抗鹿源牛病毒性腹泻-粘膜病病毒特异性单克隆抗体的制备与鉴定

为建立鹿源牛病毒性腹泻-粘膜病病毒(BVDV)检测方法,本研究制备了抗鹿源BVDV特异性单克隆抗体(MAb)。用纯化的BVDV免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经3次有限稀释法克隆和间接ELISA法筛选,获得2株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株2A3和4B12。通过间接ELISA检测,MAb效价为:上清液及腹水分别为1∶512、1∶640和1∶12800、1∶16000;MAb的亚类鉴定结果表明,2株杂交瘤细胞分泌的抗体亚类均为IgGl亚类;经ELISA测定,2A3和4B12与BVDVC24V株、HCV、BDV、PRV均不发生交叉反应,但与BVDVCCSYD株发生交叉反应;IFA试验结果显示,4B12和2A3与接种BVDVN71株病毒液的细胞反应产生较强的特异荧光;抗原识别位点分析结果表明,2A3和4B12两株MAb所识别的抗原位点相同。这两株MAb的获得为鹿BVDV的检测方法的建立奠定良好的基础。     

胰腺干细胞的研究进展

概述了胰腺干细胞的分布、胰腺的发生、胰腺干细胞的相关标记物以及胰腺干细胞的体外分离培养、增殖、分化等领域的研究进展，并对胰腺干细胞的生物学特征、体外分离培养时遇到的困难等进行了探讨，针对所遇到的困难提出了一些改进意见。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白与糖蛋白的表达纯化及鉴定

In order to gain nucleocapsid protein （N） and glycoprotein （E） of porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV）, the total RNA was extracted,ORF7 and ORF5 genes were obtained by RT-PCR, inserted into pET-28a(+) vector, and then transformed into Escherichia coli BL21（DE3）,respectively. The expressed products were identified by SDS-PAGE and Western blotting, and purified by affinity chromatography. The results showed that N and E fusion protein were successfully expressed and the proteins had good reactionogenicities by Western blotting analysis. The purities of the purified proteins were 89% and 90%, respectively. This study could lay foundations for molecular biological function research and establishment of test methods for detection antibodies of PRRSV.     

生物活性肽的研究进展

生物活性肽属于多功能因子。随着各种生物活性的不断发现,对其生理功能的不断探究,生物活性肽越来越受到人们的关注。作者对不同来源的生物活性肽,依其不同的生理功能进行了综述,以期为生物活性肽的研发提供参考。     

猪生长激素抗独特型抗体的制备及生物活性检测

【目的】以鼠肝细胞为模型,在细胞水平上研究猪生长激素抗独特型抗体的作用机制。【方法】以猪生长激素单克隆抗体1A5-F(ab′)2部分免疫BALB/c鼠,采用杂交瘤细胞技术制备猪生长激素抗独特型单克隆抗体。分离Wistar大鼠肝脏细胞,以其为模型,采用流式分析、激光共聚焦显微镜观察、Western-blot等技术手段,研究猪生长激素抗独特型单克隆抗体的生物活性。【结果】成功制备了3株猪生长激素抗独特型单克隆抗体,分别命名为CG1、CG2、CG3。其中,CG1阳性信号最强,经鉴定,CG1为Ab2β类抗独特型抗体,属于IgG2a亚类。CG1能够以二聚体的形式激活鼠肝细胞表面的生长激素受体,并可激活信号转导蛋白JAK2。【结论】CG1抗体可与鼠肝脏细胞表面的生长激素受体特异性地结合,并可磷酸化信号转导蛋白JAK2。     

海洋红酵母菌和枯草芽孢杆菌对蛋雏鸡生长性能、肠道形态和免疫功能的影响

本试验旨在研究饲粮中单独或联合添加益生菌对蛋雏鸡生长性能、肠道形态和免疫功能的影响。选用396只1日龄海兰褐蛋雏鸡,随机分为4组,每组3个重复,每个重复33只,对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加1×10^8 CFU/kg海洋红酵母菌、1×10^10 CFU/kg枯草芽孢杆菌和复合益生菌(1×10^8 CFU/kg海洋红酵母菌+1×10^10CFU/kg枯草芽孢杆菌)。试验期28d。结果表明:与对照组比,添加复合益生菌能提高蛋雏鸡15~28和1~28日龄的平均日增重并降低15~28日龄的耗料增重比(P<0.05);复合益生菌组蛋雏鸡十二指肠和空肠的绒毛高度及绒腺比提高(P<0.05);复合益生菌组蛋雏鸡血清IgA、IgG含量提高(P<0.05);复合益生菌组空肠IL-4、IL-6 mRNA相对表达量提高(P<0.05),海洋红酵母菌组空肠IL-4mRNA相对表达量提高(P<0.05),枯草芽孢杆菌组空肠IL-6mRNA相对表达量提高(P<0.05)。综上,饲粮中添加复合益生菌可有效提高蛋雏鸡的生长性能、改善肠道形态,并增强免疫功能。     

生长激素受体激活剂的制备及鉴定

【目的】制备生长激素受体的单克隆抗体,探讨其对生长激素受体的激活作用,为研究生长激素模拟物提供新思路。【方法】以生长激素受体胞外域(GHBP)免疫BALB/c鼠,通过杂交瘤技术制备抗生长激素受体的单克隆抗体,用流式技术筛选抗体,通过流式、激光共聚焦显微镜观察研究该单克隆抗体对生长激素受体的激活作用,然后通过Western-blot等技术手段研究其胞内的信号通路。【结果】通过杂交瘤技术共获得了30个分泌抗生长激素受体的单克隆抗体,经流式分析筛选到具有受体激动剂活性的单克隆抗体(命名为L8)。竞争性结合分析结果表明,L8在受体上的结合表位与生长激素重叠;激光共聚焦观察结果表明,L8不但能结合到细胞表面的生长激素受体,而且还能内化进入胞体。经Western-blot和流式分析表明,L8能与转染GHR基因的CHO-GHR638细胞表面的生长激素受体结合,并启动JAK2-STAT5、ERK1/2信号转导通路,且呈现出剂量依赖性。【结论】生长激素受体抗体可以作为受体的激动剂,其可能是通过诱导受体构象变化的方式激活受体,并启动JAK2-STAT5等信号转导通路。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒多克隆抗体的制备及免疫学活性研究

为了给猪繁殖与呼吸系统综合征的诊断、血清学调查、双抗夹心试剂盒的研制与开发奠定基础,试验将在Marc-145细胞上传代的大量增殖的猪繁殖和呼吸系统综合征病毒纯化后并作为免疫抗原,采用ELISA方法检测多克隆抗体效价。结果表明:免疫获得的多克隆抗体效价为1∶12 800,该多克隆抗体有良好的中和活性。