3～30ku蚯蚓抗菌肽对兔巴氏杆菌病治疗效果研究

为探明3～30ku蚯蚓抗菌肽对兔巴氏杆菌病的治疗效果,试验采用体外抑菌试验及电镜观察,表明3～30ku蚯蚓抗菌肽对巴氏杆菌有明显抑菌效果;动物试验的血液中细菌动态变化、白细胞与炎性因子的测定和临床结果显示,蚯蚓抗菌肽对兔巴氏杆菌病的防治效果明显;高剂量组治愈率高达100%,中剂量组次之,而低剂量组则效果不明显。     

革胡子鲶体表粘液抗菌肽的分离与纯化及抑菌活性研究

[目的]分离纯化革胡子鲶体表粘液抗菌肽,并分析其抑菌活性。[方法]通过硫酸铵沉淀、Sephadex G-50凝胶层析,对高密度养殖的革胡子鲶体表粘液中的抗菌肽进行了初步的分离及纯化,并分析其抑菌活性。[结果]经Sephadex G-50凝胶层析分离得到2个洗脱峰,经检测这2个洗脱峰对迟缓爱德华氏菌抑制作用最强,对嗜水气单胞菌抑制作用次之,对大肠杆菌的抑制作用最弱;对同种菌而言,洗脱峰2的抑菌效果强于洗脱峰1。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,洗脱峰1显示3条蛋白主带,并以9.5kD的蛋白含量最高,而洗脱峰2中所含蛋白的分子量应小于4.1kD。[结论]为探讨高密度养殖条件下革胡子鲶的抗病机理奠定了基础,同时有望为研制和开发新型的水产饲料添加剂和抑菌药物奠定基础。     

鬼针草抑菌物质提取及抑菌活性研究

采用正交试验法优化鬼针草抑菌活性成分的提取条件并研究其抑菌活性.结果表明,抑菌活性成分提取的最佳条件:95%乙醇在70℃下提取1次(2 h).鬼针草醇提物抑菌谱较宽,对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、水稻纹枯和荔枝疫霉的抑制效果较好,对大肠杆菌、稻瘟菌无抑制效果.对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的MIC分别为12.5、6.25 mg·m L-1,对水稻纹枯、荔枝疫霉的抑菌率为60.4%、31.6%.鬼针草醇提物的抑菌活性具有较好的热稳定性,对紫外光照射稳定,p H 4-8时抑菌效果稳定.     

苗药吊石苣苔的抑菌活性研究

[目的]研究苗药吊石苣苔的抑菌活性.[方法]采用体外微生物敏感试验,测定吊石苣苔不同溶剂提取物的体外抑菌活性.[结果]正丁醇提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌均有抑制效果,其中对大肠杆菌的抑制活性显著,其抑菌圈直径、最低抑菌浓度(MIC)分别为10.39 mm和3.2 mg/ml;乙酸乙酯提取物对受试细菌均具有抑菌效果,特别对金黄色葡萄球菌的抑制活性显著,其抑菌圈直径、最低抑菌浓度(MIC)分别为12.31 mm和0.8 mg/ml;而石油醚提取物仅对金黄色葡萄球菌有较弱抑制作用;水浸提物除对大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌有抑制作用外,对其他菌株也无抑制作用.[结论]吊石苣苔具有较强的抑菌作用,其体外抑菌活性部分主要分布在正丁醇、乙酸乙酯相.     

鸭β-防御素2基因的克隆、表达和表达产物的生物学特性分析

 【目的】从鸭组织中克隆鸭β-防御素（AvBD）2基因,在大肠杆菌中高效表达,检测重组鸭AvBD2蛋白的生物学特性。【方法】应用RT-PCR技术从鸭胰腺组织中扩增鸭AvBD2基因,根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素-2的氨基酸序列构建系统进化树,将该基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,对该重组蛋白进行纯化,测定体外抗菌活性与理化特性。【结果】鸭胰腺组织中克隆出鸭AvBD2基因的cDNA大小为195 bp,编码64个氨基酸。同源性分析表明,鸭AvBD2与其它物种AvBD2同源性较高。凝胶电泳结果显示重组鸭AvBD2蛋白在原核高效表达（分子量约为32 kD）,对多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌有较高抗菌活性,对大肠杆菌与猪霍乱沙门氏菌的抗菌活性较弱。重组鸭AvBD2蛋白对上述细菌的最小抑菌浓度为15.25～125 μg?ml-1,对猪霍乱沙门氏菌最小抑菌浓度大于400 μg?ml-1。重组鸭AvBD2蛋白在-20～100℃或pH 3～12条件下处理30 min后仍有抗金黄色葡萄球菌作用。【结论】克隆并表达了鸭AvBD2基因,表达产物具有抗菌活性,对温度和酸碱度有较高的稳定性。     

