基于RAGE/NF-κB/mTOR信号通路探讨滋阴活血解毒方对AGEs诱导VEC损伤的干预作用

目的 观察滋阴活血解毒方对糖基化终末产物（advanced glycosylation end products,AGEs）诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）损伤的影响及RAGE/NF-κB/mTOR信号通路的变化,探讨该方对AGEs诱导静脉内皮细胞（vein endothelial cell,VEC）损伤的保护作用。方法 培养的HUVEC细胞以100 mg/ml的AGEs诱导损伤,随机分为7个组,除空白组外,其中3组分别加入RAGE抑制剂FPS-ZM1、NF-κB抑制剂PDTC和mTOR抑制剂雷帕霉素（RAP）,余下3组加入各种抑制剂后加入50 mg/mL滋阴活血解毒方浓缩药液。以western-blot法检测RAGE和mTOR的表达,以免疫组化方法检测NF-κB核转移状况。结果 细胞添加AGEs后细胞内出现异常增殖,细胞数量明显增多,多数细胞变形皱缩,胞膜轮廓模糊,细胞内出现粗糙样颗粒变化;抑制剂组及抑制剂加中药组都表现出不同程度的逆转这种损伤的作用,特别是抑制剂加中药组,见梭形正常细胞较多,圆缩形细胞减少。中药加抑制剂组RAGE表达量比单纯抑制剂组显著降低（P<0.01）;中药加抑制剂组mTOR表达量比单纯抑制剂组显著降低（P<0.01）;中药加抑制剂NF-κB的核转移阳性检测率比单纯抑制剂组显著降低（P<0.01）。结论 滋阴活血解毒方能降低AGEs对VEC的损伤,降低RAGE、NF-κ、mTOR的表达。     

基于SIRT1/NF-κB炎性通路探讨加味脑泰方对血管性痴呆大鼠学习记忆及海马组织病理形态的影响

目的 探讨加味脑泰方（以下简称JWF）对血管性痴呆（vascular dementia,VD）大鼠SIRT1/NF-κB p56炎性通路的调控作用。方法 采用双侧颈总动脉结扎法（two-vessel occlusion,2-VO）复制VD大鼠模型。实验设正常组,假手术组,模型组,JWF高、中、低剂量组和奥拉西坦组,其中JWF高、中、低剂量组和奥拉西坦组分别灌胃给予JWF17.0、34.0、51.0 g/kg和奥拉西坦0.216 g/kg,其余3组灌服等容量蒸馏水,连续干预30 d。采用Morris水迷宫、HE染色分别检测大鼠学习记忆能力和海马组织病理形态变化;采用免疫组化检测沉默信息调节因子-1（silent informatio regulator-1,SIRT1）、核因子κB抑制蛋白d亚基（The nuclear factorκB inhibits theprotein subunit,IκBα）、核因子-κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠学习记忆能力显著降低（P<0.05）,海马神经元变性、坏死,炎性细胞浸润增加,且SIRT1、IκBα表达下调,NF-κB p56表达上调（P<0.05）;与模型组比较,奥拉西坦组和JWF高、中剂量组大鼠学习记忆能力显著增强（P<0.05）,海马组织中神经元锥体细胞排列较整齐,轮廓清晰,炎性细胞浸润显著减少,且海马组织内SIRT1、IκBα表达上调,NF-κB p56表达下调（P<0.05）。结论 JWF对血管性痴呆大鼠炎性相关信号通路SIRT1/NF-κB p56具有明显的调控作用,这可能是其保护VD大鼠海马神经元继而改善学习记忆能力的重要机制之一。     

