进行定位分析,蛋白质印迹技术对AR蛋白表达量进行定性研究。结果显示:(1)AR在不同组织中均有不同程度的表达,其中在睾丸和心脏中大量表达;(2)在附睾头、体、尾部单层柱状上皮细胞和间质细胞中检测到较弱的阳性信号;睾丸组织间质细胞、精原细胞、管周肌样细胞检测到强阳性信号。综上表明:AR在绵羊不同组织中广泛表达,AR在性腺的发育和精子的成熟过程以及对心脏的保护方面发挥重要作用,其作用机制需进一步研究。     

RBP4基因在绵羊性成熟前后附睾中表达的研究

试验旨在研究视黄醇结合蛋白4（retinol binding protein 4,RBP4）基因在绵羊性成熟前和性成熟后附睾中的表达水平,探讨其在绵羊生殖机能调控方面的作用。以绵羊性成熟前和性成熟后附睾为材料,采用实时荧光定量PCR方法检测RBP4基因mRNA在绵羊性成熟前、后附睾中表达量的差异,采用免疫组化技术检测RBP4基因在绵羊性成熟前、后附睾头和附睾尾中蛋白的表达水平。结果显示,RBP4基因在绵羊附睾中性成熟前的表达量为1.3368,性成熟后的表达量为0.6450,虽然二者间的表达量差异不显著（P>0.05）,但性成熟前的表达量高于性成熟后的表达量。RBP4蛋白在性成熟前、后附睾头上皮层、平滑肌层、组织间质中均有阳性表达,主要位于上皮细胞质、平滑肌细胞质;在附睾尾上皮层、组织间质中有阳性表达,主要位于上皮细胞质。推测RBP4基因可能与附睾主细胞分泌功能和附睾头处的收缩功能有关,预示RBP4可能参与附睾微环境的调控,有利于精子成熟、运动和储存。     

梅山与长大母猪下丘脑-垂体-卵巢轴Kiss1和GPR54基因的表达差异

研究早熟与晚熟品种母猪下丘脑-垂体-卵巢轴Kiss1和GPR54基因的表达差异。选用8头梅山母猪与12头长大(LY)母猪为研究对象,梅山母猪于70 d和100 d屠宰,LY母猪于70、100 d和199 d屠宰,收集血清及下丘脑、垂体、卵巢组织样品。ELISA检测血清瘦素(Leptin)和雌二醇(E2)水平,PCR克隆梅山与LY母猪Kiss1基因编码序列,实时荧光定量PCR检测母猪下丘脑、垂体、卵巢组织Kiss1和GPR54基因表达水平。结果表明:梅山与LY母猪Kiss1基因编码序列相似性为100%;梅山与LY母猪初情期下丘脑Kiss1基因表达量极显著高于垂体与卵巢(P<0.01),卵巢GPR54基因表达水平显著高于下丘脑与垂体(P<0.05)。梅山母猪下丘脑-垂体-卵巢轴Kiss1基因表达水平都显著高于相同日龄和初情期LY母猪(P<0.05),梅山母猪血清Leptin水平极显著高于相同日龄LY母猪(P<0.01)。而E2水平显著高于100 d与初情期LY母猪(P<0.01)。Leptin与下丘脑Kiss1和GPR54基因表达呈显著正相关(P<0.05),而E2仅与下丘脑Kiss1基因表达有极显著正相关关系(P<0.01);梅山与LY母猪Kiss1基因编码区序列相似性为100%,梅山母猪下丘脑-垂体-卵巢轴上kiss1基因表达量较LY母猪高,主要原因可能是初情日龄早,下丘脑Kiss1基因表达水平的高低与血清Leptin和E2浓度密切相关。     

