不同水平亚硒酸钠对公鸡睾丸组织中Cdc25A基因表达的影响

通过在公鸡日粮中添加不同水平亚硒酸钠,研究硒对公鸡睾丸组织中细胞周期基因Cdc25A表达的影响,进而为硒调控精子发生周期和生精细胞凋亡的机理提供参考依据。选取80只体重接近、健康无疾病的海兰白成年公鸡,随机分成4组,每组20只,分别在日粮中添加0、0.5、1.0和2.0 mg/kg的亚硒酸钠,试验结束时,采集睾丸备用。采用qRT-PCR 检测硒对公鸡睾丸组织中 Cdc25A 基因的表达差异。结果表明,0.5 mg/kg组Cdc25A表达量显著高于其他处理组,且各组之间差异显著（P<0.05）。由此可见,日粮中硒的最适添加量为0.5 mg/kg,此时,Cdc25A mRNA表达量最高,高硒（超过0.5 mg/kg）则会抑制该基因的表达。     

不同日龄犊牛的睾丸组织结构比较观察

本试验对不同日龄荷斯坦公犊睾丸组织发育情况进行组织学观察。将15、30、60和90日龄的犊牛睾丸制成石蜡切片,并进行H-E染色分析。通过切片观察,得出犊牛的曲精细管生成阶段为60日龄前,此后,曲精细管数量逐步固定,管腔内部的细胞略有增殖,管壁由单细胞层向多细胞层生长,但整体生长比较缓慢。     

精原干细胞研究进展

精原干细胞（spermatogonial stem cells,SSCs）是各种雄性动物生殖细胞的母细胞,是一群具有自我更新和分化潜能的细胞,并且在雄性个体中精原干细胞与下一代的遗传背景密切相关。因此,精原干细胞在细胞生物学、医学、转基因等领域的研究有着广阔的应用前景。文章根据国内外相关研究进展,对精原干细胞的生物学特性、分离纯化与培养、移植等作一概述。     

绵羊精原干细胞的分离纯化与鉴定

旨在探究一种简便高效的绵羊精原干细胞(SSCs)分离纯化方法,为后续研究SSCs奠定基础。本实验采用两步酶消化法对4月龄的绵羊睾丸进行消化处理,获得单细胞悬液。将睾丸细胞接种于0.2%的明胶预处理培养皿中,根据各细胞贴壁能力和速度的不同将SSCs纯化,并在纯化后用SSCs特异标记分子PLZF进行免疫荧光鉴定。结果表明,经免疫荧光染色得出存在PLZF阳性信号。这说明采用两步酶消化和差异贴壁法可以得到纯度较高的SSCs。     

不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34~(cdc2)表达的差异

旨在探究不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34cdc2的表达情况。本试验选取发育正常、体重相似的5~6d荷斯坦哺乳公犊18头,随机分为3组,每组6头,饲喂相同的基础日粮,分别在30(断奶)、60和90d时从各组分别随机抽取2头,采集其睾丸备用;通过qRT-PCR技术检测不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34cdc2 mRNA表达规律,免疫组化技术对睾丸CyclinB1和p34cdc2进行定位分析。结果表明:90d时CyclinB1和p34cdc2 mRNA表达量显著高于30与60d(P0.05),但30与60d两种基因mRNA表达量均差异不显著(P0.05);p34cdc2蛋白在不同日龄犊牛表达差异显著(P0.05);CyclinB1蛋白在60、90d的表达量显著高于30d(P0.05),但60和90d差异不显著(P0.05)。综上表明,CyclinB1和p34cdc2 mRNA和蛋白在睾丸的表达量随着犊牛日龄的增加而增加,且不同的日龄CyclinB1和p34cdc2 mRNA和蛋白表达量存在一定的差异。     

不同水平亚硒酸钠对公鸡睾丸组织结构及精原干细胞增殖的影响

通过在公鸡日粮中添加不同水平亚硒酸钠,研究硒对公鸡睾丸组织结构及精原干细胞增殖的影响,以期为禽类繁殖性能的研究提供实验依据。选取80只体重接近、健康无疾病的海兰白成年公鸡,随机分成4组,每组20只,分别在日粮中添加0,0．5,1和2mg／kg的亚硒酸钠。通过免疫荧光观察精原干细胞数量。结果显示：日粮中添加适量的硒对睾丸的组织结构及精原干细胞的增殖有显著影响（P〈0．05）,其中0．5mg／kg组显著高于对照组、1mg／kg组和2mg／kg组。结论：适量的硒可以促进鸡睾丸的发育及精原干细胞的增殖,过量的硒对精原干细胞的增殖有一定的抑制作用。     

