Tektin3基因在猪生殖系统发育中的表达规律研究

TEKTIN是附着于精子尾部基因丝的重要组分,对于基因丝的稳定和结构的复杂性起重要作用。Tektin3是其家族成员之一。研究采用RACE方法,获得梅山猪Tektin3基因全序列,利用生物信息学方法分析其结构和功能,采用半定量的方法研究150日龄梅山公母猪23个不同组织Tektin3基因的表达特征,并用Realtime PCR方法分析2、30、60、90和150日龄梅山公猪睾丸的表达规律。结果表明:(1)Tektin3基因全序列1 761bp,包含5'UTR 95bp,完整的CDS序列1 473bp和3'UTR 193bp,编码490个氨基酸,相对分子质量为56 481.3,理论等电点为7.94。(2)Tektin3基因在睾丸中高丰度表达,在下丘脑和子宫角中表达丰度较低。(3)Tektin3基因从梅山猪60日龄开始表达,到90日龄时显著下降(P0.05),150日龄时显著上升(P0.05)。结果表明该基因编码氨基酸除与精子发生有关,可能还与部分组织或器官的纤毛发生及公猪的性发育有关。     

猪垂体特异性转录因子1基因cDNA的克隆及序列分析

本试验根据公开发表的猪POU1F1基因序列设计1对引物,提取猪垂体总RNA,通过RT-PCR方法扩增出POU1F1基因cDNA全序列,扩增产物用琼脂糖凝胶检测为预期的876 bp特异性条带。将扩增产物克隆入PTZ57R/T载体进行序列测定。经DNAStar软件分析序列与已发表序列同源性为99.7%,克隆获得的序列为进一步对猪POU1F1基因不同拼接形式功能性研究奠定了基础。     

精子抗原基因在猪生殖道及成熟精子中的表达特性

【目的】揭示若干精子抗原基因(SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E)在梅山公母猪生殖道及成熟精子中的mRNA时空表达规律。【方法】利用RT-PCR技术分析各基因在生殖道和精子中组织表达谱,利用半定量RT-PCR分析其在初生至150d梅山公猪睾丸中的发育性表达特性。【结果】5个基因在梅山公母猪生殖道组织中呈现不同的表达特性。其中SPAG1在睾丸中表达丰度最高,在精囊腺、前列腺、附睾体、子宫角和输卵管呈现中等丰度表达,而在附睾尾、子宫颈和卵巢的表达信号较弱。SPAG5在睾丸中表达丰度最高,在前列腺、附睾体和子宫颈中表达信号较弱。而SPAG6在睾丸中高丰度表达,在输卵管中呈现中等丰度表达,在子宫角的表达信号很弱。SPAG11C在附睾体和睾丸中高水平表达,而SPAG11E则在附睾体和附睾尾中低水平表达。在成熟精子中只有SPAG11E有mRNA表达。SPAG1、SPAG5、SPAG6和SPAG11C基因在公猪睾丸中发育性表达分析表明,总体上所检测的4个精子抗原基因的表达水平都随着日龄增加而提高,但存在一些差异。其中SPAG1和SPAG11C呈现相似的表达规律,在初生和30日龄时表达相对较低,但在60、90、150日龄都有显著提高(P0.05)。而SPAG5在初生和30日龄时表达也相对较低,在60和90日龄时均有显著提高(P0.05),但150日龄时略有下降,但差异不显著。SPAG6在初生和30日龄时表达水平很低,至60日龄有显著提高(P0.05),90日龄时维持这一水平,而到150日龄时则有显著下降(P0.05)。【结论】SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E在梅山公母猪生殖道组织广泛表达,在睾丸组织中其mRNA表达水平变化与性发育相一致,SPAG11E在精子中存在低丰度mRNA表达。     

梅山猪垂体中GH、PRL及TSHβ基因发育性表达规律的研究

生长激素(GH)、催乳素(PRL)及促甲状腺激素β亚基(TSHβ)是动物生长发育过程中的重要调控因子。本研究我们通过RT-PCR检测了GH、PRL及TSHβ基因在不同生长阶段梅山猪垂体中mRNA的表达水平。结果发现:GH和TSHβ基因在公、母猪的生长发育过程中的表达量总体上都呈现先升高后降低的趋势;而PRL在公猪中的表达量在不同发育阶段相对稳定,而在母猪中呈现先下降后升高的趋势。总体上GH、PRL及TSHβ3个基因在公、母猪的生长发育过程中的表达呈现性别二相性。其中GH基因的表达在1、30、90和150日龄公、母猪间呈现出显著差异(P0.05);而PRL基因的表达在1、60和90日龄的公、母猪表现显著差异(P0.05);而TSHβ基因的表达在60和150日龄的公、母猪表现显著差异(P0.05)。     

