鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及其二价灭活疫苗的研制

从云南昆明、山东青岛死亡率高的鸭场的病死鸭中各分离到一株细菌,分别命名为YB080510株和YB080512株.细菌鉴定和血清定型结果表明:YB080510株、YB080512株分别为血清Ⅰ型和血清Ⅱ型鸭疫里默氏杆菌,为国内目前主要流行型菌株,与其他鸭疫里默氏杆菌流行株的同源性为99.2％ ～ 100％;分离菌的致病性试验结果表明:两株鸭疫里默氏杆菌均为强致病菌,活菌量为1×109 CFU的YB080510株、2×108 CFU的YB080512株均可使1月龄健康樱桃谷鸭全部致死.以此YB080510株、YB080512株鸭疫里默氏杆菌制备二价灭活疫苗,每型菌含量为9×109CFU/mL,将此疫苗用5日龄樱桃谷鸭分别进行安全性和效力试验,结果显示疫苗安全、有效,攻毒保护率可达90％ ～ 100％(9/10 ～ 10/10).     

鹅源鸭疫里默氏杆菌的分离和鉴定

为研究鹅源鸭疫里默氏杆菌的生化特性、药敏情况、血清型和致病性,从扬州郊区发病鹅场分离到1株细菌,经分离培养、染色镜检、生化特性鉴定、玻片凝集试验,确定为Ⅱ型鸭疫里默氏杆菌。对病料进行病毒分离试验,经过血凝试验和琼脂扩散试验,没有发现鹅新城疫病毒、禽流感病毒和小鹅瘟病毒。动物致病性试验结果表明,鸭疫里默氏杆菌分离菌株可以通过静脉注射、皮下注射和滴鼻3种途径感染鹅,出现100%的死亡率,说明分离株对扬州鹅具有很强的致病性,同时提示在鹅的免疫计划中也应该充分考虑到鸭疫里默氏杆菌的致病和传播。     

Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌的分离与鉴定

从扬州仪征某樱桃谷肉鸭鸭场病死鸭的肝、脾、脑、心血中分离到9株细菌,经对分离菌进行染色、形态观察、生化鉴定及凝集试验,其中5株鉴定为Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌（Rimerella anatipestifer,RA）。经动物回归试验,表明该菌对雏鸭有较强的致病力。     

鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定与生物学特性研究

为了解鸭疫里默氏杆菌的流行情况和药物敏感性,本研究对广东省、山东省、江苏省等地区疑似鸭疫里默氏杆菌病的病料进行病原分离和鉴定,并测定分离株对抗菌药物的敏感性。结果显示,共鉴定到46株鸭疫里默氏杆菌,其中血清1型、2型、10型和15型菌株依次为9株、25株、1株和1株,未定血清型菌株10株;RA分离株普遍对林可霉素、多粘菌素和诺氟沙星耐药,表明RA分离株对临床常用药出现了不同程度的耐受;易感鸭的动物回归试验能够复制出典型的原始病例,且可从死亡雏鸭中分离到同源菌株。该研究结果为鸭疫里默氏杆菌病疫苗选用和临床用药提供了科学的参考依据。     

江苏安徽两省鸭疫里默氏杆菌病的流行病学调查研究

1996年1月至2001年6月，对江苏、安徽两省86个鸭场的发病鸭从日龄、品种、流行季节、流行菌株的血清型以及血清流行病学等方面进行了鸭疫里默氏杆菌病的调查。结果，在57个鸭场的樱桃谷鸭、番鸭及野鸭体内分离到鸭疫里默氏杆菌92株，而从麻鸭的病料中未分离到该菌；分离到病原的鸭最小为12日龄，最大为41日龄，主要集中在12－30日龄；这些地区鸭疫里默氏杆菌病的流行无明显季节性；这些地区鸭场疫里默氏杆菌流行菌株的血清型至少有5个，其中1、2和10是流行株的主型。     