妇科千金片对盆腔炎大鼠TLR2/4-NF-κB信号通路影响的研究

目的 观察妇科千金片对盆腔炎大鼠子宫Toll样受体2（TLR2）、Toll样受体4（TLR4）、核转录因子kappaB（NF-κB）mRNA表达的影响,探讨妇科千金片调控TLR2/4-NF-κB信号通路对盆腔炎大鼠的抗炎机制。方法 通过子宫注射混合菌液建立盆腔炎大鼠模型,将60只雌性SD大鼠随机分为5组,每组12只,即：空白组、假手术组、模型组、妇科千金片组、罗红霉素组,分别予以相应药物干预,运用免疫组化检测子宫组织中TLR2、TLR4、NF-κB的灰度值;运用实时荧光定量PCR检测子宫组织中TLR2、TLR4、NF-κB的mRNA表达变化。结果 与空白组、假手术组比较,模型组的TLR2、TLR4、NF-κB灰度值显著降低（P<0.01）,TLR2、TLR4、NF-κBmRNA的表达均显著升高（P<0.01）,表明模型成功;与模型组比较,妇科千金片组、罗红霉素组TLR2、TLR4、NF-κB灰度值均显著升高（P<0.01）,TLR2、TLR4、NF-κBmRNA均显著降低（P<0.01）。结论 妇科千金片对盆腔炎大鼠抗炎的作用机制,可能是通过调控TLR2/4-NF-κB炎性介质变化信号通路的传导而实现的。     

益气养阴清热方对KKAy小鼠GLP-2、IFN-γ、NF-κB的影响

目的 探讨益气养阴清热方对自发性2型糖尿病（KKAy）小鼠胰高血糖素样肽2（glucagon-like peptide 2,GLP-2）、γ干扰素（interferon gamma,IFN-γ）、核因子κB（nuclear factor kappa beta,NF-κB）的影响。方法 取雄性SPF级KKAy小鼠50只,随机分为模型组,二甲双胍组,益气养阴清热方高、中、低剂量组,每组各10只;另取10只C57BL/6J小鼠作为正常组。各组予以相应干预。干预8周后检测各组小鼠GLP-2、IFN-γ、NF-κB水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠IFN-γ、NF-κB明显升高（P<0.01）,GLP-2水平明显降低（P<0.01）。益气养阴清热方高、中、低剂量组均可降低KKAy小鼠IFN-γ水平（P<0.05）;益气养阴清热方高剂量组可降低小鼠NF-κB水平（P<0.05）;益气养阴清热方高、中、低剂量组均可升高小鼠GLP-2水平（P<0.05）。结论 益气养阴清热方能改善糖尿病小鼠血糖、胰岛素抵抗,其作用可能与提高GLP-2水平、降低炎症反应相关。     

六味地黄汤对5/6肾切除大鼠NF-κB、MCP-1、Col-Ⅲ表达的影响

目的 观察六味地黄汤对5/6肾切除大鼠残肾转录因子-核因子κB（NF-κB）、单核细胞趋化因子（MCP-1）及Ⅲ型胶原（Col-Ⅲ）表达的影响,探讨六味地黄汤抑制肾间质纤维化进展的作用机制。方法 按照随机数字表法将60只SD雄性大鼠分为5组：空白组、假手术组、模型组、依那普利组、六味地黄汤组,每组12只,后三组行5/6肾切除术诱导大鼠肾衰模型,假手术组同期手术,但不损及肾脏。造模术后3 d进行灌胃干预。灌胃8周后处死各组大鼠,观察各组大鼠残肾组织形态学变化并用免疫组化法检测大鼠残肾NF-κB、MCP-1、Col-Ⅲ的表达。结果（1）观察5/6肾切除大鼠残肾组织细胞形态学,与模型组相比六味地黄汤、依那普利组可减轻大鼠肾间质损害及纤维化程度;（2）免疫组化半定量分析显示六味地黄汤组肾皮质的NF-κB、MCP-1及Col-Ⅲ表达均明显低于模型组（P<0.05）,与依那普利组差异无统计学意义（P>0.05）。结论 六味地黄汤可能通过下调NF-κB、MCP-1及Col-Ⅲ的表达,减少细胞外基质的积聚,减轻炎症反应和纤维化程度,抑制5/6肾切除大鼠肾间质纤维化进展,可作为慢性肾衰竭的辅助用药。     

