Tektin3基因在猪生殖系统发育中的表达规律研究

TEKTIN是附着于精子尾部基因丝的重要组分,对于基因丝的稳定和结构的复杂性起重要作用。Tektin3是其家族成员之一。研究采用RACE方法,获得梅山猪Tektin3基因全序列,利用生物信息学方法分析其结构和功能,采用半定量的方法研究150日龄梅山公母猪23个不同组织Tektin3基因的表达特征,并用Realtime PCR方法分析2、30、60、90和150日龄梅山公猪睾丸的表达规律。结果表明:(1)Tektin3基因全序列1 761bp,包含5'UTR 95bp,完整的CDS序列1 473bp和3'UTR 193bp,编码490个氨基酸,相对分子质量为56 481.3,理论等电点为7.94。(2)Tektin3基因在睾丸中高丰度表达,在下丘脑和子宫角中表达丰度较低。(3)Tektin3基因从梅山猪60日龄开始表达,到90日龄时显著下降(P0.05),150日龄时显著上升(P0.05)。结果表明该基因编码氨基酸除与精子发生有关,可能还与部分组织或器官的纤毛发生及公猪的性发育有关。     

猪垂体特异性转录因子1基因cDNA的克隆及序列分析

本试验根据公开发表的猪POU1F1基因序列设计1对引物,提取猪垂体总RNA,通过RT-PCR方法扩增出POU1F1基因cDNA全序列,扩增产物用琼脂糖凝胶检测为预期的876 bp特异性条带。将扩增产物克隆入PTZ57R/T载体进行序列测定。经DNAStar软件分析序列与已发表序列同源性为99.7%,克隆获得的序列为进一步对猪POU1F1基因不同拼接形式功能性研究奠定了基础。     

鸡ES细胞体外定向诱导分化特性的研究

旨在探索鸡胚胎干细胞(ES细胞)体外定向诱导的多向分化潜能.分离鸡X期胚盘细胞,体外培养传代,经鉴定后,采用地塞米松(DEX)、β-甘油磷酸钠(β-GP)和维生素C(VitC)诱导ES细胞向成骨细胞分化;采用维甲酸(RA)、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)诱导ES细胞向神经元样细胞分化;采用DEX、胰岛素、IBMX诱导ES细胞向脂肪细胞分化,比较不同浓度组合诱导剂的诱导效果,分别用Von Kossa's染色法、甲苯胺蓝染色法、免疫组化法、油红O染色法和RT-PCR鉴定诱导产生的细胞.结果显示,ES细胞被诱导3～21 d后,分化为成骨细胞,诱导率为40％～72％;被诱导4～7 d后,分化为神经元样细胞,诱导率为71％～84％;被诱导2～21 d后,分化为脂肪细胞,油红O染色阳性,并表达PPARγ基因.结果表明,在体外条件下,ES细胞可被特异的化学物质定向诱导分化为成骨细胞、神经元样细胞和脂肪细胞,具有多向分化潜能.     

徐淮山羊PPAR基因克隆及其表达产物亚细胞定位的研究

研究旨在克隆徐淮山羊过氧化物酶体激活增殖受体(PPAR)基因的cDNA,并通过EGFP融合蛋白对该基因产物亚细胞水平定位。采用RT-PCR方法克隆徐淮山羊脂肪组织PPAR基因cDNA,并构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-PPAR,聚乙烯亚胺(PEI)介导基因转染NIH-3T3细胞,48h后荧光倒置显微镜下观察基因表达产物的分布,RT-PCR检测mRNA在体外水平的表达。结果表明:首次成功克隆出徐淮山羊PPAR基因的全序列cDNA,大小为1428bp,GenBank登录号为GU082382;构建了融合表达载体pEGFP-C1-PPAR;RT-PCR检测mRNA表达明显;EGFP-PPAR融合蛋白定位在NIT-3T3细胞质中。体外克隆的徐淮山羊PPAR基因cDNA,在单细胞水平上可表达于细胞质中,结果为进一步研究PPAR的生物学功能奠定基础。     

鸡睾丸细胞分离方法与培养的研究

近年来,随着对睾丸细胞研究的进一步深入,睾丸细胞的起源及其生成精子的机制已经明了,并且对它们的分离和体外培养也已取得了阶段性的进展。但这些研究多限于一些哺乳类动物,尤其以啮齿类动物居多[1]。而在禽类方面的研究还处于启蒙阶段。本研究旨在通过对鸡睾丸细胞几种分离方     

裸鼠作为“活试管”用于兔卵子异体成熟和受精的研究

摘除裸鼠卵巢的同时,在其卵巢囊中正位移人一小块兔的卵巢组织,3周后用激素PMSG和HCG给裸鼠超排,在注射HCG的同时或3h后,用新鲜的兔精液给裸鼠作人工授精,授精后30～80h处死裸鼠,取出输卵管、子宫和植入的兔卵巢块,在6批51只裸鼠中。从17只裸鼠上收集到23个胚胎(1～8细胞阶段)和11个卵母细胞,在植入的兔卵巢块上可见初级、次级和三级卵泡及红体和黄体。     

鸡Mx基因全长cDNA序列的克隆及分析

以Poly(I)-Poly(C)诱导鸡成纤维细胞Mx基因的表达,提取总RNA,RT-PCR扩增出全长Mx cDNA,扩增产物克隆入pMD19-T Simple载体中进行序列测定。结果表明:与GenBank公布的鸡Mx cDNA序列相比,其同源性达99.9%,为进一步研究鸡Mx基因的抗病毒活性和作用机理奠定了基础。     

鸡胚胎代用蛋壳及异体胚盘移植孵化的研究

对鸡胚胎蛋壳培养的研究结果显示 :( 1 )在± 4 5°的转角下 ,不同体积的代用蛋壳的胚胎发育率 ,普通蛋代用蛋壳前 6d的胚胎发育率 ( 48.5% )显著高于双黄蛋代用蛋壳 (平均 2 2 .7% ) ,但是 ,双黄蛋代用蛋壳的孵化率 ( 8.3 % )显著高于普通蛋代用蛋壳。普通蛋代用壳无小鸡孵化 ,说明普通蛋壳对于移植等量鸡胚后期的发育空间不够。( 2 )双黄蛋作为代用壳时 ,可以不添加任何物质。( 3 )换蛋壳培养鸡胚胎 ,转蛋角度± 4 5°比± 3 0°的效果要好。异体胚盘移植结果显示 :同一动物间的同功物质具有通用性 ,异体胚盘移植鸡胚可以继续发育。     

小梅山猪发情周期生殖激素变化的研究

以ESR基因BB型小梅山母猪、大白母猪为研究对象,测定发情周期血清生殖激素(雌二醇、雌三醇、孕酮、促卵泡素和促黄体素)浓度,探讨小梅山猪高产的内分泌机制。结果表明:小梅山猪雌二醇、孕酮浓度均显著(P<0.05)高于大白猪,大白猪雌三醇和促黄体素浓度显著(P<0.05)高于小梅山猪,而两品种猪促卵泡素则无显著差异。初步认为在诸多生殖激素动态相互作用中,雌激素和孕酮是决定小梅山母猪(ESR基因BB型)繁殖力的主效激素。     

禽类原始生殖细胞与转基因研究进展

综述了鸟类原始生殖细胞的特性、起源、迁移等以及对 PGCs进行操作和培养 ,转基因鸡的研究现状和进展