鸭疫里默氏杆菌贵州分离株的耐药性及致病性分析

从贵州三穗地区某鸭场临床疑似鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)感染的病死鸭体内分离得到6株病原菌,经细菌形态观察、生化试验和PCR鉴定确定为RA。对6株RA分离株的血清型鉴定、耐药性及致病性试验,结果表明:6株分离菌中有4株为血清2型,其余2株血清型未定;所有分离株对大环内酯类和氨基糖苷类药物耐药,而对青霉素类和头孢类药物高度敏感;将血清2型RA菌株以9×107cfu/m L剂量经肌肉注射后可导致雏鸭发病死亡,病死鸭表现典型的鸭疫里默氏杆菌病临床症状。结果表明,贵州三穗地区主要流行血清2型RA,且对多种抗生素呈多重耐药且致病性强,应加强对血清2型RA的监测和防控。     

樱桃谷鸭传染性浆膜炎的病原分离鉴定

从信阳市临床疑似鸭传染性浆膜炎发病樱桃谷鸭中对病原菌进行分离、培养、生化试验和动物试验，鉴定为鸭疫里默氏杆菌。     

一例鸭疫里默氏杆菌的鉴定及耐药性检测

为了检测海南省文昌市某鸭场病鸭致病原及其耐药情况,试验分别采用分离培养、形态观察、生化检测、PCR鉴定和测序等方法对病鸭致病原进行鉴定,并采用药敏试验检测其耐药情况。结果表明:通过分离培养和形态观察确定该菌为革兰氏阴性杆菌;经生化试验初步鉴定出20株疑似鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA),经PCR鉴定及测序其中17株为鸭疫里默氏杆菌;鸭疫里默氏杆菌对环丙沙星、阿莫西林、氟苯尼考、利福平、庆大霉素、头孢哌酮、克林霉素、头孢唑肟敏感,对新霉素和磷霉素耐药。     

宜良商品肉鸭鸭疫里默氏杆菌的初步研究

从宜良等地 198份病、死鸭组织中分离到 5 2株鸭疫里默氏杆菌 (RA)。并进行了生理生化、药敏、血清学、免疫学试验。试验结果表明 :5 2株鸭疫里默氏杆菌 (RA)有 3个优势血清型 ;RA对氨苄青霉素、头孢噻吩、头孢氨苄、左旋氧氟沙星、硫酸安普霉素等药物敏感 ,对链霉素、柱晶白霉素等药物不敏感 ;受试菌株制备的灭活疫苗免疫雏鸭后 ,对同原菌株的攻击显示出良好的免疫保护。     

河北故城地区鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定和血清型分析

对河北省故城地区送检的疑似鸭疫里默氏杆菌感染发病的病鸭进行病原菌的分离鉴定,根据培养特性和生化鉴定结果鉴定出13株鸭疫里默氏杆菌,并对分离菌进行了血清型鉴定和药物敏感试验;经玻片凝集试验和琼脂扩散试验得出血清1型5株,血清2型4株,血清6型1株,血清10型1株,还有2株未定型。试验证明血清1、2型是目前故城地区鸭疫里默氏杆菌的主要流行血清型,分离菌株对雏鸭有很强的致病性且耐药谱较广,但对氧氟沙星、盐酸恩诺沙星和氟苯尼考较为敏感。     

鸭疫里默氏菌的分离鉴定及其对SPF鸭的致病性研究

为研究鸭疫里默氏菌(RA)对SPF鸭的致病性,本实验室从不同省份疑似RA感染鸭场分离到4株细菌,经菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定确定为RA。药敏试验表明这4个分离株对嗯诺沙星、氧氟沙星和先锋霉素V相对敏感,但对卡那霉素和庆大霉素均耐药。外膜蛋白A(OmpA)基因的克隆测序结果显示,4个RA分离株的ompA基因全长均为1 164 bp,编码387个氨基酸;核苷酸同源性为89%～100%。将5×108cfu的HLG1分离株经颈部皮下接种SPF鸭,病死SPF鸭的心、肝、脾、肺、脑和肾具有典型的病变。RA的分离鉴定技术为SPF鸭群RA的检测和监测以及为培育和净化SPF鸭作为RA的致病机理和疫苗研究中的实验动物模型奠定了基础。     

鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

从通辽地区养鸭场病死鸭的脑、肝、脾脏组织和心脏血中分离到4株细菌,经对分离菌进行染色、形态观察及生化鉴定,其中3株鉴定为Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌,1株为Ⅱ型鸭疫里默氏杆菌。经动物回归试验,表明该菌对雏鸭有较强的致病力。对4株鸭疫里默氏杆菌进行了12种常用抗菌药物药敏试验,结果4株鸭疫里默氏杆菌分离株对头孢曲松、头孢唑啉、复方新诺明高度敏感,对强力霉素、新霉素、红霉素中度敏感,对庆大霉素、卡那霉素、四环素、环丙沙星、氨苄青霉素、丁胺卡那等均不同程度地产生耐药性。     

鸭疫里默氏杆菌KYF39＿09285基因缺失株的构建及生物学特性研究

为研究KYF39＿09285基因对鸭疫里默氏杆菌生物学特性及其对雏鸭致病力的影响，试验利用基因同源重组的原理构建KYF39＿09285的基因缺失株RA-YMΔKYF39＿09285，并使用穿梭质粒构建其基因回补菌株，评价其对鸭疫里默氏杆菌生物学特性以及雏鸭致病力的影响。结果显示：与亲本株相比，KYF39＿09285基因缺失株的生长速度、生化特性、对Vero细胞的黏附入侵能力均未发生改变，但缺失株中dnaK表达量降低，对高渗、青霉素、氨苄西林、庆大霉素和链霉素的敏感性增强，对雏鸭的致病力（LD50）降低1.84倍，45℃胁迫下的KYF39＿09285表达量显著降低。研究表明KYF39＿09285与鸭疫里默氏杆菌对高温、高渗和抗生素的耐受性以及致病力有关，结果为深入研究鸭疫里默氏杆菌的致病机制奠定基础。     

血清10型鸭疫里默氏杆菌灭活油乳剂疫苗的研制

鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)感染是主要危害2~8周龄雏鸭的高致病性细菌性传染病。为研制血清10型RA灭活油乳剂疫苗,选取10株血清10型RA分离株进行动物体复壮、分离和鉴定后,分别对部分毒株进行了毒力测定和灭活油乳剂疫苗的研制。结果表明,所有试验用分离株对7日龄雏鸭均具有较强的致病力。分离株YXL1和HXb2的半数致死量分别为2.8×108 cfu和82 cfu,不同菌株之间的毒力差异很大。用研制的灭活油乳剂疫苗对雏鸭进行2次免疫后,免疫鸭可获得高水平的特异性抗体,并可抵抗强毒RA的攻击,以HXb2免疫后的攻毒保护性最好。抗体水平检测和攻毒保护试验结果表明,用血清10型RA分离株HXb2制备的油乳剂灭活疫苗具有良好的免疫保护作用。     

广东地区鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及双重PCR检测方法的建立

对来自广东地区疑似鸭疫里默氏杆菌病的病鸭组织进行了病原菌的分离培养和生化鉴定,确定得到20株鸭疫里默氏杆菌,动物回归试验结果表明,分离的鸭疫里默氏杆菌具有很强的致病性.对这20株鸭疫里默氏杆菌进行的药敏试验表明,分离株已广泛产生耐药性.参照已经发表的2对引物以细菌全菌体为模板建立双重PCR方法,结果均能扩增出2条目的片段,经测序证实为鸭疫里默氏杆菌,而对鸭源大肠杆菌、鸭源禽多杀性巴氏杆菌、鸭源沙门菌和鸭源葡萄球菌的扩增结果均为阴性.说明建立的双重PCR方法能快速、准确的检测出鸭疫里默氏杆菌,并具有高度特异性,可用于鸭疫里默氏杆菌的快速鉴定和快速诊断.     