γ-亚麻酸在RAW264.7细胞中的抗炎症作用机制（英文）

[目的]探讨γ-亚麻酸（GLA）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7细胞产生炎症介质的影响及其机制。[方法]采用体外培养的巨噬细胞系RAW264.7细胞,待细胞生长至融合状态后加入不同浓度（0、12.5、25、50μmol/L）的GLA预孵4h,利用100ng/ml的脂多糖（LPS）刺激12h或0.5h,同时设空白对照和LPS对照,利用蛋白印迹法检测诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、环加氧酶-2（COX-2）蛋白的表达以及对IκBα、p-JNK/SAPK（Thr183/Tyr185）、p38MAPK、p-p38MAPK（Thr180/Tyr182）、ERK1/2、p-ERK1/2的影响。[结果]GLA可以显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中iNOS和COX-2的蛋白表达（P〈0.05）,且在0～50μmol/LGLA浓度范围内存在剂量依赖关系。GLA可以显著抑制IκBα的降解（P〈0.05）,从而抑制NF-κB的激活。GLA可以显著抑制LPS诱导的JNK1/2以及ERK1/2的磷酸化（P〈0.05）,对p38的磷酸化没有显著的影响。[结论]GLA具有很好的消炎功效。抑制JNK1/2以及ERK1/2的磷酸化、抑制NF-κB的激活可能是其发挥生物学效应的重要机制。     

肝胃百合汤对慢性应激与幽门螺杆菌双重损伤因素模型小鼠胃黏膜组织HSP70、NF-κB蛋白表达的影响

目的 观察肝胃百合汤对慢性应激与Hp感染双因素损伤模型小鼠胃组织NF-κB、HSP70蛋白表达的影响,并研究其治疗机制。方法 将60只雄性小鼠随机分为6组,分别为空白组、单纯应激组、单纯Hp组、Hp+应激组、肝胃百合汤组及雷尼替丁组;空白组和单纯Hp组正常饲养,不限制进食进水;其余各组小鼠随机选取禁食、禁水、电击、行为束缚等10种刺激方法制备慢性应激小鼠模型。于造模第7天时,除空白组及单纯应激组外,其余各组小鼠给予Hp菌液灌胃;连续造模14 d时,肝胃百合汤组小鼠灌胃肝胃百合汤,雷尼替丁组小鼠予以灌胃盐酸雷尼替丁,其他各组小鼠灌胃蒸馏水;连续干预14 d后,取胃组织检测溃疡指数;采用免疫组化法检测小鼠胃黏膜组织HSP70、NF-κB的蛋白表达。结果 对比空白组,单纯Hp组、单纯应激组以及Hp+应激组小鼠的溃疡指数与HSP70、NF-κB蛋白表达明显升高（P<0.01）,且Hp+应激组小鼠的溃疡指数及NF-κB蛋白表达显著高于单纯应激组及单纯Hp组（P<0.01）;对比Hp+应激组,肝胃百合汤组和雷尼替丁组小鼠溃疡指数均显著降低（P<0.01）,且肝胃百合汤小鼠的溃疡指数组显著低于雷尼替丁组（P<0.01）;肝胃百合汤组和雷尼替丁组HSP70蛋白表达显著增加（P<0.01）,NF-κB蛋白表达显著降低（P<0.01）,且肝胃百合汤组HSP70蛋白表达量大于雷尼替丁组,NF-κB蛋白表达量低于雷尼替丁组（P<0.01）。结论 慢性应激与Hp可协同致胃黏膜损伤;肝胃百合汤可能是通过使HSP70蛋白表达增加,加强胃组织的自身修复作用,使受体的自身免疫能力提高,并降低NF-κB蛋白表达,减少其活性,使受损胃组织的炎症反应降低,从而起到抑制Hp,修复受损胃组织,加快胃溃疡好转的作用。     

γ-亚麻酸在RAW264.7细胞中的抗炎症作用机制

[目的]探讨γ-亚麻酸（GLA）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7细胞产生炎症介质的影响及其机制。[方法]以体外培养的巨噬细胞系RAW264.7细胞为研究对象,待细胞生长至融合状态后加入不同浓度（0、12.5、25、50μmol/L）的GLA预孵4 h,利用100 ng/m l的脂多糖（LPS）刺激12.0 h或0.5 h,同时设空白对照和LPS对照,利用蛋白印迹法检测诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、环加氧酶-2（COX-2）蛋白的表达以及对IκBα、p-JNK/SAPK（Thr183/Tyr185）、p38 MAPK、p-p38 MAPK（Thr 180/Tyr182）、ERK1/2、p-ERK1/2的影响。[结果]GLA可以显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中iNOS和COX-2的蛋白表达（P〈0.05）,且在0~50μmol/L GLA浓度范围内存在剂量依赖关系。GLA可以显著抑制IκBα的降解（P〈0.05）,从而抑制NFκ-B的激活。GLA可以显著抑制LPS诱导的JNK1/2以及ERK1/2的磷酸化（P〈0.05）,对p38的磷酸化没有显著影响。[结论]GLA具有很好的消炎功效。抑制JNK1/2和ERK1/2的磷酸化、抑制NF-κB的激活可能是GLA发挥生物学效应的重要机制。     