牛乳酪蛋白酶解物的分离纯化及抗菌肽乳基料的制备研究

【目的】分离纯化牛乳酪蛋白酶解物,检测酶解物及其分离组分的抑菌活性,并制备抗菌肽乳基料。【方法】从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶及木瓜蛋白酶中筛选一种蛋白酶水解牛乳酪蛋白,将其酶解产物经大孔吸附树脂和凝胶过滤色谱分离、纯化后,以对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径、最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)为指标,分析酶解物和分离组分的抑菌活性。【结果】(1)木瓜蛋白酶水解牛乳酪蛋白4.5h,其酶解物对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均有较好的抑制作用。(2)大孔吸附树脂将牛乳酪蛋白酶解物分离成4个组分,其中以体积分数75%乙醇洗脱组分的抑菌作用较强。(3)凝胶过滤色谱将体积分数75%乙醇洗脱组分分离成4个色谱峰,其中A峰对大肠杆菌和沙门氏菌抑制作用较强,B峰对金黄色葡萄球菌抑制作用较强,A峰和B峰经冷冻干燥后成功制备了2种抗菌肽乳基料。【结论】牛乳酪蛋白酶解物经大孔吸附树脂和凝胶过滤色谱分离、纯化后,其分离组分的抑菌活性逐步增强,能够用于抗菌肽乳基料的制备。     

中药石苦秦散及其有效成分对水禽源细菌的体外抑菌效果

为研究中药复方制剂石苦秦散及其主要活性成分单体对水禽源多重耐药菌株的体外抑菌效果,采用K-B法对试验菌株进行耐药性检测,并采用微量肉汤二倍稀释法和琼脂平板培养计数法研究石苦秦散及其6种主要活性成分单体对鸭疫里氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌5种细菌的体外抑菌作用和杀菌作用。结果显示,90%的分离株为多重耐药菌株,肠杆菌属的大肠杆菌和沙门氏菌分离株耐药性最强,耐药种数均高于8种。石苦秦散对5种细菌的最小抑菌浓度(MIC)介于1.95～62.50 g/L,最小杀菌浓度(MBC)介于1.95～125.00 g/L;其中,对鸭疫里氏杆菌和多杀性巴氏杆菌的MIC较低,介于1.95～15.63 g/L。6种中药单体中,抑菌能力最强的为秦皮乙素,其次为苦参碱、没食子酸;6种中药单体杀菌效果存在较大差异,当质量浓度达到31.25 g/L时,没食子酸能杀死所有供试菌株,整体杀菌效果优于其他5种单体;6种中药单体对鸭疫里氏杆菌的MIC和MBC均小于其他菌株。由此可见,石苦秦散对供试的5种细菌均有抑菌作用和杀菌作用,其中对鸭疫里氏杆菌和多杀性巴氏杆菌的效果最好;6种中药单体对鸭疫里氏杆菌的抑菌效果和杀菌效果均优于其他菌种。     

香菇多糖对鸡常见病原菌的体外抑菌活性

通过纸片法进行药敏试验测定香菇多糖对大肠杆菌、鸡白痢沙门氏杆菌、金黄色葡萄球菌、禽多杀性巴氏杆菌4种鸡常见病原菌的体外抑菌作用及体外最小抑菌浓度,结果表明,香菇多糖对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及巴氏杆菌均有不同程度的抑制作用,对大肠杆菌的抑菌效果最强,对葡萄球菌效果最弱;对同一细菌而言,香菇多糖对这4种病原菌的抗菌作用呈现剂量依赖性,剂量越大效果越强;香菇多糖对这4种病原菌的体外最小抑菌浓度是12.5～25 mg/L.     