BMP4和SMAD4基因在公绵羊繁殖相关组织的表达

试验旨在探索骨形态发生蛋白4(Bone morphogenetic protein 4,BMP4)和SMAD家族蛋白4(SMAD family member 4,SMAD4)基因在公绵羊繁殖中的作用,以便深入研究公绵羊繁殖机制。采用荧光定量PCR技术检测BMP4和SMAD4基因在高繁殖力的小尾寒羊公羊(n=3)和低繁殖力苏尼特公羊(n=3)大脑、小脑、下丘脑、垂体、输精管、肾上腺、睾丸和附睾8种组织中的表达。结果表明:BMP4和SMAD4基因在小尾寒羊公羊和苏尼特羊公羊各种组织中均有表达。其中BMP4基因在睾丸中高表达,在输精管、肾上腺中中等表达,在其他组织中均呈痕量表达;SMAD4基因在睾丸、下丘脑、小脑、大脑中高表达,在其他组织中中等表达。BMP4基因在低繁殖力苏尼特羊公羊睾丸中表达量显著高于高繁殖力小尾寒羊公羊(P0.05);SMAD4基因在低繁殖力苏尼特公羊8种组织中表达量均显著高于高繁殖力小尾寒羊公羊(P0.05)。说明BMP4和SMAD4基因在公绵羊繁殖中起到一定程度的负调控作用,这为公羊高繁殖性状选育提供了参考依据。     

INHA基因在公绵羊繁殖相关组织的表达研究

为探索INHA基因在公绵羊繁殖中的作用,采用荧光定量PCR技术检测INHA基因在高繁殖力小尾寒羊公羊和低繁殖力苏尼特羊公羊下丘脑-垂体-睾丸轴等繁殖相关组织中的表达。结果表明:INHA基因在小尾寒羊和苏尼特羊睾丸中表达量最高,其次是肾上腺、附睾,在其他组织中均呈痕量表达。INHA基因在苏尼特羊睾丸的表达量极显著高于小尾寒羊(P0.01);在肾上腺的表达量高于小尾寒羊,但差异不显著(P0.05)。结论:INHA基因可能主要在睾丸中对公绵羊繁殖功能发挥抑制作用。     

Expression of GPR54 Gene in Different Tissues and Cellular Localization in Testis of Sheep

The objectives of this study were to evaluate the expression of G-protein coupled receptor 54 (GPR54) in various tissues and the cellular localization of testis of 4 to 6-month-old sheep.In this experiment,mRNA expression was detected by Real-time fluorescence quantitative PCR.Cellular localization of GPR54 in testis was examined by immunohistochemistry.The results showed that GPR54 mRNA was expressed in all the tissues,and abundantly expressed in hypothalamus,pituitary gland and testis.The expression level gradually increased with the individual growth and development,the mRNA and protein expression of GPR54 in testis of 6-month-old was significantly higher than 4-month-old and 5-month-old (P<0.05);It was detected that GPR54 expression only in spermatogonia and a very number of primary spermatocytes in the testis by immunohistochemical staining,and it could detect significantly that the GPR54 expression in many split early sperm cells.The results demonstrated that it had close relationship between GPR54 and sexually mature of animals and the process of spermatogenesis in male animals.     

Defb124基因在绵羊睾丸、附睾不同发育时期表达特性研究

文章主要研究Defb124基因在绵羊睾丸、附睾不同发育时期的表达特性。采用QRT-PCR法对绵羊不同时期睾丸、附睾中Defb124 mRNA的表达进行绝对定量分析。结果表明：2、3、6、12月龄附睾头中Defb24的表达量分别为3.190×10^-4、5.447×10^-3、6.602×10^-3、8.757×10^-3ng/μL,在附睾尾中表达量分别为1.610×10^-4、4.658×10^-3、5.443×10^-3、5.510×10^-3ng/μL,在附睾体及睾丸中的表达量很少。说明Defb124 mRNA在绵羊不同发育时期睾丸、附睾中均有不同程度的表达,在附睾头中大量表达,且表现出明显的组织依赖性和时间依赖性。     