猪基因组结构变异研究进展

结构变异（structural variation,SV）广泛分布在基因组中,并主要以缺失、插入、重复、倒位和易位的形式出现。SV可以通过不同的机制直接或间接影响基因剂量,从而导致畜禽的表型变异,甚至引起疾病。随着分子生物学的发展和新基因组技术的进步,SV在猪基因组的研究越来越多,主要包括繁殖性状、肉质性状、生长性状、毛色、疾病等。本文参考了国内外相关报道,对SV的定义、分类、形成机制、检测方法以及在猪基因组的研究进展进行综述,并对目前SV研究存在的问题提出了建议以及未来的研究趋势进行了展望。     

苏太猪ESR和FSHβ基因的多态性检测及其与繁殖性状的相关性研究

母猪的繁殖性能一直是育种工作者关注的焦点之一,如产仔数就是一个重要的经济性状,但产仔数的遗传力很低(约为0.1),通过传统的育种方法对该性状的改良收效甚微。标记辅助选择(marker assited selection,MAS)能在短时间内显著提高低遗传力性状。分子生物技术的快速发展为MAS育种在动物实际育种工作中的应用提供了保障,而且近些年来获得了较好的效果。雌激素受体基因(ESR)和卵泡刺激素β基因(FSHβ)等,是与繁殖性能有关的主效基因。这些主基因在大白、长白、杜洛克、二花脸、东北民猪、金华猪、香猪、荣昌猪、莱芜黑猪等品种中都有相关研…     

小梅山猪发情周期生殖激素变化的研究

以ESR基因BB型小梅山母猪、大白母猪为研究对象,测定发情周期血清生殖激素(雌二醇、雌三醇、孕酮、促卵泡素和促黄体素)浓度,探讨小梅山猪高产的内分泌机制。结果表明:小梅山猪雌二醇、孕酮浓度均显著(P<0.05)高于大白猪,大白猪雌三醇和促黄体素浓度显著(P<0.05)高于小梅山猪,而两品种猪促卵泡素则无显著差异。初步认为在诸多生殖激素动态相互作用中,雌激素和孕酮是决定小梅山母猪(ESR基因BB型)繁殖力的主效激素。     

不同转座子介导的基因捕获效率比较

为了比较SB(Sleeping Beauty)、PB(PiggyBac)和Tol2 3种转座子介导的基因捕获效率,本研究构建了含有3种转座子的启动子捕获载体pT3-PST-Pro-Trap。将此载体分别和SB、PB和Tol2 3种转座酶mRNA按照质量比1.0∶1.5的比例注射斑马鱼(Danio rerio)一细胞胚胎,通过检测绿色荧光蛋白报告基因(GFP)的表达水平比较不同转座子的捕获效率。结果显示,3种转座子介导的启动子捕获载体能够高效率捕获内源基因启动子,进而驱动GFP的表达;注射后培养36 h时的SB、PB和Tol2捕获效率分别为24.32%、30.70%和18.87%,PB捕获效率显著高于SB和Tol2(P0.05);3种转座子在60 h时的捕获效率均高于36 h的,其中SB和Tol2组差异达显著水平(P0.05),而PB组差异不显著(P0.05)。本研究结果表明,SB、PB和Tol2转座子介导的基因捕获技术可以用于脊椎动物高通量功能基因筛选,为功能基因研究提供有效新方法。     

应用4个繁殖性状候选基因对太湖猪群体遗传结构分析

采用PCR-RFLP技术分析雌激素受体(ESR)基因、促卵泡素β亚基(FSHβ)基因、催乳素受体(PRLR)基因和视黄醇结合蛋白4(RBP4)基因在太湖猪不同类群中的分布情况。结果表明:ESR基因在小梅山猪、二花脸猪、枫泾猪中B基因频率较高,分别为0.629,0.762,0.649;FSHβ基因在小梅山猪、二花脸猪、枫泾猪中AA基因型频率较高,分别为0.875,0.881,0.833;PRLR基因在小梅山猪、二花脸猪、枫泾猪中AA基因型频率分别为0.631,0.571,0.281;RBP4基因在小梅山猪、二花脸猪、枫泾猪猪群中AA基因型频率较高,分别为0.593,1.000,0.900。对不同基因的特性分析表明:ESR、FSHβ、PRLR和RBP4在3个类群中的多态信息含量和杂合度均不高,大多为中低等多态位点。