种公猪精子活力与mtDNA拷贝数的关联

为探讨猪精子线粒体DNA拷贝数和精子活力高低关系,选取长白猪、大约克猪和杜洛克猪新鲜精液,采用上游法分离高、低活力精子,对其进行活力检测,后提取上、下游精子DNA,采用实时荧光定量PCR技术测定精子线粒体DNA(mtDNA)拷贝数。结果表明,上、下游精子活力差异显著(P0.05),活力高的精子mtDNA拷贝数显著低于活力低的mtDNA拷贝数(P0.05),长白猪的mtDNA拷贝数与杜洛克猪、大约克猪差异显著(P0.05)。由此可见,mtDNA拷贝数可能影响猪精子活力,不同品种猪mtDNA拷贝数差异显著。     

Tektin3基因在猪生殖系统发育中的表达规律研究

TEKTIN是附着于精子尾部基因丝的重要组分,对于基因丝的稳定和结构的复杂性起重要作用。Tektin3是其家族成员之一。研究采用RACE方法,获得梅山猪Tektin3基因全序列,利用生物信息学方法分析其结构和功能,采用半定量的方法研究150日龄梅山公母猪23个不同组织Tektin3基因的表达特征,并用Realtime PCR方法分析2、30、60、90和150日龄梅山公猪睾丸的表达规律。结果表明:(1)Tektin3基因全序列1 761bp,包含5'UTR 95bp,完整的CDS序列1 473bp和3'UTR 193bp,编码490个氨基酸,相对分子质量为56 481.3,理论等电点为7.94。(2)Tektin3基因在睾丸中高丰度表达,在下丘脑和子宫角中表达丰度较低。(3)Tektin3基因从梅山猪60日龄开始表达,到90日龄时显著下降(P0.05),150日龄时显著上升(P0.05)。结果表明该基因编码氨基酸除与精子发生有关,可能还与部分组织或器官的纤毛发生及公猪的性发育有关。     

猪垂体特异性转录因子1基因cDNA的克隆及序列分析

本试验根据公开发表的猪POU1F1基因序列设计1对引物,提取猪垂体总RNA,通过RT-PCR方法扩增出POU1F1基因cDNA全序列,扩增产物用琼脂糖凝胶检测为预期的876 bp特异性条带。将扩增产物克隆入PTZ57R/T载体进行序列测定。经DNAStar软件分析序列与已发表序列同源性为99.7%,克隆获得的序列为进一步对猪POU1F1基因不同拼接形式功能性研究奠定了基础。     

苏姜小母猪消化器官发育与血液胃肠激素水平相关性的研究

以苏姜猪为试验素材,对初生及15、30、45、60、75日龄小母猪消化器官生长发育与血液胃肠激素水平变化的相关性进行研究。结果表明:苏姜小母猪早期激素水平变化呈明显的规律性,初生时生长抑素含量较高,随后呈下降趋势,而生长激素和胃泌素)在75日龄内呈规律性变化。生长激素对消化器官的生长有促进作用,而生长抑素则抑制消化器官的生长。     

维生素、微量元素的营养对鸡免疫功能影响的研究

维生素、微量元素是动物体内必不可少的营养物质,但它同时还影响免疫系统的发育与功能的发挥,改变免疫力,影响抵抗疾病的能力.因此,为了维持动物机体健康,提高生产性能,探讨动物体维生素、微量元素营养与免疫功能的内在关系或规律是很重要的.本文就近年来维生素、微量元素对鸡免疫功能影响方面的研究进展,作一简要综述. 1 维生素营养对免功能的影响 1 1 维生素A     

小梅山猪发情周期生殖激素变化的研究

以ESR基因BB型小梅山母猪、大白母猪为研究对象,测定发情周期血清生殖激素(雌二醇、雌三醇、孕酮、促卵泡素和促黄体素)浓度,探讨小梅山猪高产的内分泌机制。结果表明:小梅山猪雌二醇、孕酮浓度均显著(P<0.05)高于大白猪,大白猪雌三醇和促黄体素浓度显著(P<0.05)高于小梅山猪,而两品种猪促卵泡素则无显著差异。初步认为在诸多生殖激素动态相互作用中,雌激素和孕酮是决定小梅山母猪(ESR基因BB型)繁殖力的主效激素。     

外源生殖激素在母猪繁殖中的研究进展

介绍了在养猪生产中常用的外源生殖激素的种类及其主要生理功能，并详细地阐述了国内外生殖激素在提高母猪繁殖力方面的应用。     

梅山猪与杜洛克猪中等卵泡差异表达基因的鉴定

本试验采用抑制性消减杂交技术构建了卵泡期第4天梅山猪和杜洛克猪中等卵泡M2组织差异表达的消减cDNA文库,从中筛选差异表达的基因,并通过实时荧光定量PCR对其进行验证,利用DAVID软件对差异表达的基因进行聚类分析。结果表明,从梅山猪和杜洛克猪M2卵泡消减文库中筛选得到了148和75个差异表达的ESTs,分别含有125和60个已知的基因。实时荧光定量PCR验证结果与筛选结果相符。GO功能分类注释到调控代谢、细胞循环、生物合成、胞内转运、类固醇雌激素受体和刺激等生物学过程。KEGG Pathway分析表明有6个基因参与TGF-beta信号通路,5个基因参与卵母细胞减数分裂信号通路,7个基因参与类固醇雌激素受体信号通路,推测TGF-beta信号通路中的基因可能调控猪卵泡的发育。研究结果为深入探讨卵泡发育机理和对繁殖性状影响的遗传机理奠定了基础。     

不同孵育时间对猪精子转染外源DNA效果的影响

建立稳定的精子载体法技术体系对家畜的转基因育种等研究具有重要意义.为获得公猪精子与DNA最佳共孵育时间,优化建立猪精子载体法技术体系,本研究通过定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规分析方法等,研究分析猪精子与DNA不同共孵育时间对猪精子活力、活率、DNA转染率、吸附DNA和内化DNA量的影响.结果表明,多聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)包裹的标记DNA与精子共孵育15、30、60和90 min后,随着孵育时间的延长,精子活力和活率有极显著下降(P＜0.01),而精子转染率呈极显著(P＜0.01)或显著(P＜0.05)上升,吸附外源DNA量和内化外源DNA量也呈上升趋势,但是30 min后不同孵育时间之间差异不显著(P＞0.05).此外,随着共孵育时间的延长,与精子转染率提高幅度相比,精子活力和活率的下降幅度更明显.综合考虑精子活力、活率、转染率、吸附DNA量和内化DNA量等参数,猪精子与外源DNA共孵育时间以30 min为最佳.     

影响猪精子介导基因转移效果的因素研究

为优化猪精子载体法技术参数,利用荧光定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规检测方法,分析不同DNA转染剂、不同孵育温度和不同形态DNA对猪精子转染外源DNA的影响。结果表明,PEI和TransFast转染剂能极显著提高猪精子转染效果,且PEI优于TransFast,而NanoFect转染剂包裹DNA不能转染精子。随着转染温度的升高,精子的活力和活率均明显下降,而转染率和内化外源DNA量基本保持稳定,而吸附外源DNA量呈下降趋势。环状DNA和线性化DNA在与精子共孵育后,两者的精子活力、活率、转染率和内化外源DNA量差异均不显著,精子吸附线性化DNA量极显著高于环状DNA量。综合分析表明,外源DNA形态对猪精子转染效果无显著影响;PEI和TransFast能够显著提高猪精子转染效果;共孵育温度以17℃为最佳,本结果为开展精子载体法制备转基因猪研究提供了基础试验依据。