SPATA3基因克隆及其在牦牛和犏牛睾丸中的差异表达研究

旨在克隆牦牛精子发生蛋白3（spermatogenesis associated 3,SPATA3）基因,并检测其在牦牛不同组织及在不同发育时期牦牛和犏牛睾丸中的表达水平,探讨SPATA3对睾丸发育和精子成熟的影响,为进一步研究该基因在精子形成过程中的作用机制提供理论依据。本试验以牦牛为研究对象,利用RT-PCR克隆技术获取牦牛SPATA3 cDNA序列,使用生物信息软件分析其结构和功能,并检测其在牦牛心、肝、脾、肺、肾、脑、小肠、卵巢、子宫和睾丸组织中的表达谱。通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,RT-qPCR）检测SPATA3基因在牦牛和犏牛睾丸不同发育时期的表达规律;采用免疫组化技术检测SPATA3在牦牛和犏牛睾丸中的细胞定位及表达差异。结果显示,SPATA3基因CDS区为693 bp,编码230个氨基酸,与黄牛、野牦牛和水牛的同源性较高;SPATA3仅在耗牛睾丸组织中特异性表达,其它组织未见其表达。RT-qPCR结果显示,SPATA3基因在牦牛睾丸发育过程中均有表达,其中成年期（4~5岁）睾丸中的表达极显著高于胎牛时期（5~6月,P<0.01）,且其在牦牛不同发育时期睾丸中的表达均极显著高于犏牛（P<0.01）。免疫组化结果发现,SPATA3在圆形精子、长形精子细胞胞浆中均表达,且成年期牦牛睾丸中该基因的表达水平极显著高于犏牛（P<0.01）。综上表明,SPATA3在遗传进化中高度保守,且在牦牛和犏牛睾丸组织中差异表达,该基因低表达可能引起精子形成障碍,从而参与精子成熟进程,但具体功能有待进一步的研究。     

犏牛和牦牛ESCO2基因的序列特征及其在睾丸中的表达对比分析

旨在克隆犏牛和牦牛姐妹染色单体内聚建立蛋白2（establishment of sister chromatid cohesion N-acetyltransferase 2,ESCO2）基因,并分析其在不同发育阶段睾丸中的表达与定位,为进一步解析ESCO2在减数分裂过程中的作用机制提供理论依据。本研究以健康雄性犏牛及牦牛为试验动物,根据年龄分为胎牛组（5~6月龄）、幼年组（1~2岁）和成年组（3~4岁）,每组各3头。通过RT-PCR技术克隆犏牛和牦牛ESCO2基因并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR （quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测ESCO2基因在犏牛不同组织中的表达谱,比较分析ESCO2在犏牛和牦牛不同时期睾丸中的表达规律,利用免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）技术检测ESCO2蛋白的细胞定位和表达差异。结果显示,犏牛ESCO2基因（GenBank登录号：MW198470） CDS区为1 833 bp,编码610个氨基酸,与牦牛相比,犏牛ESCO2序列第301~319位多19个氨基酸,另有3个氨基酸突变;犏牛ESCO2蛋白序列与黄牛的同源性高于其他哺乳动物;ESCO2可能与SMC3、SMC1A、PDS5A、PDS5B、STAG2等蛋白相互作用,互作蛋白功能与姐妹染色单体凝聚、减数分裂细胞周期、DNA修复、细胞分裂和染色体重构等生物学过程相关。ESCO2在犏牛各组织中均有表达,但在睾丸中的相对表达水平显著高于其它组织（P<0.05）;在犏牛睾丸中的表达随年龄增长呈上升趋势,幼年和成年时期犏牛睾丸中ESCO2的表达显著低于同时期牦牛（P<0.05）;IHC染色结果发现,雄性犏牛减数分裂阻滞于初级精母细胞,ESCO2蛋白在犏牛初级精母细胞中无表达并与牦牛存在差异。本研究结果表明,犏牛与牦牛的ESCO2基因、蛋白序列差异较大,且在睾丸发育过程中的表达模式差异显著,这可能是引起雄性犏牛减数分裂阻滞及不育的原因之一,其具体作用机制有待进一步研究。     

骨桥蛋白在长白公猪生殖细胞中的表达及其与繁殖性能的相关性

本试验旨在研究骨桥蛋白（osteopontin,OPN）在长白公猪生殖细胞中的表达和定位,并探究其与公猪繁殖性能的相关性。试验采集了长白公猪精液和不同阶段（3日龄、3月龄、6月龄和12月龄）的睾丸组织,通过蛋白印迹的方法检测OPN蛋白在精液和不同月龄睾丸中的表达,通过免疫组化的方法对OPN蛋白在公猪睾丸细胞中进行定位;同时,根据配种胎次≥ 20胎,3次配种公猪为同一头的标准,筛选并采集17头长白种公猪精液,统计相对应的1 388头母猪的生产成绩,计算得到公猪繁殖性能指标（包括窝产总仔数、窝产活仔数、分娩率和繁殖力）。低温离心精液分离得到精子和精浆,丙酮法提取精浆蛋白,Lysis buffer方法提取精子蛋白,最后运用BCA和ELISA的方法检测精子和精浆中OPN蛋白的含量,分析OPN蛋白与公猪繁殖性能的相关性。蛋白印迹结果显示,OPN在精子、精浆和各月龄阶段的长白公猪睾丸中均以两种形式表达（67.4和33.7 ku）,且67.4 ku的形式在3月龄公猪睾丸中表达量最高;免疫组化的结果显示,OPN在长白公猪的初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞中表达,在精母细胞、支持细胞和间质细胞中无表达;BCA和ELISA结果显示,精子中的OPN蛋白含量是精浆中的7倍（P<0.05）,精液中的OPN蛋白与公猪窝产活仔数显著正相关（P<0.05）。本试验结果表明,OPN在各阶段的长白公猪睾丸中都有表达,且在精子和精浆中也有表达,这可能与公猪的繁殖性能有关,从而为后期OPN蛋白在公猪受精力的研究奠定基础。     

