某规模化养猪场猪瘟、蓝耳病及伪狂犬抗体检测与分析

应用IDEXX酶联免疫分析(ELISA)试剂盒,分别对某规模化养猪场送检的100份血清进行猪瘟病毒抗体、猪蓝耳病病毒抗体、猪伪狂犬病毒gB抗体检测。结果显示,上述3种试剂盒检测,阳性率分别为79.0%、91.0%、83.0%。据此对该猪场免疫状况进行了分析。     

猪伪狂犬病病毒gE蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立

以原核表达的猪伪狂犬病毒gE蛋白为包被抗原,建立间接ELISA方法并进行相应优化,研制出了猪伪狂犬病毒间接ELISA抗体检测试剂盒,并与国内市场标杆产品进行比较,发现阳性符合率为88.03%,阴性符合率为91.47%,总体符合率达到89.84%。同时,该试剂盒批间、批内变异系数均小于10%,具有较好的重复性。该检测试剂盒的研制,可为猪场猪伪狂犬病毒野毒感染的检测提供技术支撑。     

猪伪狂犬病病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体同步检测的液相芯片技术

为了建立猪伪狂犬病毒抗体和猪繁殖与呼吸障碍症病毒抗体的同步检测技术,通过蛋白抗原偶联微球,建立单重和双重液相芯片检测方法,并对蛋白抗原偶联微球量进行优化,验证该方法的特异性,同时用此方法与ELISA试剂盒血清检测方法进行灵敏度比较。结果证明,猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白和猪伪狂犬病毒GE蛋白的抗原最佳偶联量分别为每2.5×10~5个微球偶联8μg和2.5μg;特异性试验结果显示,这两个蛋白抗原偶联的微球与猪其他病原的抗体无交叉反应,说明特异性良好;与ELISA方法比较发现,针对同份猪血清样品,液相芯片法的猪伪狂犬病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的最高血清检出稀释倍数比ELISA法分别高66倍和32倍。说明成功建立了一种同步检测猪伪狂犬病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的液相芯片方法。     

云南省某规模化猪场不同日龄猪伪狂犬病病毒抗体的检测

为了评估云南省某猪场猪群的猪伪狂犬病毒野毒感染及免疫状况,试验随机采集该猪场的不同日龄猪的血清80份,采用猪伪狂犬病病毒gE(PRV-gE)抗体检测试剂盒和猪伪狂犬病病毒gB(PRV-gB)抗体检测试剂盒同时进行猪的狂犬病抗体检测,以掌握不同日龄猪伪狂犬病毒野毒的感染情况并制订适合该猪场的猪伪狂犬病免疫程序。结果表明:该场不同日龄猪PRV-gE抗体全部为阴性,无野毒感染; PRV-gB抗体阳性率均为100%,PRV-gB抗体水平相对较稳定。说明该猪场的免疫程序较为合理。     

某规模种猪场猪伪狂犬病的净化与防控

为了检查出北京市郊区某规模种猪场隐性伪狂犬病感染猪并加以淘汰,达到净化猪场的目的,应用伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白抗体ELISA检测试剂盒对不同阶段猪群血清进行抽检。结果表明:该种猪场不同阶段猪均存在PRV gE抗体阳性猪,采取普检种猪并淘汰PRV gE抗体阳性猪、调整免疫程序、抓好综合性防控措施、采用PRV gB蛋白抗体ELISA检测试剂盒检测免疫抗体等方法,使该种猪场猪的伪狂犬病得到了净化。说明用PRV gE蛋白抗体ELISA检测试剂盒对血清样本进行检测,发现并淘汰PRV gE抗体阳性猪、调整免疫程序可以净化猪伪狂犬病。     

江西省部分规模种猪场猪伪狂犬病血清学调查报告

为掌握江西省种猪场猪伪狂犬病病毒的感染状况,对15个已使用猪伪狂犬病毒gE基因缺失疫苗免疫的种猪场l 420份送检血清,采用猪伪狂犬病基因缺失鉴别ELISA方法进行血清学抗体监测,检测出猪伪狂犬病毒gE抗体阳性186份,阳性率为13.1%.结果表明,江西猪群中存在猪伪狂犬病病毒感染,且某些猪场猪伪狂犬病病毒的感染率较高...     

