黄曲霉毒素B1对雏鸡外周血T淋巴细胞亚群及 血清IL–2和IFN–γ的影响

为探明黄曲霉毒素B1(AFB1)对雏鸡细胞免疫功能的影响,将100只1日龄艾维茵健康公雏鸡随机分为4组,分别喂以基础日粮(玉米–豆粕型基础日粮,对照)和AFB1日粮(基础日粮中AFB1的添加量分别为0.15、0.3、0.6 mg/kg,分别记为AFB1Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组),试验期21 d。以流式细胞术检测雏鸡外周血T淋巴细胞亚群变化;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测雏鸡血清IL–2和IFN–γ含量变化。结果显示,与对照组相比,AFB1Ⅱ和AFB1Ⅲ组7、14和21日龄雏鸡外周血CD3+,CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞百分比下降明显(P0.05或P0.01),血清中IL–2和IFN–γ含量降低(P0.05或P0.01),AFB1Ⅰ组雏鸡14日龄的血清IL–2和7日龄的IFN–γ含量降低(P0.05),表明摄食含黄曲霉毒素B1的日粮可导致雏鸡细胞免疫功能下降。     

急性高温对肉鸡生理状态及细胞免疫的影响

选择1日龄AA肉公鸡180羽,随机分为2组,每组6个重复,每个重复15羽.49日龄时,2个处理组肉鸡分别在温度为22℃和35℃的人工气候舱内处理3h,研究急性热应激对肉鸡生理状态及细胞免疫的影响.结果表明:急性高温(3 h)可使肉鸡处于应激状态,出现明显的应激症状;急性热应激可提高肉鸡血浆白介素(IL-2)分泌量,提高ConA(伴刀豆球蛋白)诱导的T淋巴细胞转化率,提高CD4+与CD8+的比值,说明急性热应激可在一定程度上激活肉鸡的细胞免疫机能.     

4种多糖对免疫雏鸡抗体效价和T淋巴细胞的影响

450羽14日龄蛋公鸡随机均分成9组,用鸡新城疫-传染性支气管炎二联（NDV-IBV）弱毒苗首次免疫的同时,8个试验组分别肌肉注射高、低剂量的黄芪多糖、板蓝根多糖、牛膝多糖和山药多糖溶液,对照组注射生理盐水,每天1次,连续3d。28日龄用NDV-IBV灭活油乳苗再次免疫。各组分别于首次免疫后第7、14、21、28、35、42和49天随机抽取8羽翼下静脉采血,分离血清,用微量法测定新城疫血凝抑制（HI）抗体效价;于首次免疫后第10、20、30、40和50天每组随机抽取5羽心脏采血,分离淋巴细胞,分别用MTT法和流式细胞仪双染色法测定淋巴细胞增殖和CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞含量的动态变化。结果表明,4种多糖均能显著提高新城疫HI抗体效价,促进外周血T淋巴细胞增殖,提高CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞含量和CD4^＋／CD8^＋值,低剂量的黄芪多糖和板蓝根多糖的效果最好。     

慢性HCV感染患者外周血淋巴细胞CD8+和CD38+的检测及临床意义

目的通过测定慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染患者外周血淋巴细胞CD8 、CD38 的表达,从而了解感染者机体细胞免疫状态。方法流式细胞术检测44例慢性HCV感染者及正常对照外周血ALT、外周血淋巴细胞CD8 、CD38 细胞的百分率。结果慢性HCV感染者外周血CD8 、CD38 、CD8 CD38 细胞比例均明显高于正常对照组(P<0.01)。慢性丙型肝炎各组之间比较,ALT异常组CD8 、CD38 、CD8 CD38 细胞比例高于ALT正常组(P<0.01)。结论慢性HCV感染患者CD8 、CD38 、CD8 CD38 细胞比例明显升高,表明慢性HCV感染者处于较高的细胞免疫状态,与肝功能损伤有一定的相关性,对指导临床的病情分析和诊断具有参考价值。     

米糠多糖对不同免疫状态雏鸡外周血CD4^＋和CD8^＋ T淋巴细胞亚群的影响

为探讨米糠多糖对不同免疫状态雏鸡免疫功能的调节作用机理,采用流式细胞技术检测了健康雏鸡、环磷酰胺处理雏鸡和人工感染传染性法氏囊病毒雏鸡在服用米糠多糖（剂量150 mg/（kg.d））和不服用米糠多糖情况下,外周血CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞亚群数量的动态变化。结果表明：米糠多糖能够提高健康雏鸡外周血CD4^＋T淋巴细胞比率,对CD8^＋T淋巴细胞作用不明显;能够提高环磷酰胺和传染性法氏囊病毒诱导免疫抑制雏鸡外周血中CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞数量。     