蠲痹历节清酊对大鼠急性痛风性关节炎模型滑膜组织中ICAM-1、NF-κB表达的影响陆

目的 初步探讨蠲痹历节清酊对大鼠急性痛风性关节炎模型的作用机制。方法 选用SPF级健康雄性SD大鼠40只,分成蠲痹历节清酊组、扶他林软膏组、模型组、空白对照组,每组10只。对前三组采用踝关节腔注射尿酸钠溶液造成急性痛风性关节炎模型,并予以相应干预。观察各组大鼠造模后一般状态;用缚线法检测大鼠踝关节肿胀度;光镜下观察踝关节滑膜的病理变化;采用免疫组化染色检测滑膜组织中细胞间粘附分子-1（ICAM-1）和核转录因子（NF-κB）含量。结果 与模型组比较,扶他林软膏组、蠲痹历节清酊组肿胀度降低（P<0.05）;大鼠踝关节滑膜光镜观察：空白对照组滑膜组织结构整齐、层次分明。模型组滑膜组织结构损坏、层次混乱,组织充血、水肿,大量炎性细胞浸润、成纤维细胞增生,少量巨噬细胞浸润;扶他林软膏组、蠲痹历节清酊组与模型组比较改善明显;大鼠踝关节滑膜组织中,空白对照组与模型组ICAM-1、NF-κB表达比较差异有统计学意义（P<0.05）。扶他林软膏组、蠲痹历节清酊组与模型组ICAM-1、NF-κB表达比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论 蠲痹历节清酊具有缓解肿胀、改善滑膜炎症、抑制关节滑膜中ICAM-1、NF-κB表达的作用。     

电针对佐剂性关节炎大鼠关节滑膜细胞内TAK1表达的影响

目的 观察电针足三里、关元穴对佐剂性关节炎（AIA）大鼠踝关节滑膜细胞内转化生长因子β激活激酶1（TAK1）表达的影响,探索电针对类风湿性关节炎（RA）可能的干预机制。方法 40只SD大鼠随机分为空白组、模型组、甲氨蝶呤（MTX）组、电针组,每组10只。采用Fueund氏完全佐剂（FCA）法造模。电针组予以电针大鼠关元穴、双侧足三里穴,MTX组予以0.35 mg/kg剂量的MTX灌胃治疗,空白组与模型组每日予以特制大鼠固定器固定后松绑放回笼内饲养。实验期间每3天1次测量大鼠体质量、足爪容积,并对关节炎指数进行评分;采用放射免疫法检测TNF-α、用Western Blot检测TAK1、NF-κB蛋白表达。实验结束后比较各组大鼠踝关节滑膜滑膜组织中TNF-α,滑膜细胞内TAK1,胞核内NF-κB表达水平。结果 与空白组比较,模型组大鼠体质量增长明显缓慢、足趾肿胀明显、关节炎指数明显升高（P<0.01）,滑膜组织内TNF-α显著升高、滑膜细胞内TAK1含量显著升高、胞核内NF-κB表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,电针组大鼠体质量增长较快、足趾肿胀较轻、关节炎指数较低（P<0.05）,滑膜组织中TNF-α低于模型组、滑膜细胞内TAK1、NF-κB表达较低（P<0.05）。结论 电针AIA大鼠足三里、关元等穴能够有效抗炎,其干预机制可能与抑制关节滑膜细胞内TAK1的表达,良性调控NF-κB这一炎症信号通路有关。     