某大型猪场母猪群主要猪病的抗体、抗原检测结果分析报告

利用ELISA方法对牡丹江地区某一大型猪场送检的105份母猪血清样品进行猪瘟、猪蓝耳病、猪伪狂犬病毒的抗体和猪伪狂犬病毒gI基因抗体检测,以及猪瘟病毒病原的检测。通过检测对整个母猪群的状态进行动态的分析,然后对取得的检测结果进行分析,指导生产。     

试剂盒的检测结果比较三种猪伪狂犬病毒gE抗体诊断

本试验选取60份猪血清,分别采用三种商用猪伪狂犬病毒gE抗体诊断试剂盒进行检测,然后对三种检测结果的符合程度进行了分析,比较三种试剂盒之间的一致性。     

猪伪狂犬病血清抗体gB-ELISA检测方法的建立

用纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白为抗原,建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的gB-ELISA方法。最佳反应条件为：抗原包被浓度为3.15μg/mL,待检血清稀释度为1∶40。该方法对猪圆环病毒病、猪瘟、猪细小病毒病、猪繁殖与呼吸综合征（猪蓝耳病）、猪乙型脑炎、猪布氏杆菌病5种疾病阳性血清和SPF猪阴性血清检测呈阴性反应。批间、批内试验变异系数均不超过8%。用该方法与HerdChek ELISA试剂盒同时对119份血清进行了平行检测,其相对敏感性、特异性和符合率分别为：75%、80.7%和79%。试验结果表明：猪伪狂犬病血清抗体gB-ELISA检测方法具有较高的敏感性和特异性,且重复性好,可用于猪伪狂犬病毒血清抗体检测。     

Kappa检验比较2种猪伪狂犬病gE抗体ELISA检测试剂盒

采用2种猪伪狂犬病gE抗体ELISA检测试剂盒分别检测1100份猪血清,应用Kappa检验比较试验数据的一致性。结果显示:2种猪伪狂犬病抗体检测试剂盒都具有很好的重复性,检测定性结果一致性强度为极好,Kappa值=0.929(95%置信区间:0.899~0.959),其符合率达98.2%,说明2种猪伪狂犬病抗体检测试剂盒都适用于PRV gE抗体检测。     

猪伪狂犬病毒野毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

为建立一种敏感、特异、高通量的猪伪狂犬病毒(PRV)野毒抗体血清学检测方法,本研究利用原核表达技术表达了猪伪狂犬病毒gE蛋白,以纯化的重组gE蛋白为包被抗原建立了检测猪伪狂犬病毒野毒抗体的间接ELISA方法。参照已发表的PRV基因组gE基因序列,设计合成1对特异性引物,PCR扩增了长约606 bp的gE基因片段,将目的片段亚克隆至pET30a原核表达载体中,经IPTG诱导重组gE蛋白的表达,重组蛋白纯化后,免疫印迹检测证明具有良好的抗原性和特异性。以纯化蛋白为包被抗原,经间接ELISA反应条件的优化,建立了检测伪狂犬病毒野毒抗体的间接ELISA方法,该方法检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、PRV疫苗毒的阳性血清均为阴性;该方法批内与批间重复性试验的变异系数分别小于5%和10%;该方法与IDEXX gE-ELISA抗体检测试剂盒的符合率为96.2%。本研究建立的gE-ELISA检测方法为PRV野毒抗体检测以及野毒感染的快速诊断与流行病学调查等提供了一种简便、快速、高通量的血清学检测方法。     

猪圆环病毒2型抗体间接ELISA检测方法的建立

为了更加快速灵敏地检测血清中猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)抗体的水平,我们通过优化反应条件建立了快速检测猪圆环病毒2型抗体的间接ELISA方法。结果显示,本研究研制的试剂盒检测3份PCV2抗体阳性血清的阳性滴度为1∶12 800～1∶25 600,而韩国JBT PCV2试剂盒检测的阳性滴度为1∶3200～1∶6400;对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪口蹄疫病毒等10种其他病原体的20份阳性血清的检测结果均为阴性,表明本研究研制的试剂盒具有良好的特异性;批内重复性试验变异系数(C.V%)为2.26%～7.60%,批间重复试验的变异系数(C.V%)为1.67%～6.41%,变异系数均小于10%,呈现良好的可重复性。因此,我们成功建立了敏感性高、特异性强及重复性好的猪圆环病毒2型抗体间接ELISA检测方法。     

云南省临沧地区猪伪狂犬病血清流行病学调查

为了解云南省临沧地区猪伪狂犬病病毒(PRV)的感染情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA),对临沧部分地区规模化猪场和散养户饲养猪的190份血清样品进行了猪伪狂犬病病毒gB抗体检测。结果显示,临沧地区规模化猪场和散养户的猪伪狂犬病毒gB抗体阳性率为73.16%,其中规模化猪场为81.82%,散养户猪群为16%。从检测结果来看,临沧地区存在猪伪狂犬病毒感染,应加大免疫力度。     

沈阳某猪场伪狂犬病流行病学调查及免疫效果评估

采用猪伪狂犬病毒抗体检测试剂盒,对沈阳某使用gE基因缺失疫苗免疫的生猪养殖场进行猪伪狂犬病毒抗体检测,同时使用PCR方法对猪伪狂犬病毒gE基因进行筛查,对该场的疫苗免疫效果及病毒隐性感染情况进行评估。结果表明,该场猪伪狂犬病毒隐性感染率为11.5%;疫苗免疫效果母猪最佳,哺乳仔猪次之,育肥猪再次。建议该场根据试验结果调整免疫程序,并对隐性感染病猪及时进行淘汰、净化。     