猪繁殖与呼吸障碍综合症疫苗对猪体 细胞免疫效果的研究

为了探讨猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV） CH-1R 株活疫苗对蓝耳病经典毒株JXA1 的保护效果,采用CH-1R 株活疫苗免疫14 日龄PRRSV 阴性仔猪,1 周后 攻毒,对12、21、35、49、63 日龄时的仔猪外周血中淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+的比例和外周血中抗体进行检测。 结果表明院免疫7 d后,CD4+/lym 的比值升高,CD8+/lym 的比值降低,CD4+/CD8+的比例升高;攻毒2 周后,CH-1R 株活 疫苗免疫组仔猪CD4+/lym 和CD8+/lym 的比值均升高,并且CD4+/CD8+的比例也升高,说明CH-1R 株活疫苗对经典 毒株JXA1 可能具有保护效果。     

蒲公英多糖对雏鸡外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的影响

为研究蒲公英多糖对雏鸡免疫功能的调节作用机制,采用流式细胞技术检测了健康雏鸡、环磷酰胺处理雏鸡在服用蒲公英多糖[剂量80 mg/(kg·d)]和不服用蒲公英多糖情况下,外周血CD4<'+>和CD8<'+>T淋巴细胞数量的动态变化.结果发现蒲公英多糖能显著提高健康雏鸡外周血CD4<'+>T淋巴细胞数量(P<0.05),但对CD8<'+>T淋巴细胞数量及CD4<'+>/CD8<'+>T淋巴细胞比值作用不显著(P>0.05);能够提高环磷酰胺诱导免疫抑制雏鸡外周血中CD4<'+>和CD8<'+>T淋巴细胞数量(P<0.05),且对环磷酰胺诱导免疫抑制雏鸡外周血中CD4<'+>/CD8<'+>T淋巴细胞比值降低效果显著(P<0.05).本研究表明蒲公英多糖通过上调雏鸡血液中CD4<'+>T淋巴细胞水平,增强机体对抗原的免疫应答反应,从而增加机体免疫抵抗力,促进动物的生长和发育.     

"增免散"对ND疫苗免疫雏鸡抗体效价和胸腺发育的影响

将300只1日龄雏鸡随机分为空白对照组、中药“增免散”组、环磷酰胺组、环磷酰胺组 左旋咪唑组、环磷酰胺 “增免散”组,雏鸡6日龄时用鸡新城疫(ND)L a Sota疫苗点眼滴鼻,分别于7、14、28、35日龄时测定鸡血液新城疫抗体效价、胸腺器官指数、胸腺组织中CD4 、CD8 T淋巴细胞浓度、胸腺细胞凋亡率,观察胸腺的组织结构变化,探索中药“增免散”的免疫增强机理。结果表明:中药“增免散”不但能增强ND疫苗的免疫效果,促进雏鸡胸腺发育,提高胸腺组织中CD4 /CD8 T淋巴细胞比值,而且对环磷酰胺诱导的免疫抑制、免疫器官损伤和细胞凋亡有一定拮抗作用。     

不同免疫状态对肉仔鸡血液生化指标和细胞免疫应答的影响

 【目的】研究不同免疫状态对肉仔鸡血液生化指标和细胞免疫应答的影响。【方法】选用健康情况良好1日龄AA肉公鸡180只,随机分为4组,每组5个重复,每重复9只。设定不同免疫应激模型,为无免疫组即对照组（no vaccine,NV）,常规免疫组（conventional vaccine,CV）,以及在常规免疫基础上注射细菌脂多糖的免疫亢进组（LPS）和环磷酰胺的免疫抑制组（CYP）。采用 CD3/CD4/CD8 三色流式细胞术、MTT法检测肉鸡免疫状态和非免疫状态下外周血中 T 淋巴细胞及其亚群的变化。【结果】与NV组相比,肉仔鸡的体增重和采食量均显著降低LPS组和CYP组（P＜0.05）,各处理料重比无显著差异（P＞0.05）,NV组与CV 组生产性能指标无显著差异（P＞0.05）,各日龄处理间血清TP、GLU和CHLO含量均无显著差异（P＞0.05）。第21和35天,LPS组和CYP组血清ALB含量显著低于CV组和NV组（P＜0.05）;第21 天,LPS组血清α-AGP和 BUN含量显著低于NV组（P＜0.05）,CPY和LPS均抑制T、B淋巴细胞增殖,LPS组CD4+/CD8+T细胞百分比显著低于NV组（P＜0.05）。【结论】未进行免疫肉鸡可维持机体正常的生长性能和细胞免疫稳态,LPS和CYP的刺激可降低肉鸡采食量和体增重;随日龄增加肉鸡对CYP刺激的耐受性有所上升,LPS刺激可增强肉鸡细胞免疫应答反应。     