健脾补土法组方含药血清对体外嗅鞘细胞低氧/复氧损伤模型P65、P50及磷酸化IκBα表达的影响

目的 探讨健脾补土法组方含药血清对体外嗅鞘细胞低氧/复氧损伤模型核因子KB（nuclear factor-kappa B,NF-KB）的亚单位P65、P50及NF-KB抑制蛋白（P-IκBα）表达的影响。方法 将原代培养的嗅鞘细胞分为5组：正常血清对照组、正常血清+低氧组、低氧+依达拉奉含药血清组、低氧+健脾补土法组方含药血清组、正常血清+低氧+NF-KB抑制剂/抗氧化剂（PDTC,50μmol/L）组,采用微需氧袋低氧/复氧的方法诱导嗅鞘细胞形成脑缺血再灌注损伤样模型,用Western blot法检测嗅鞘细胞胞浆P65、P50、P-IκBα和胞核P65、P50的含量。结果 与正常血清对照组比较,正常血清+低氧组胞浆和胞核P65、P50,胞浆P-IκBα表达均显著升高,差异有统计学意义（P<0.01）;与正常血清+低氧组比较,低氧+依达拉奉组、低氧+健脾补土组、正常血清+低氧+PDTC组、低氧+健脾补土+PDTC组胞浆和胞核P65、P50,胞浆P-IκBα表达均降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 健脾补土法组方能通过抑制嗅鞘细胞缺氧/复氧损伤后P65、P50、P-IκBα的过度表达,对NF-κB通路的活化具有抑制作用。     

虾青素对脂多糖通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路诱导的IPEC-J2细胞炎症的影响

【目的】研究虾青素(AST)对脂多糖(LPS)通过TLR4/My D88/NF-κB信号通路诱导的IPEC-J2细胞炎症的影响。【方法】采用MTT法确定虾青素和LPS对IPEC-J2细胞和转染IPEC-J2细胞的最佳处理浓度和处理时间,在处理后采用实时荧光定量PCR检测IPEC-J2细胞和转染IPEC-J2细胞炎症因子NF-κB、TNF-α、IL-6和IL~(-1)β的m RNA相对表达量,采用ELISA检测上述炎症因子的分泌量。【结果】当处理3 h,虾青素浓度达到150μmol·L~(-1)时,IPEC-J2细胞和转染IPEC-J2细胞活力达到峰值;当处理6 h,LPS质量浓度达到100 ng·m L~(-1)时,IPEC-J2细胞和转染IPEC-J2细胞活力达到峰值。与对照组相比,LPS组IPEC-J2细胞NF-κB、TNF-α、IL-6、IL~(-1)β的m RNA相对表达量和分泌量显著升高(P0.05);与LPS组相比,AST+LPS组NF-κB、TNF-α、IL-6、IL~(-1)β在IPEC-J2细胞中的m RNA相对表达量和分泌量显著降低(P0.05),而在转染IPEC-J2细胞中的炎症因子m RNA相对表达量和分泌量均无显著变化(P0.05)。【结论】虾青素可以抑制细胞炎症反应,且对细胞的保护作用与TLR4/My D88/NF-κB信号通路相关。     

三七总皂苷预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的 探讨三七总皂苷对大鼠肾缺血再灌注损伤（renal ischemia reperfusion injury,RIRI）的保护作用,并研究其对氧化应激及炎症级联反应的影响。方法 将40只雄性SD大鼠随机均分为假手术组,模型组,三七总皂苷低、中、高剂量[40、80、160 mg/（kg·d）]预处理组,分别予以相应干预,连用5 d。在最后1次给药1 h后采用切除右肾、夹闭左肾动脉45 min后再灌注3 h的方法建立RIRI模型。五组均于再灌注3 h后经腹主动脉采血5 mL,检测血清中尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）、丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性;取肾组织常规切片和HE染色,光镜下观察肾组织病理学改变;免疫组化法检测细胞间黏附因子-1（ICAM-1）、核因子-κB p65（NF-κB p65）蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组的SCr、BUN、MDA含量明显增高,SOD活性降低,光镜下可见肾小管损伤明显,免疫组化显示ICAM-1、NF-κB p65蛋白表达明显增高,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,三七总皂苷各剂量组的SCr、BUN、MDA水平明显降低,SOD活性增高,肾组织病理学改变明显减轻,ICAM-1、NF-κB p65表达显著降低,差异有统计学意义（P<0.01）;三七总皂苷中、高剂量组组间比较,各指标差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 三七总皂苷可通过减轻氧化应激和炎性损伤,有效改善大鼠肾缺血再灌注损伤。     