阿勒泰羊羔羊MSTN mRNA表达的发育性变化

肌肉生长抑制素（MSTN）是一种骨骼肌生长发育的负调控因子.试验以不同生长阶段的阿勒泰羊羔羊为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术测定了肌肉和脂肪组织中MSTN mRNA相对表达量.比较该基因在不同月龄阿勒泰羊羔羊肌肉和脂肪组织中的表达差异.结果表明：阿勒泰羊0～6月龄羔羊MSTN mRNA在肌肉和脂肪组织中均有表达.4月龄羔羊MSTN mRNA表达量在肌肉中最高,0～4月龄的表达量逐渐上升,4～6月龄逐渐下降.6月龄羔羊脂肪中的MSTN mRNA表达量最高.不同月龄阶段阿勒泰羊羔羊肌肉和脂肪MSTN mRNA表达量存在差异,这些差异可能会影响其生长发育和产肉性能等指标,这对进一步理解MSTN基因的调控作用奠定了基础.     

Seasonal differential expression of KiSS‐1/GPR54 in the striped hamsters (Cricetulus barabensis) among different tissues

Kisspeptins and G protein coupled receptor (GPR54) play significant roles in regulating reproductive activity among seasonally reproductive animals; however, the mechanisms of KiSS‐1 and GPR54 gene affecting the seasonal reproduction in striped hamster are still unknown. In this study, real‐time quantitative polymerase chain reaction was employed to examine the expression profiles of KiSS‐1 and GPR54 in the hypothalamus, ovaries, testes, uterus and epididymis of striped hamsters across 4 different seasons. Our results showed that, across different seasons, the KiSS‐1 expression mode of male striped hamsters and the GPR54 expression mode of female striped hamsters were consistent with the seasonal photoperiod in the hypothalamus. Meanwhile, across different seasons, the expression profile of KiSS‐1 in the testes and the GPR54 expression profile of male striped hamsters in the hypothalamus were consistent with the intensity of their seasonal reproductive activity. Among different tissues, the expression trend for GPR54 is consistent across 4 seasons, while that for KiSS‐1 is tissue‐dependent. The expression trend for GPR54 across 4 seasons is the same regardless of gender, while that for KiSS‐1 is dramatically different and sex‐dependent across different seasons. These results suggest that the expressions of KiSS‐1 and GPR54 in the striped hamsters were regulated by complicated mechanisms, and the regulatory mechanisms in the striped hamsters are seasonal‐dependent and sex‐dependent. This research will provide a theoretical basis for studying how KiSS‐1 and GPR54 affect seasonal reproduction and the mechanisms behind their influence.     

驯鹿β-防御素-1(reBD-1)mRNA在驯鹿组织器官中的表达检测

为了检测reBD-1 mRNA在驯鹿体内可能的表达器官,研究根据已知的reBD-1 cDNA序列设计了一对预计扩增产物为121 bp的引物,以驯鹿舌、食管、瘤胃、网胃、皱胃、十二指肠、回肠、结肠、肝、肺、气管、肾、膀胱、睾丸、附睾、心脏、脾脏中提取的总RNA为模板,采用反转录PCR(RT-PCR)技术检测驯鹿的上述器官内reBD-1 mRNA的表达情况.结果显示:reBD-1 mRNA在上述组织器官中均有表达,其中在舌、瘤胃、睾丸中表达最强;在食管、十二指肠、结肠、气管、脾脏中有中等量的表达;在网胃、皱胃、回肠、肝、肺、肾、膀胱、附睾、心脏内的表达较弱.β-防御素reBD-1在驯鹿体内的广泛表达提示reBD-1有助于驯鹿的先天性宿主防御.