金针菇菇脚对肉鸡T、B淋巴细胞免疫功能的影响

为探索不同含量金针菇菇脚(Flammulina velutipes stembase,FVS)添加到肉鸡饲粮中对肉鸡生产性能以及T、B淋巴细胞免疫功能的影响,采用1日龄健康AA肉鸡270只,随机分为5组,每组3个重复,每个重复18只。试验分为:对照组(基础日粮);抗生素组(基础日粮+0.05%黄霉素);低剂量组(基础日粮+2%FVS);中剂量组(基础日粮+4%FVS);高剂量组(基础日粮+6%FVS)。试验为期42d,检测指标为:生产性能,免疫器官指数,外周血T、B淋巴细胞增殖率(MTT法测定),血清细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ含量测定(ELISA法测定),血清免疫球蛋白IG-A、IG-G、IG-M效价测定(ELISA法测定)。结果显示:各剂量FVS均能提高肉鸡饲喂前期平均日增重,平均日采食量,降低料肉比,提高肉鸡成活率;2%FVS组21日龄胸腺指数及42日龄法氏囊指数显著高于对照组(P0.05),4%FVS组胸腺指数显著高于对照组(P0.05),6%FVS组在42日龄胸腺指数及脾脏指数均显著高于对照组(P0.05);在第22~28、29~35、36~42日龄,各剂量FVS组T、B细胞增殖率显著高于对照组(P0.05);在第22~28、36~42日龄,各剂量FVS均可显著提高细胞因子IL-2的含量(P0.05);各剂量FVS能显著提高22~28、36~42日龄肉鸡血清免疫球蛋白IG-A效价(P0.05)以及7~14、22~28日龄IG-G效价(P0.05)。表明日粮中添加FVS可提高肉鸡生产性能、免疫器官指数,增强肉鸡的T、B淋巴细胞免疫功能。     

氢化可的松对小鼠T淋巴细胞增殖的抑制作用

[目的]探讨氢化可的松对小鼠T淋巴细胞增殖功能的影响。[方法]用淋巴细胞分离液无菌制备小鼠脾淋巴细胞,于RPMI1640的完全培养基中加入ConA后进行转化。用流式细胞仪检测T细胞活化分子CD25和CD69及其共表达率。将转化的淋巴细胞分成不加氢化可的松的对照组和加入不同浓度的氢化可的松组,在各时间点取样计数,绘制其生长曲线。[结果]经ConA刺激3 d的T细胞上CD25和CD69分子及其共表达率最高,分别达73.5%、58%和32%。生长曲线显示,各组细胞在加氢化可的松后第2 d达到对数生长期,10-5、10-6、10-7mol/L浓度的氢化可的松对活化小鼠T淋巴细胞增殖都有抑制作用,但各浓度组间无显著差异（P〉0.05）,而与对照组相比有显著差异（P〈0.05）。[结论]在一定的浓度范围内氢化可的松对小鼠T淋巴细胞的增殖具有抑制作用,这为细胞移植免疫耐受的诱导提供了试验依据。     

