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1.
[目的]优选β-环糊精包合γ-亚麻酸的最佳工艺。[方法]采用BOX-Behnken设计和响应曲面分析优选包合的最佳工艺,并采用差示扫描量热分析及X-射线衍射对包合物进行定性分析。[结果]β-环糊精包合γ-亚麻酸的最佳工艺条件为:β-环糊精与γ-亚麻酸的物质的量比6.47∶1、温度51.15℃、包合时间2.03h,在该条件下包合率达91.51%。定性分析表明γ-亚麻酸与β-环糊精确实形成了包合物,其包合物的结构与简单混合物的结构有明显不同,已构成新的固体相。[结论]该研究可有效地减少工艺操作的盲目性,为进一步的放大生产提供依据。  相似文献   
2.
构建大肠杆菌γ-谷氨酰转肽酶原核表达载体pGEX-4T-1/γ-ggt及表达与鉴定目的蛋白,为进一步利用该酶催化合成茶氨酸等目的产物奠定了基础。以大肠杆菌DH5α总DNA为模板,用PCR法在γ-ggt编码序列上下游引入酶切位点并扩增出γ-谷氨酰转肽酶基因;将γ-ggt编码序列克隆入原核表达载体pGEX-4T-1的相应酶切位点;用PCR鉴定重组质粒pGEX-4T-1/γ-ggt,并对插入基因片断测序;重组质粒pGEX-4T-1/γ-ggt转化大肠杆菌BL21(DE3),经乳糖诱导后用SDS-PAGE分析表达产物,并经Westernblot鉴定。获得大肠杆菌γ-谷氨酰转肽酶基因,并成功构建到原核表达载体pGEX-4T-1上,转化有pGEX-4T-1/γ-ggt工程菌BL21(DE3)经1 g/L乳糖诱导1 h后即开始表达目的蛋白,在诱导6 h后表达蛋白量达到最高,随着时间的延长,目的蛋白没有被降解,此蛋白主要以包涵体形式存在,Western blot鉴定了此目的蛋白。成功构建了大肠杆菌γ-谷氨酰转肽酶原核表达载体pGEX-4T-1/γ-ggt,并进行了目的蛋白的鉴定。  相似文献   
3.
酵母乙醇提取物是利用啤酒干酵母经培养发酵后提取的富含多种活性物质的混合物。初步实验研究发现,该物质对大肠杆菌蛋白表达有明显促进作用。为了进一步研究其对蛋白表达的作用,以E.coli BL21(DE3)/p GEX-4t-1-ggt为主要研究菌,以2 g·L-1乳糖作为诱导剂,研究酵母乙醇提取物对γ-GGT蛋白表达的作用。研究发现,分批添加终浓度10 g·L-1的酵母提纯提取物到2 g·L-1的乳糖为诱导剂的培养基中可以显著提高γ-GGT蛋白的表达及宿主菌的生长,蛋白表达量比1 mmol·L-1 IPTG诱导效果高10%~50%,菌体密度提高1.75~3倍左右。对于其他的重组蛋白及表达宿主有相似的作用。酵母乙醇提取物与乳糖组成的复合制剂可以有效替代有毒性的IPTG作为诱导剂的使用,为大规模诱导蛋白表达奠定了基础。  相似文献   
4.
孔秀芹  殷志敏  罗兰 《安徽农业科学》2010,38(32):18062-18063,18090
[目的]探讨γ-亚麻酸(GLA)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞产生炎症介质的影响及其机制。[方法]以体外培养的巨噬细胞系RAW264.7细胞为研究对象,待细胞生长至融合状态后加入不同浓度(0、12.5、25、50μmol/L)的GLA预孵4 h,利用100 ng/m l的脂多糖(LPS)刺激12.0 h或0.5 h,同时设空白对照和LPS对照,利用蛋白印迹法检测诱生型一氧化氮合酶(iNOS)、环加氧酶-2(COX-2)蛋白的表达以及对IκBα、p-JNK/SAPK(Thr183/Tyr185)、p38 MAPK、p-p38 MAPK(Thr 180/Tyr182)、ERK1/2、p-ERK1/2的影响。[结果]GLA可以显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中iNOS和COX-2的蛋白表达(P〈0.05),且在0~50μmol/L GLA浓度范围内存在剂量依赖关系。GLA可以显著抑制IκBα的降解(P〈0.05),从而抑制NFκ-B的激活。GLA可以显著抑制LPS诱导的JNK1/2以及ERK1/2的磷酸化(P〈0.05),对p38的磷酸化没有显著影响。[结论]GLA具有很好的消炎功效。抑制JNK1/2和ERK1/2的磷酸化、抑制NF-κB的激活可能是GLA发挥生物学效应的重要机制。  相似文献   
5.