大蒜内生菌抑菌蛋白提取研究

本研究从大蒜中分离纯化内生菌,中提取抗菌蛋白,对其抑菌活性进行检测,果发现抗菌蛋白对金黄色葡萄球菌抑菌效果最强,次为枯草芽孢杆菌,大肠杆菌的抑菌效果相对较弱.     

N-(卤代芳酰)-亚肼基二噻烷的合成及抑菌活性

以CS2,NH2NH2·H2O,BrCH2CH2Br为原料,合成中间体1,3-二硫杂环戊烷,将其与卤代苯氧乙酸缩合得到4个N-(卤代芳酰)-亚肼基-1,3-二硫杂环戊烷类化合物.所有目标物的结构都经1H NMR,MS和IR证实.对4个化合物进行体外抑菌活性测试,发现都有抑菌作用,其中化合物2-(对溴苯氧乙酰亚肼基)-1,3-二硫杂环戊烷(3d)的杀菌能力最强,在0.25 mg/mL的浓度下对大肠杆菌,枯草芽孢杆菌,沙门氏杆菌,多杀性巴氏杆菌,变形杆菌,蜡样芽孢杆菌,金黄色葡萄球菌均有抑菌活性.     

银杏叶提取物体外抑菌效果的比较

采用超声波细胞粉碎、75%乙醇65℃恒温水浴浸提法制备银杏叶提取物(GBE),选用抗菌药物与GBE对畜禽常见致病菌进行抑菌对比试验.结果表明,金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)对GBE表现为高敏,大肠杆菌(Escherichia coli)和多杀性巴氏杆菌(Pasteurella.multocida)对GBE表现为中敏.GBE对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和多杀性巴氏杆菌最低抑菌浓度分别为0.025、0.025、0.050 g·mL-1.对大肠杆菌的抑菌效果优于庆大霉素、恩诺沙星、磺胺嘧啶、泰乐菌素,对多杀性巴氏杆菌的抑菌效果优于环丙沙星、庆大霉素、磺胺嘧啶、泰乐菌素,但对两种杆菌的抑菌效果均不及链霉素和卡那霉素;对金黄色葡萄球菌的抑菌效果优于卡那霉素,但不及磺胺嘧啶等抗菌药物.     

中华蜜蜂Apidaecin的重组表达及其抗菌活性

【目的】研究中华蜜蜂（Apis cerana cerana）抗菌肽Apidaecin在枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）中的重组表达,并验证纯化后的重组抗菌肽Apidaecin在体内和体外是否具有抗菌活性,为开发新型、安全具有抗菌和免疫调节功能的抗菌肽制剂提供理论依据。【方法】以意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica）Apidaecin为模板,克隆出中华蜜蜂抗菌肽Apidaecin,成功构建his-pHT43/Apidaecin表达载体,并参照MoBiTec所提供的制备方法成功制得枯草芽孢杆菌感受态细胞,现配现用,以保证其活性并得以在枯草芽孢杆菌表达系统中重组表达。使用His标签蛋白纯化试剂盒（可溶性蛋白）进行表达蛋白的分离纯化,使用Easy II Protein Quantitative Kit（BCA）试剂盒测定浓度。纯化得到的重组抗菌肽Apidaecin作用于大肠杆菌K88,在体外进行抑菌圈试验和最小浓度抑菌法测定;在体内,以小鼠为试验动物模型,试验组小鼠腹腔注射重组抗菌肽Apidaecin,阴性对照组注射相同体积的生理盐水,阳性对照组注射相同体积的头孢霉素,然后人为感染大肠杆菌K88,感染24 h后对小鼠进行解剖,取得肠道样品和血液样品,并从肠道屏障和免疫功能两个方面探讨重组抗菌肽Apidaecin对感染大肠杆菌K88小鼠的保护作用。使用ELISA试剂盒对染菌小鼠血清免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）与肠道sIgA水平进行测定,采用qRT-PCR法对小鼠肠道紧密连接蛋白基因（claudin-1、ZO-2）以及小鼠肠道细胞因子（促炎因子TNF-α、IFN-γ、IL6和抑炎因子IL10）的转录水平进行测定。【结果】克隆得到的中华蜜蜂Apidaecin含有183 bp的碱基,编码60个氨基酸,包含Apidaecin的信号肽序列、一个基础的RR二肽以及抗菌肽Apidaecin的氨基酸序列（内含高度保守的8个氨基酸序列）,编码的蛋白质命名为AccApidaecin,其分子量为15.6 kD,等电点为5.33。在IPTG终浓度为3 mmol·L ^-1,诱导温度为30℃,诱导表达12 h后,可从1 L表达上清中纯化得到约20 mg抗菌肽。药敏试验显示,重组抗菌肽Apidaecin在体外与阴性对照相比有明显抑菌圈出现,且测得的最小抑菌浓度为10 mg·L ^-1;在小鼠体内,腹腔注射重组抗菌肽Apidaecin的染菌试验组与注射生理盐水的染菌试验组相比免疫球蛋白含量差异显著(P<0.05),说明腹腔注射重组抗菌肽Apidaecin能够有效缓解由大肠杆菌K88引起的小鼠免疫球蛋白含量的增加;同时,小鼠肠道相关蛋白的基因表达量也差异显著(P<0.05),说明重组抗菌肽Apidaecin能够有效保护被大肠杆菌K88侵染的小鼠肠道。【结论】在枯草芽孢杆菌中能够成功重组表达中华蜜蜂抗菌肽Apidaecin,并且纯化后的中华蜜蜂抗菌肽Apidaecin在体外对大肠杆菌K88有良好的抗菌效果;经腹腔注射进入小鼠体内,能够提高小鼠的免疫机能,有效抵抗大肠杆菌K88对小鼠的侵染。     