血清2型鸭疫里默氏杆菌铁载体受体蛋白突变体的构建及生物学特性研究

铁离子是致病菌重要的生长因子,研究表明铁离子摄取系统调控鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)铁离子的代谢,是鸭疫里默氏杆菌重要的致病因子之一。为了研究RA外膜ATP依赖的铁载体受体蛋白(siderophore receptor protein,SRP)在铁离子代谢中的作用,以及SRP与细菌毒力之间的关系,本研究构建了SRP基因的突变株,通过TSB培养基和限铁环境中的生长曲线比较,结果显示突变株在限铁环境中比TSB培养基生长慢约10 h,表明SRP基因是鸭疫里默氏杆菌在体内维持铁离子代谢至关重要的成份。动物试验表明突变菌株比野生型菌株晚24 h开始死亡,说明突变菌株在体内增殖并达到致死数量的速度明显要晚于野生型,从而提示SRP是鸭疫里默氏杆菌重要的毒力因子之一。     

血清4型鸭疫里默氏杆菌在我国的发现及其病原特性研究

本文首次报道了血清4型鸭疫里默氏杆菌在中国的发现。1994年1月至2000年10月，从全国28个省（市、自治区）不同代次（原种、祖代、父母代和商品代）的5－90日龄患有典型鸭疫里默氏杆菌病的病死鸭分离到146株血清4型的鸭疫里默氏杆菌。对其病原学特性进行研究的结果表明，血清4型的鸭疫里默氏杆菌在我国鸭群感染分布的范围极广，分离菌株对雏鸭具有很强的致病性，对小鼠无致病性，各在分离菌株表现出一致的形态特征和非常相似的生理生化特性；各地分离菌株耐药谱很广，但对头孢类药物（如头孢拉啶、头孢克洛等）和利福平却普遍高度敏感。用分离菌株制备的灭活疫苗免疫雏鸭具有良好的免疫原性。     

河南安阳地区鸭疫里默菌病病原的分离与鉴定及流行病学调查

为摸清安阳地区鸭疫里默菌病的危害情况和发生规律,确定当地流行株的血清型、抗药性等特性,对2014年1月至2016年1月文峰、北关等8个县市54个养鸭场117羽鸭疫里默菌病死鸭/同种病鸭收集并剖检,分离得到53株鸭疫里默菌(Riemerella anatipestifer,R.anatipestifer)菌株,血清型均为1型,整体耐药严重,对头孢氨苄、头孢拉定和四环素敏感。RA菌株致病力强,病死率高,与大肠杆菌混合致病常见,致病力和死亡率更高。本调查表明,鸭疫里默菌病是河南省安阳地区鸭禽的重要流行病,积极防治尤为关键。     

血清15型鹅源鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及交叉免疫保护研究

本研究对安徽省某鹅场急性死亡的雏鹅进行了细菌分离鉴定,无菌采集病死鹅肝脏、脑和心包液,经过培养特性观察、染色镜检、生化特性检测以及16S rRNA和血清学检测,鉴定病原菌为血清15型鸭疫里默氏杆菌,命名为LAG1株。该分离菌株对四环素类药物敏感,而对卡那霉素等耐药;对雏鸭的致病性强,半数致死量(LD50)测定为7.75×103CFU/只;交叉免疫保护试验结果显示LAG1灭活油乳剂疫苗对自身菌株攻毒的免疫保护率可达80%以上,对血清10型鸭疫里默氏杆菌HXb2攻毒的保护率可达70%,对血清1型鸭疫里默氏杆菌WJ4和血清2型鸭疫里默氏杆菌Yb2攻毒的保护率低于20%。本研究结果可为安徽省养鹅业鸭疫里默氏杆菌病的防治工作提供参考。     

血清6型鸭疫里默氏杆菌发酵工艺与攻毒模型的建立

本试验对不同地区分离的3株血清6型鸭疫里默氏杆菌,通过摇瓶试验筛选出血清6型鸭疫里默氏杆菌适宜的增菌液体培养基和细菌计数培养基,通过5L发酵罐各菌株生长曲线的对比,筛选出适合工业化发酵的菌株以及发酵工艺参数,通过鸭疫里默氏杆菌疾病模型条件筛选确立了攻毒模型.结果 显示:WF201910株和TA201912株适宜的增菌液...