广西部分规模种猪场猪伪狂犬病病毒gE抗体调查

为了解广西部分种猪场猪伪狂犬病毒(PRV)的感染情况,2013年1月—2013年12月对18个不同规模种猪场送检的2 793份血清样品,采用法国LSI猪伪狂犬病毒gE基因抗体检测试剂盒进行检测,发现猪伪狂犬病gE抗体阳性138份,总阳性率为4.94%,其中四个猪场检出PRV野毒感染。研究表明,广西部分猪群中存在PRV感染,感染率不一,某些猪场感染率相对较高。     

比较两种ELISA试剂盒在猪伪狂犬病血清抗体检测中的一致性

比较两种ELISA试剂盒检测结果的一致性,为流行病学调查和临床诊断筛选适合的商品化试剂盒。采用来自两个厂家的野毒抗体(gE)和免疫抗体(gB)ELISA检测试剂盒分别检测362份和392份猪血清,应用Kappa检验比较试验数据的一致性。结果显示:两种猪伪狂犬病抗体(g E)检测试剂盒联合检测出95份抗体阳性和256份阴性,符合率97.24%,结果一致性为极强(Kappa值0.932);两种猪伪狂犬病抗体(gB)检测试剂盒联合检测出351份抗体阳性和9份阴性,符合率91.84%,一致性为弱(Kappa值0.347)。以上结果说明,两种猪伪狂犬病抗体(gE)检测试剂盒都适用于PRV gE抗体检测,而两种猪伪狂犬病抗体(gB)检测试剂金差异较大,需慎重选择。     

猪伪狂犬病血清抗体gE-ELISA检测方法的建立

以纯化的猪伪狂犬病病毒gE蛋白为抗原建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的间接gE-ELISA方法。最佳反应条件为，抗原包被浓度为1．7μg／mL，待检测血清1：40稀释。与伪狂犬病阳性血清反应为阳性，与猪瘟、猪细小病毒病、猪繁殖与呼吸综合征（猪蓝耳病）、猪乙型脑炎、猪布氏杆菌病5种疾病阳性血清和猪伪狂犬病gE缺失疫苗接种的猪免疫血清及SPF猪阴性血清均无交叉反应。批间、批内试验变异系数分别不超过5％和9％。用该方法与Ingezim ELISA试剂盒和HerdChek ELISA试剂盒同时对172份血清进行了平行检测，总符合率分别达93．6％和83．7％。试验结果表明：猪伪狂犬病血清抗体间接gE-ELISA检测方法具有较高的敏感性和特异性，且重复性好，可用于猪伪狂犬病野毒感染猪的血清抗体检测。     

广西猪伪狂犬病毒感染状况调查报告

为了解广西猪伪狂犬病毒的感染状况,应用PCR技术对来自广西46个种猪场的1940份公猪精液进行了猪伪狂犬病毒(PRV)的检测,阳性率为0;同时对广西25个已使用猪伪狂犬病病毒gE基因缺失疫苗猪场的1455份送检血清,采用了猪伪狂犬病基因缺失鉴别ELISA方法进行了血清学抗体监测,结果检出猪伪狂犬gE抗体阳性11份,阳性率为0.76%。结果表明,广西猪群中存在猪伪狂犬病野毒感染,但感染率较低。     

某规模化猪场猪瘟、蓝耳病及伪狂犬病抗体检测与分析

为应用酶联免疫分析(ELISA)试剂盒,分别对某规模化猪场送检的70份血清进行猪瘟病毒抗体、猪蓝耳病病毒抗体、猪伪狂犬病病毒g B抗体检测和猪伪狂犬病病毒g E抗体检测。结果显示,上述4种试剂盒检测,阳性率分别为72.9%、90%、58.6%和1.4%。据此对该猪场免疫状况进行了分析。     

猪血清与口腔液中猪瘟、O型口蹄疫、伪狂犬病毒疫苗免疫抗体检测结果的相关性研究

为了探究猪血清与口腔液中免疫抗体含量的相关性,采集32头育肥猪的口腔液和血清样品,采用检测试剂盒分别检测两种体液中猪瘟病毒、O型口蹄疫病毒和猪伪狂犬病毒的抗体水平,并分析两种体液中抗体含量的关系。结果表明:口腔液与血清中猪瘟病毒免疫抗体含量差异显著(P0.05),且无明显的相关性;口腔液与血清中O型口蹄疫病毒抗体含量之间有相关性,存在显著差异(P0.05);口腔液不稀释组与血清2倍稀释组中猪伪狂犬病毒抗体含量之间有相关性,存在显著差异(P0.05)。说明目前还不能通过直接检测口腔液中抗体的方法来代替血清抗体的评估和检测,口腔液在兽医检测中的运用还有许多问题。