高致病性猪蓝耳病活疫苗免疫效果观察及临床应用探讨

<正>高致病性猪蓝耳病是最近几年严重危害生猪养殖产业安全的主要病毒性传染性疫病,它是由猪繁殖与呼吸道综合症变异毒株引起的一种高度接触性传染性疾病。在曾经发生过高致病性蓝耳病的养殖区域,通过集中免疫蓝耳病活疫苗能够显著提高防疫效果,控制疾病流行,降低死亡率。本次研究在进行大量流行病学调查,临床症状病理学,解剖观察以及实验室诊断的基础上,选择使用蓝耳病经典毒株型(CH-1R)和变异毒株(JXA1-R株)     

不同日龄仔猪外周血T淋巴细胞的检测与分析

为建立健康仔猪外周血淋巴细胞亚群的临床参考范围,试验分析不同生长阶段仔猪的免疫系统功能水平,分别在健康仔猪断奶后第1、7、21和35天采取外周血,分离外周血单个核细胞,采用三色流式细胞术的方法检测各类主要T淋巴细胞亚群所占外周血单个核细胞的比例,及其占CD3~+T淋巴细胞亚群中的比例,计算CD4~+/CD8~+的比值。结果表明,随着日龄的增加公母仔猪CD3~+T淋巴细胞亚群占外周血单个核细胞的比例逐渐升高,分别从(38.00±10.94)%和(38.17±15.39)%上升至(55.43±12.30)%和(51.57±10.60)%。在断奶后1 d和7 d公母仔猪CD3~+T淋巴细胞比例无显著性差异(P0.05),至断奶后21 d母仔猪CD3~+T淋巴细胞比例显著增加(P0.05),公仔猪至35 d时CD3~+T淋巴细胞比例显著增加(P0.05)。随着日龄的增长,公母仔猪CD4~+T淋巴细胞亚群占外周血单个核细胞的比例分别由(10.29±2.71)%和(10.3±2.17)%上升至(22.2±5.87)%和(23.4±6.84)%。公母仔猪CD4~+T淋巴细胞的比例逐渐升高,且各个时间点公母仔猪结果无明显差异(P0.05)。公母仔猪CD8~+T淋巴细胞占外周血单个核细胞的比例在各时间点分别为(23.80±6.67)%、(17.14±10.64)%、(25.46±12.32)%、(33.33±8.93)%和(28.55±6.75)%、(23.62±11.51)%、(37.37±13.18)%、(38.31±15.66)%。随着日龄的增加公母断奶仔猪CD8~+T淋巴细胞呈现先下降后升高的趋势。断奶仔猪各淋巴细胞亚群分布会随着断奶时间的增加而呈现不同的变化,并且存在着性别上的差异。结合两种不同的细胞圈定方法,能够更准确地反映出仔猪体内各淋巴细胞亚群数量和比例的变化。     

吉林地区高致病性PRRSV JL-04/12株的 分离鉴定与全基因组测序

【目的】确定吉林省某疑似高致病性PRRS猪场的病原,研究其基因特性。【方法】采集疑似感染高致病性PRRSV病猪的脏器组织,处理后接种MARC-145细胞,观察细胞病变,分离PRRSV;应用RT-PCR方法检测和确定分离毒株的基因型,采用间接免疫荧光、电镜观察和全基因组测序检测分离的病毒。【结果】分离毒株为北美洲型PRRSV,命名为JL-04/12,其基因组全长为15 320bp(不包括PolyA),可使MARC-145细胞产生典型的细胞病变。序列比对结果表明:JL-04/12株与经典毒株VR-2332和CH-1a的核苷酸同源性分别为89.5%和94.9%;与高致病性毒株JXA1、HUN4的核苷酸同源性为99.1%。分离毒株JL-04/12编码的2个非结构蛋白和GP2～GP4的氨基酸序列与HUN4株同源性较高,在97.2%～99.3%,而JL-04/12编码的GP5的氨基酸序列与JXA1株同源性较高,为98.5%;JL-04/12编码的GP6和N蛋白的氨基酸序列与高致病性PRRSV毒株JXA1和HUN4的同源性均为100%。PRRSV JL-04/12株的Nsp2不连续缺失30个氨基酸,与高致病性PRRSV毒株JXA1和HUN4的同源性最高,均为97.8%,判定该分离株为变异的高致病性PRRSV。【结论】从吉林省分离到1株高致病性PRRSV,说明高致病性PRRS变异病毒在吉林省仍然存在。     