[目的]为了降低工业用谷氨酰胺合成酶的成本。[方法]利用酵母下脚料制得废酵母基来培养BL21(DE3)-pET28b-glnA,用乳糖诱导合成GS,并对诱导生长点、诱导浓度、诱导时间、添加碳源氮源以及所得GS的可溶性和酶活进行研究。[结果]酵母下脚料可以替代LB培养基诱导产生重组GS,其最佳诱导条件为:OD600=0.5,乳糖1 g/L诱导12 h;并不需要补加其他碳氮源,GS可溶性90%以上,催化Glu转化为Gln的转化率为94.5%。[结论]生产用高活性干酵母经过短期发酵后,酵母下脚料中的营养活性物质依然很丰富,可以用来培养大肠杆菌诱导目的蛋白表达,从而降低工业用谷氨酰胺合成酶的成本。  相似文献   
6.
[目的]建立酵母能量偶联体系合成谷氨酰胺并优化体系反应条件。[方法]利用酵母下脚料培养工程菌乳糖诱导所得的谷氨酰胺合成酶,与酵母糖酵解产生的ATP能量偶联,酶法合成谷氨酰胺,并优化反应体系中各组分,提高谷氨酰胺产量。[结果]2%甲苯预处理干酵母;反应体系各组分的终浓度分别是NH4^+100 mmol/L,Glu200 mmol/L,磷酸盐100 mmol/L,Mn^2+10 mmol/L,Mg^2+不另加;谷氨酸转化率达94.5%,谷氨酰胺产量为27.6 g/L。[结论]成功建立酵母能量偶联酶法合成谷氨酰胺体系,并对反应体系进行放大和初步优化,为酶法合成谷氨酰胺的工业化进程奠定了基础。  相似文献   
7.
乳糖诱导重组人TRAIL胞外片段在大肠杆菌中的表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
以重组人TRAIL胞外片段蛋白表达宿主菌株BL21(DE3)(pET3(c)/hTRAIL)作为研究对象,借助SDS-PAGE分析方法,对于用乳糖诱导由T7 lac启动子控制的重组目的产物的表达规律进行了优化研究。分析比较菌株诱导起始生长量、乳糖诱导浓度、乳糖诱导时间等因素对重组产物表达的影响。结果表明,乳糖能够很好地诱导重组目的产物的表达。在优化诱导表达条件之后,乳糖诱导的目的产物的表达量与IPTG的诱导量相当,并且具有较好的可溶性及抗肿瘤活性。  相似文献   
8.
[目的]探讨γ-亚麻酸(GLA)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞产生炎症介质的影响及其机制。[方法]采用体外培养的巨噬细胞系RAW264.7细胞,待细胞生长至融合状态后加入不同浓度(0、12.5、25、50μmol/L)的GLA预孵4h,利用100ng/ml的脂多糖(LPS)刺激12h或0.5h,同时设空白对照和LPS对照,利用蛋白印迹法检测诱生型一氧化氮合酶(iNOS)、环加氧酶-2(COX-2)蛋白的表达以及对IκBα、p-JNK/SAPK(Thr183/Tyr185)、p38MAPK、p-p38MAPK(Thr180/Tyr182)、ERK1/2、p-ERK1/2的影响。[结果]GLA可以显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中iNOS和COX-2的蛋白表达(P〈0.05),且在0~50μmol/LGLA浓度范围内存在剂量依赖关系。GLA可以显著抑制IκBα的降解(P〈0.05),从而抑制NF-κB的激活。GLA可以显著抑制LPS诱导的JNK1/2以及ERK1/2的磷酸化(P〈0.05),对p38的磷酸化没有显著的影响。[结论]GLA具有很好的消炎功效。抑制JNK1/2以及ERK1/2的磷酸化、抑制NF-κB的激活可能是其发挥生物学效应的重要机制。  相似文献   
9.
利用枯草芽孢杆菌发酵生产γ-聚谷氨酸   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
利用实验室筛选得到的一株枯草芽孢杆菌发酵生产γ-聚谷氨酸(γ-PGA),主要对其发酵工艺参数进行了优化。先通过单因素优化及PB试验筛选重要因子,然后利用Box-Behnken优化发酵工艺最佳组合,获得了最佳培养基组成和最佳培养条件,且在摇床水平上使γ-PGA产量由最初的6.03 g·L~(-1)提高到10.98 g·L~(-1)。接着通过对补料工艺的探索,确定了最佳补料时间和补料配方,最后在5 L发酵罐上进行了放大生产,最终γ-PGA的最高产量可达到31.18 g·L~(-1)。  相似文献   
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