氟苯尼考对肉鸡空肠黏膜的完整性及免疫相关基因表达的影响

研究空肠免疫相关指标及绒毛结构的变化在氟苯尼考致肉鸡腹泻中的作用。40羽1日龄肉鸡适应性饲养7 d后,随机分为对照组、氟苯尼考组（饮水添加100 mg·(kg?d)^-1氟苯尼考至35日龄）,35日龄检测体重、脾脏与胸腺指数,取空肠组织以HE染色,观察组织切片并测量绒毛长度、隐窝深度且计算绒隐比,荧光定量PCR检测空肠TLR4、MyD88、NF-κB和TNF-α基因表达量。结果表明,与对照组相比,氟苯尼考组肉鸡空肠绒毛长度、绒隐比极显著下降（P＜0.01）,隐窝深度极显著升高（P＜0.01）;体重、脾脏指数与胸腺指数极显著下降（P＜0.01）;TLR4、MyD88、NF-κB与TNF-α mRNA相对表达量极显著升高（P＜0.01）。空肠绒毛结构功能改变及免疫相关指标异常表达参与了氟苯尼考致肉鸡腹泻的发生发展。     

复方钩藤降压片调节TLR4/NF-κB信号通路对自发性高血压大鼠炎症状态的影响

目的 研究复方钩藤降压片对TLR4/NF-_κB信号通路以及血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）、血管紧张素（1-7）[angiotensin1-7,Ang（1-7）]、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）相关炎症因子表达的影响,探讨复方钩藤降压片对自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensire rats,SHR）的可能降压机制。方法 将21只7周龄雄性SHR随机分为模型对照组（SHR组）、复方钩藤降压片治疗组（SHR-G组）、缬沙坦片治疗组（SHR-D组）,另取7只雄性WKY大鼠为空白对照组（WKY组）。所有大鼠给予相应干预,6周后采用ELISA方法检测血清中AngⅡ、Ang（1-7）和MCP-1的含量;采用免疫组织化学方法检测胸主动脉内皮细胞中TLR4和NF-_κB p65的蛋白水平。结果（1）SHR组血浆促炎因子AngⅡ、MCP-1的含量明显高于WKY组（P<0.05）,而抑炎因子Ang（1-7）的含量明显低于WKY组（P<0.01）;经复方钩藤降压片和缬沙坦片干预,可以明显降低SHR血浆中AngⅡ和MCP-1的含量（P<0.05）,而增加血浆抑炎因子Ang（1-7）的含量（P<0.05 or P<0.01）。（2）SHR组胸主动脉内皮细胞中TLR4和NF-_κB p65的蛋白水平明显高于WKY组（P<0.01）;相对于SHR组,SHR-D和SHR-G组大鼠胸主动脉组织中TLR4和NF-_κB p65的表达量显著降低（P<0.05 or P<0.01）。结论 复方钩藤降压片可通过抑制胸主动脉组织内皮细胞TLR4/NF-_κB信号通路的活化,降低促炎因子AngⅡ、MCP-1的水平,提高抑炎因子Ang（1-7）的水平,抑制机体的炎症状态。     

苦参碱抗PCV2诱导小鼠肺炎的作用及其机制研究

为探讨苦参碱在小鼠体内的抗炎作用及其机制,本研究利用猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染诱导小鼠肺炎模型,将32只昆明小鼠均分为空白对照组、PCV2组、苦参碱处理组(40 mg/kg)和利巴韦林阳性对照组(40 mg/kg)。除空白对照组外,其他各组小鼠每只腹腔注射0.5 mL PCV2,攻毒后的第5天开始腹腔注射对应药物,每天给药一次,连续给药5 d。在攻毒后的第11天,观察小鼠肺脏的病理组织学变化,qPCR检测PCV2 Cap基因,IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α基因的mRNA表达,Western blot检测相应炎症因子、TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及NLRP3炎症小体关键蛋白的表达。结果表明:1)苦参碱可显著抑制PCV2感染诱发的肺间质增宽现象。2)苦参碱可显著降低肺脏PCV2病毒载量(P<0.05)及炎症因子IL-1β(P<0.05)、IL-6(P<0.000 1)、IL-8(P<0.000 1)和TNF-α(P<0.000 1)的mRNA和蛋白(P<0.000 1)的相对表达量。3)苦参碱可显著降低TLR4(P<0.000 1)、MyD88(P<0.000 1)、p-IκBα(P<0.000 1)、NF-κB p65(P<0.01)、NLRP3(P<0.000 1)、ASC(P<0.000 1)和Caspase-1(P<0.000 1)的蛋白表达量,升高IκBα(P<0.001)的蛋白表达量。综上,苦参碱可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB 信号通路的活化以及 NLRP3 炎症小体的激活,来发挥抗PCV2诱导的小鼠肺炎作用,为进一步揭示苦参碱的抗病毒抗炎作用提供数据支撑,为苦参碱作为新兽药开发奠定基础。     