奶牛中性粒细胞抗菌肽的提取及其对大肠杆菌的抑菌效果

[目的]从奶牛血液中性粒细胞中提取、分离抗菌肽,并对大肠杆菌进行初步抑菌试验。[方法]用5%乙酸提取奶牛血液中性粒细胞可溶性成分,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离奶牛血液中性粒细胞抗菌肽成分,回收抗菌肽各组分并对大肠杆菌进行抑菌试验。[结论]奶牛中性粒细胞可分离出2种抗菌肽蛋白,抗菌肽成分对大肠杆菌存在抑菌效果,其抑菌圈直径为:抗菌肽A为(16±2.6)mm,抗菌肽B为(12±2.8)mm。[结论]该研究为控制奶牛乳房炎的感染开辟了一条新途径。     

复方环丙沙星注射液防治鸡霍乱的试验

对自制的复方环丙沙星注射液进行了药敏试验及防治鸡霍乱疗效试验 .体外抑菌试验结果表明 ,复方环丙沙星注射液对大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌、金色葡萄球菌均有很强的抑制作用 ,其抑菌直径分别为 (33.5 0±2 .14) ,(32 .2 0± 1.0 8) ,(30 .40± 2 .35 ) ,(2 8.80± 2 .13) mm,其抑菌效果与环丙沙星的抑菌效果比较 ,差异不显著 .防治鸡霍乱试验结果表明 ,复方环丙沙星注射液对鸡巴氏杆菌引起的鸡霍乱疗效优于环丙沙星注射液     

产Zwittermicin A的苏云金芽孢杆菌菌株的筛选及抗性基因zmaR的克隆与表达

 通过PCR方法筛选160株苏云金芽孢杆菌，其中94株含有zmaR基因。测定了含zmaR基因的菌株培养物上清液对草生欧文氏杆菌（Erwinia herbicola）的抑菌活性，结果表明有67株菌有抑菌活性，其中21株抑菌活性较高。经鉴定，抑菌活性较高的G03菌株含有cry1Ac、cry1Aa、cry1Ca和cry2Ab等高毒力杀虫基因，并从G03中克隆了zmaR全长基因，完成了序列测定。该基因编码区为1 125 bp，由核苷酸序列推导的氨基酸残基组成为375个，分子量为43.5 kD，等电点pI4.945。通过载体pET-21b将zmaR基因导入大肠杆菌BL21，可正常表达43.5 kD蛋白，并使宿主菌产生对Zwittermicin A的抗性。     

