猪流行性腹泻病毒疫苗株与野毒株PCR-HRM鉴别检测方法的建立

基于新型的PCR产物分析技术-高分辨率熔解曲线(HRM),大量分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)全基因序列的特点,建立鉴别PEDV CV777疫苗株与野毒株的PCR-HRM分析方法。在ORF1保守区域设计区分引物,同时用普通的RT-PCR方法进行对比。检测19份临床样品中,PCR-HRM方法检测均为阳性且鉴定为野毒株,普通RTPCR之后凝胶电泳分析检测18份阳性,为野毒株。结果表明,PCR-HRM方法具有特异性好,灵敏度高,PCR扩增之后产物无需开盖分析,极大地避免了污染问题,是一种新型的鉴别检测方法。     

猪伪狂犬病病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体同步检测的液相芯片技术

为了建立猪伪狂犬病毒抗体和猪繁殖与呼吸障碍症病毒抗体的同步检测技术,通过蛋白抗原偶联微球,建立单重和双重液相芯片检测方法,并对蛋白抗原偶联微球量进行优化,验证该方法的特异性,同时用此方法与ELISA试剂盒血清检测方法进行灵敏度比较。结果证明,猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白和猪伪狂犬病毒GE蛋白的抗原最佳偶联量分别为每2.5×10~5个微球偶联8μg和2.5μg;特异性试验结果显示,这两个蛋白抗原偶联的微球与猪其他病原的抗体无交叉反应,说明特异性良好;与ELISA方法比较发现,针对同份猪血清样品,液相芯片法的猪伪狂犬病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的最高血清检出稀释倍数比ELISA法分别高66倍和32倍。说明成功建立了一种同步检测猪伪狂犬病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的液相芯片方法。     

猪流行性腹泻病毒经典株与变异株高分辨率熔解曲线方法的建立

为了建立鉴别检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)经典株与变异株的高分辨率溶解曲线方法,基于PEDV经典株与变异株在S基因上序列的差异设计1对PCR引物用于RT-PCR扩增,扩增产物通过高分辨率熔解曲线(HRM)分析,建立鉴别PEDV经典株与变异株的PCR-HRM分析方法。通过此方法检测了10份临床样品,PCR-HRM结果表明,4份为PEDV经典毒株,6份为PEDV变异毒株。该方法特异性好,灵敏度高,PCR后无需开盖分析,避免了污染问题,是一种新型的鉴别检测方法。