加味丹参饮抑制p38MAPK表达保护缺氧/复氧乳鼠心肌细胞损伤的实验研究

目的 观察加味丹参饮含药血清对缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）乳鼠心肌细胞p38 MAPK蛋白表达的影响,以探讨其保护心肌的作用机制。方法 将20只SD乳鼠的心肌细胞进行原代培养,建立H/R模型并随机分为H/R组、SB203580（p38MAPK阻断剂组）、加味丹参饮含药血清组,正常心肌细胞组作为对照组。采用T淋巴细胞化学染色法鉴定心肌细胞,罗丹明B（Rhodamine B）染色法观察细胞形态,MTT比色法检测含药血清对乳鼠心肌细胞的毒性,Western-blot法检测MKK3（促分裂原活化蛋白激酶-激酶3）、MKK6（促分裂原活化蛋白激酶-激酶6）、p38MAPK、phospho-p38MAPK蛋白表达。结果 与正常血清对照组比较,H/R组MKK3、MKK6的蛋白表达增多,p38MAPK通路阻断剂SB203580和加味丹参饮均不能减少其表达;p38MAPK、phospho-p38MAPK在H/R时表达均增加（P<0.01）,而SB203580和加味丹参饮含药血清均能减少其表达（P<0.01）。结论 加味丹参饮含药血清预处理可通过抑制缺氧,复氧心肌细胞p38MAPK信号通路发挥保护作用,抑制p38MAPK表达及其磷酸化,减轻心肌细胞损伤,起到保护心肌细胞的作用。     

保健养生课程传统教学与网络互动教学的比较与研究

以大豆（Glycine max.）为试验材料,探讨臭氧(O₃)浓度升高〔(80±10) nL·L^-1)对大豆根系内源激素含量及活性氧代谢系统的影响。研究表明：在大豆整个生育期内,O₃胁迫处理下的大豆根系脱落酸（ABA）含量、玉米素核苷（ZR）含量与对照相比显著（P<0.05）升高,生长素（IAA）含量显著（P<0.05）降低,内源激素间平衡改变,IAA/ABA、AR/ABA及(IAA+ZR)/ABA比值显著（P<0.05）降低,超氧阴离子产生速率、MDA含量、POD活性和脯氨酸含量与对照相比显著（P<0.05 ）升高,SOD和CAT活性显著（P<0.05）降低。O₃胁迫在一定程度上可以改变内源激素的含量及激素间的平衡比例,提高大豆的抗氧化能力,但是,长时间的胁迫作用将导致抗氧化系统氧化损伤,从而使膜脂过氧化程度加重,对大豆表现为伤害效应。     

11S通过NF-κB信号通路引起猪小肠上皮细胞损伤

通过体外培养猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),研究大豆球蛋白(11S)对猪小肠上皮细胞的影响。将IPEC-J2细胞分为6组[A(对照组)、B、C、D、E和F],各组中分别添加0、1、5、10、5、5 mg·mL~(-1)的11S,并且在E组和F组分别添加1μmol·L~(-1)吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)和1μmol·mL~(-1) Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)。分别于8、16、24 h,用CCK-8法检测细胞存活率,用ELISA法检测细胞一氧化氮(NO)、二胺氧化酶(DAO)、5-羟色胺(5-HT)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)含量,用western blot法检测细胞p-NF-κB p65、iNOS、COX-2的蛋白表达量,用qPCR法检测细胞NF-κB p65、IKKβ、iNOS、IKKα、COX-2 mRNA的相对表达量。结果表明:11S可以降低猪小肠上皮细胞存活率,添加PDTC和L-NAME可以提高小肠上皮细胞存活率;11S可促进NO、DAO、5-HT和IL-6的分泌,降低IL-10的分泌,增加p-NF-κB p65、iNOS、COX-2的蛋白表达量及NF-κB p65、IKKβ、iNOS、IKKα、COX-2 mRNA的相对表达量,添加PDTC和L-NAME可抑制11S的作用。综上,11S可引起猪小肠上皮细胞损伤,随着11S浓度的增大,损伤程度增加,PDTC和L-NAME可以降低11S对细胞的损伤。