不同饲喂水平对绵羊睾丸发育、睾酮合成相关基因及雄激素受体(AR)表达的影响

旨在研究不同饲喂水平对绵羊睾丸发育、睾酮（T）合成相关基因与雄激素受体（androgen receptor, AR）表达的影响。本研究采用单因素完全随机试验设计,将18只健康、体重相近（（35±0.5） kg）的杜泊羊（♂）×晋中绵羊（♀）杂F1代4月龄公羔随机分为3组,每组6只,分别按照自由采食（AL组）、自由采食量的65%（AL65组）和自由采食量的40%（AL40组）3个水平进行饲喂。当AL组任意1只羔羊体重达到50 kg时全部屠宰,测定睾丸的周径与长度后采集睾丸组织,通过苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,H-E）染色观察曲精细管生精上皮结构;酶联免疫（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法测定睾酮（testosterone,T）的水平;用定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测T合成相关基因和AR mRNA的表达情况;通过免疫组化和Western blotting的方法对绵羊睾丸组织中的AR进行定位与定量分析。结果表明,AL40组羔羊睾丸周径和长度显著低于AL组（P<0.05）,但与AL65组差异不显著（P>0.05）;AL40组曲精细管生精上皮厚度与AL65组差异不显著（P>0.05）,但均显著低于AL组（P<0.05）。随着饲喂水平的提高,生精细胞和间质细胞密度显著增加（P<0.05）,T水平和STAR、3β-HSD基因以及AR mRNA和蛋白表达量均显著提高（P<0.05）;睾丸间质细胞、初级精母细胞、精子细胞、管壁肌样细胞层和间质血管平滑肌细胞中均观察到AR阳性产物。综上所述,绵羊的睾丸发育、T含量、T合成相关基因和AR的表达均受到日粮营养水平的调控。日粮营养水平可能通过改变T水平和生精细胞对T的敏感性来调控精子发生过程,从而影响其性成熟和繁殖性能。     

中草药在动物生产中的应用研究

随着动物性食品的安全问题越来越严重,动物安全高效生产受到越来越多的重视。因为中草药在动物生产具有安全高效、无残留、无抗药性等特点,近年来,随着动物生产形势的变化,中草药在动物生产上的应用有了一些新的进展。本文综述了中草药在动物生产上提高动物的生长性能、改善机体免疫力、抑制病原微生物生长、增强繁殖能力等的作用,为推广中草药添加剂在动物安全高效生产上的应用提供理论依据。     

碱基编辑器介导的猪IGF2基因高效定点突变

本研究旨在利用碱基编辑器在巴马猪胎儿成纤维细胞（porcine fetal fibroblast cells,PFFs）中对生长性状相关基因胰岛素样生长因子2（insulin-like growth factor 2,IGF2）进行高效、精确的定点编辑。通过PCR扩增和测序对巴马猪和大白猪的IGF2基因序列进行鉴定,构建靶向巴马猪的sgRNA-IGF2表达载体,进而通过细胞转染、混合细胞编辑效率检测、单克隆细胞筛选及基因型鉴定等技术手段研究不同碱基编辑器对猪IGF2基因靶点的编辑效率及突变类型。结果显示,巴马猪和大白猪IGF2基因第3内含子存在第3 072 bp处的单核苷酸多态性（SNP）位点,设计靶向巴马猪IGF2基因的单链寡核苷酸序列。单链寡核苷酸经退火后与BsaⅠ线性化的pGL3-U6-sgRNA质粒进行重组连接,构建sgRNA-IGF2表达质粒,重组质粒测序结果表明,sgRNA序列已经精确连入U6启动子和sgRNA骨架之间。将rA1-BE3、hA3A-BE3、hA3A-BE3-Y130F和hA3A-eBE-Y130F 4种胞嘧啶碱基编辑器分别与sgRNA-IGF2表达质粒共转染至猪胎儿成纤维细胞中,对混合细胞编辑效率进行检测结果表明,对于IGF2基因靶点,hA3A-BE3系列碱基编辑器C到T的编辑效率显著高于rA1-BE3（P<0.05）。流式分选、单克隆细胞培养及鉴定结果表明,虽然有71.43%的hA3A-BE3单克隆细胞已被编辑,但有42.86%的细胞存在插入和缺失（indels）;hA3A-BE3-Y130F和hA3A-eBE-Y130F的编辑效率（56.86%和40.38%）虽低于hA3A-BE3（71.43%）,但是indels的效率也较低（31.37%和21.15%）。测序结果分析表明,利用碱基编辑器高效筛选到IGF2基因靶点纯合点突变的单克隆细胞。碱基编辑器作为新的基因编辑工具,可以对猪基因组中与经济性状关联的SNP位点进行高效、精确的基因修饰,为加速猪经济性状的遗传改良提供理论与实践基础。     

不同水平酵母硒对黎城大青羊妊娠母羊血液抗氧化能力的影响

试验以黎城大青羊妊娠母羊为研究对象,通过在日粮中添加不同水平酵母硒,分别在配种前、妊娠期第30、90和140天采集血液样品,研究酵母硒对妊娠母羊血液抗氧化能力的影响以及血液抗氧化酶活性和硒含量随妊娠的变化规律。结果发现:随着妊娠的进行,母羊血液中的GSH-Px和SOD活性呈现逐渐升高的趋势,日粮中添加硒元素可以显著(P<0.05)提高妊娠母羊血液的抗氧化能力,增强GSH-Px和SOD的活性并且减少过氧化产物MDA含量;此外,血液中的硒含量也随着日粮中硒水平的提高而增加,较高的硒含量对血液的抗氧化能力有一定的抑制作用。研究结果表明,在动物妊娠期补硒是非常必要的,妊娠母羊日粮中添加酵母硒可以提高血液抗氧化酶活性。