SLE患者CD4+CD25+调节性T细胞及Foxp3基因表达的研究

目的:研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD 4 CD 25 调节性T细胞及Foxp3基因的表达水平,了解它们在SLE发病机制中的作用。方法:分别收集25例SLE患者(SLE组)及健康人(对照组)外周抗凝静脉血,分离纯化T淋巴细胞。PE标记抗CD 4单抗,F ITC标记的抗CD 25单抗,作双色流式细胞术,分析SLE患者外周血CD 4 CD 25 调节性T细胞百分率,RT-PCR检测T细胞Foxp3 mRNA表达。结果:SLE组外周血CD 4 T、CD 4 CD 25 T细胞百分率及T细胞Foxp3 mRNA水平均低于对照组(P<0.01),并且CD 4 CD 25 T细胞百分率与Foxp3mRNA水平呈依赖关系(P<0.01)。结论:SLE患者外周血存在细胞免疫功能失调,CD 4 CD 25 调节性T细胞数量减少和Foxp3mRNA表达下调可能与SLE的免疫学发病机制有关。     

尼罗罗非鱼♀×萨罗罗非鱼人工 杂交卵子、精子形态观察

采集尼罗罗非鱼意伊萨罗罗非鱼杂交中人工挤压亲鱼腹部获得的卵子、精子。用光学显微镜和解剖镜 对卵子形态进行观察、拍照,比较分析不同成熟阶段卵子形状、卵径、表面色泽及卵黄颗粒积累特征,结果表明,未成 熟卵细胞呈椭圆形,表层布满细长血管;成熟卵细胞呈梨形,卵径0.5耀1.6 mm,外层有透明卵膜,充满金黄色卵黄颗 粒;过成熟卵细胞形状极不规则,卵黄颗粒开始液化。用扫描电镜对精子外形特征进行观察,发现正常精子由头部、 中片及尾部组成,头部呈长锥状,长径1.82（依0.35）滋m,宽径1.41（依0.34）滋m;中片近圆柱形、较短,长径0.74（依0.08） 滋m,宽径0.16（依0.06）滋m;尾部极长,为16.42（依0.35）滋m,单鞭毛结构;同时,还观察到短尾、双头、双尾3 种异常类 型。研究结果可为罗非鱼人工杂交技术改进提供一定基础依据。     

杨树皮类脂对感染鸡传染性贫血病毒鸡外周血T细胞亚群含量的影响

[目的]从细胞免疫学角度探讨杨树皮类脂(PBL)对改善感染鸡传染性贫血病毒(CIAV)鸡的免疫器官的细胞免疫水平的影响。[方法]以人工感染与未感染CIAV的1日龄SPF鸡作为试验模型,分别连续饲喂PBL 7 d,在第7、27、47天采用流式细胞术检测外周血中CD4+和CD8+的含量,并计算CD4+/CD8+。[结果]PBL能够增加健康SPF雏鸡外周血的CD4+T淋巴细胞的数量,提高非特异性细胞免疫功能和体液免疫功能。[结论]杨树皮类脂对CIAV诱导的免疫抑制雏鸡外周血的CD4+和CD8+T细胞水平的降低具有一定抑制作用。     

猪轮状病毒与传染性胃肠炎病毒核酸免疫研究

将昆明鼠随机分为A,B,C,D4组,各组分别采用含有猪轮状病毒(RV)JL94株VP7基因的重组真核表达质粒pcDNA-VP7,含有猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)TH98株N基因的重组真核表达质粒pcDNA-N,pcD-NA-VP7和pcDNA-N、真核表达载体pcDNA3.1(+),肌肉注射3次,每次间隔2周。首次注射前后定期采血,检测血清抗体和外周血淋巴细胞中CD4+,CD8+T细胞数量的变化。A,C组小鼠血清在首免后第14天即可检出针对RVVP7的阳性抗体(P/N≥2.0)。B组小鼠血清在首免后第39天检出针对TGEVN蛋白的阳性抗体(P/N≥2.0)。A,B,C组小鼠在首免后外周血CD4+、CD8+T细胞数量与D组小鼠相比,在不同时间有显著差异(P<0.05),并明显高于D组小鼠。说明猪轮状病毒与传染性胃肠炎病毒核酸免疫后能诱发机体免疫反应。     