无花果叶中提取物的抑菌活性研究

采用酸碱法对无花果叶中有效成分进行提取分离,以金黄葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、曲霉、根霉5种菌为供试菌种,对其有效成分的抑菌活性进行了测定。结果表明:无花果叶提取物对5种试验菌均具有一定的抑菌活性,且抑菌作用随着浓度的增加而增强,对根霉抑菌效果最强,其次为大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、曲霉,对大肠杆菌的抑菌效果最弱。     

枯草芽孢杆菌DZSY21抗菌肽的提取及其应用

为了提取枯草芽孢杆菌抗菌肽以探索其对食品的防腐效果,选用枯草芽孢杆菌DZSY21、解淀粉芽孢杆菌FZB42和枯草芽孢杆菌OKB105 菌种发酵,然后将这3个菌种的发酵上清液分别与丙酮按1:2的体积比混合,旋转蒸发浓缩得到3种菌的抗菌肽粗提物。对抗菌肽的热稳定性试验可知3种菌的抗菌肽经100 ℃加热30 min后抑菌效果均有小幅度降低,但抑菌活性仍较强。抗菌肽蛋白酶稳定性试验结果显示,3种菌的抗菌肽对胰蛋白酶和木瓜蛋白酶都很敏感;应用性试验中采用牛奶、苹果、肉等作为食品模型,结果显示经枯草芽孢杆菌DZSY21抗菌肽处理后的试验组品相均明显好于对照组。表明枯草芽孢杆菌DZSY21抗菌肽具有较好的防腐效果。     

具抑菌活性乳酸菌筛选及抑菌活性物质分析

以大肠杆菌O157∶H7为指示菌,采用spot-on-lawn法从食源性乳酸菌菌种库中筛选获得2株高抑菌活性乳酸菌,基于16S rRNA基因序列分析,分别鉴定为戊糖片球菌和发酵乳杆菌。利用改良牛津杯法测定2株乳酸菌发酵浓缩液对常见食源性病原菌的抑菌谱,并分析蛋白酶K、pH值、温度对抑菌物质活性的影响,结果发现2菌株均能显著抑制大肠杆菌和李斯特菌,其中戊糖片球菌发酵液具有更明显广谱抑菌效果;发酵液抑菌活性均受pH值影响,戊糖片球菌发酵液对蛋白酶、热敏感,发酵乳杆菌发酵液对蛋白酶、热不敏感。研究结果表明,戊糖片球菌发酵液抑菌活性物质有多肽(蛋白)和有机酸,发酵乳杆菌来源的抑菌物质化学成分是一些具有热稳定性的有机酸。该研究获得乳酸菌可以用于食品发酵和防腐领域,且为抑菌物质分离、鉴定和抑菌机制研究奠定基础。     

黄粉虫抗菌肽的生物学性质及初步分离纯化

［目的］探索黄粉虫抗菌肽的生物学性质。［方法］通过菌液注射对黄粉虫幼虫进行抗菌肽的诱导,对其热敏感性、反复冻融的稳定性、抑菌活性的适宜pH值及部分抑菌谱进行测定,并对黄粉虫血淋巴抗菌肽进行了初步的分离纯化。［结果］黄粉虫抗菌肽热稳定性好,反复冻融对其活性影响不大,显示出一定的抗酸碱性能,在pH为5时抑菌效果最佳,对测试的6种动物病原细菌均有不同程度的抑制作用,特别是对猪致病性大肠杆菌和猪链球菌,具有较强的抑菌活性。经SephadexG-25凝胶过滤柱层析分离得到3个活性峰,表明黄粉幼虫血淋巴中有多个抗菌活性组分。［结论］该研究为黄粉虫抗菌肽的利用奠定了理论基础。     

柞蚕抗菌肽Moricin的抑菌活性研究

本研究在对柞蚕抗菌肽Moricin基因成功进行克隆及毕赤酵母表达的基础上,对其生物活性进行了研究。结果表明,抗菌肽Moricin对大肠杆菌、肠炎沙门氏菌、副猪嗜血杆菌、猪链球菌和金黄色葡萄球菌临床分离菌株的抑菌圈直径为12~21 mm,表明Moricin对这些菌株均具有较强的抑菌活性,对临床耐药菌株的抑菌作用尤其明显。Moricin对上述菌株的最低抑菌浓度为3.9~15.6μg/m L。Moricin对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的广谱抑菌活性使其在畜禽疫病防治和生产中具有潜在的重要价值。