猪CD127流式单克隆抗体的研制

[目的]研制出猪CD127(调节因子IL-7受体α链)流式单克隆抗体,为研究分析猪淋巴细胞亚群,尤其是猪Treg细胞亚群提供流式细胞分析抗体,也为进一步探究猪抗病性状与免疫机制间的关系打下基础.[方法]克隆猪CD127基因片段,通过原核载体诱导表达出相应的融合蛋白,以纯化后的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,然后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,综合ELISA和流式细胞仪检测筛选出亚克隆抗体,并采用Western blotting验证所得亚克隆抗体能否与猪淋巴细胞上的CD127特异性结合.[结果]猪CD127基因cDNA全长1999 bp,第49~1428 bp为开放阅读框(ORF),编码459个氨基酸,其中前21位氨基酸为信号肽,成熟肽N端第1~219位氨基酸为胞外蛋白,第220~242位氨基酸为跨膜蛋白,第243~459位氨基酸为胞内蛋白.以pET28a和pET32a原核载体诱导表达CD127胞外片段可获得大小介于34~43 kD的融合蛋白,经Ni亲和层析柱纯化后用于免疫Balb/c小鼠,6只免疫小鼠血清中的多克隆抗体均能对猪淋巴细胞中的CD3阳性细胞(CD3+)进行共标记,其中以M2和M4两只免疫小鼠抗血清对CD3+的共标记效果较优,分群清晰;但流式细胞仪检测发现,仅2.3%的CD3+能与M2混合池培养基上清液中的分泌抗体共标记,而67.0%的CD3+能与M4混合池培养基上清液中的分泌抗体共标记,且分群清晰.从M4混合池中筛选出6株效价稳定的亚克隆细胞株(1E2、1D8、2F3、2F8、3C6和4E1),且以1D8、2F3、2F8和3C6亚克隆抗体标记的CD3+较多,其培养基上清液中的分泌抗体在猪胸腺和肌肉样品中均能检测出大小约50 kD的单一目的条带.[结论]制备获得的猪CD127流式单克隆抗体可与T淋巴细胞表面的IL-7受体特异性结合,同时在流式细胞仪检测过程中可用于猪Treg细胞亚群检测.     

小鼠黑色素瘤功能异常CD8~+T细胞基因调控网络构建与分析

疾病是全球范围内危害畜禽健康的主要问题,解析免疫系统调控相关基因成为当前抗病分子育种的研究热点。为研究小鼠黑色素瘤模型功能异常CD8~+T细胞对免疫抗体处理的应答机制,通过基因调控网络方法筛选功能异常CD8~+T细胞在Ig G和PD1抗体处理的特定基因、转录因子和细胞表面受体。结果发现对照组、PD1抗体与Ig G抗体处理组分别有28、17、33个特定表达基因。与对照组相比,Ig G和PD1处理组有2个转录因子Zfx、Zfhx3关闭表达,PD1处理组细胞表面受体Raet1b表达。Raet1b基因的表达可能使小鼠黑色素瘤功能异常CD8~+T细胞恢复功能,结果为抗病育种的相关基因研究提供理论基础。     

流式细胞术检测拉米夫定对慢性乙型肝炎患者T细胞亚群的影响

目的研究拉米夫定对慢性乙型肝炎（CHB）患者细胞免疫功能的影响.方法采用流式细胞术检测50例CHB患者在服用拉米夫定前后外周血T细胞亚群,同时检测45例健康体检者外周血T细胞亚群作为对照.结果CHB患者在使用拉米夫定后,CD4 T细胞百分比较使用前明显升高（P〈0.05）,CD8 T细胞百分比明显下降（P〈0.05）,CD4/CD8明显升高（P〈0.05）.结论拉米夫定可改善CHB患者的细胞免疫功能.     

中药合剂对雏鸡免疫功能的影响

研究了中药合剂对雏鸡免疫功能及干扰素产生的影响。检测了试验组和对照组28,30,34,41,48,55日龄雏鸡血液T淋巴细胞对丝裂原ConA刺激的反应性;CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群及CD4+/CD8+T淋巴细胞比值;ND抗体效价及胸腺、脾脏和法氏囊指数。结果表明,34~41日龄时中药合剂组雏鸡血液T淋巴细胞对丝裂原ConA刺激的反应性明显高于对照组(P<0.05);CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群无明显变化,30~34日龄时能明显提高CD4+/CD8+淋巴细胞亚群比值(P<0.05);34~41日龄时试验组雏鸡HI抗体效价显著高于对照组(P<0.05);可使胸腺、脾脏和法氏囊指数增加,41日龄时法氏囊指数明显高于对照组(P<0.05);中药合剂对IFN具有明显的诱生作用(P<0.01),与NDV诱生组水平相当;同时可明显促进NDV对IFN的诱生(P<0.01)。结果显示中药合剂具有增强机体免疫功能及诱生IFN的能力,为该中药合剂抗NDV提供了理论依据。