PRRSV JX0708株结构蛋白基因的克隆及其生物信息学分析

根据GenBank中登录的美洲型PRRSV JXA1株基因组序列设计合成了4对引物,应用RT-PCR技术对PRRSV JX0708株结构蛋白基因进行扩增、克隆和测序,将测序结果应用Blast和DNAStar软件进行分析,并与国内外分离株进行核苷酸序列以及推导的氨基酸序列同源性比较.结果表明:PRRSV JX0708株结构蛋白基因长约3 186bp,分为ORF2、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7共6个基因区;与国内分离的高致病性PRRSV美洲型毒株HuN、GD、JXA1、LN和普通毒株CH-1a以及经典毒株VR-2332和疫苗毒株pMLV的核苷酸及其推导的氨基酸同源性分别为88.0%～100.0%和83.5%～100.0%;而与欧洲型经典毒株LV和Euro-1的同源性差异显著,其核苷酸和推导的氨基酸同源性分别为64.0%～69.7%和53.3%～79.9%.遗传进化分析表明,PRRSV JX0708株在基因型上属于美洲型,同时美洲型PRRSV的变异存在某种地域和时间跨度上的相关性,但每个结构蛋白基因的变异并不严格遵从这种规律,而有所差异.     

新鱼腥草素钠增强NDV LaSota疫苗免疫作用研究

用新城疫病毒(NDV) LaSota株弱毒活疫苗接种1日龄非免疫健康肉雏鸡的同时,以新鱼腥草素钠为免疫佐剂按不同剂量颈部皮下注射,以生理盐水为对照;二次免疫后第7、14、21、28天分别测定各组动物的抗NDV血凝抑制抗体和外周血CD4 /CD8 淋巴细胞比值.结果表明: 新鱼腥草素钠对提高鸡体抗NDV血凝抑制抗体效价和外周血CD4 /CD8 淋巴细胞比值都有一定作用,与对照组差异显著(P<0.05),且这种作用与给药剂量有关.另外,新鱼腥草素钠对细胞免疫的影响早于对体液免疫.     

杨树皮类脂对感染鸡传染性贫血病毒鸡外周血T细胞亚群含量的影响

[目的]从细胞免疫学角度探讨杨树皮类脂(PBL)对改善感染鸡传染性贫血病毒(CIAV)鸡的免疫器官的细胞免疫水平的影响。[方法]以人工感染与未感染CIAV的1日龄SPF鸡作为试验模型,分别连续饲喂PBL 7 d,在第7、27、47天采用流式细胞术检测外周血中CD4+和CD8+的含量,并计算CD4+/CD8+。[结果]PBL能够增加健康SPF雏鸡外周血的CD4+T淋巴细胞的数量,提高非特异性细胞免疫功能和体液免疫功能。[结论]杨树皮类脂对CIAV诱导的免疫抑制雏鸡外周血的CD4+和CD8+T细胞水平的降低具有一定抑制作用。     

板蓝根多糖对PRRS弱毒苗免疫猪抗体和T细胞亚群的影响

研究板蓝根多糖对PRRSV弱毒苗免疫抗体和猪外周血T细胞亚群的影响。35日龄断奶仔猪16只随机分为4组,将多糖分别以高、低两个剂量和猪PRRSV弱毒苗同时注射,于免疫后不同的时间点采血,ELISA方法检测猪PRRSV抗体水平,流式细胞术检测猪外周血中T淋巴细胞亚群的变化。弱毒苗免疫后7d,板蓝根多糖高剂量组即可检测到PRRSV阳性抗体,而其它组在免疫后14d,均可检测到PRRS阳性抗体,板蓝根多糖对PRRS弱毒苗产生抗体的影响是和剂量密切相关的,高剂量能提高抗体水平,低剂量会阻碍PRRSV抗体的产生。板蓝根多糖和PRRS弱毒苗联合使用对猪外周血CD3^＋和CD4^＋细胞数量的影响不显著,在早期可促进猪外周血CD8^＋细胞的增殖。合适剂量的板蓝根多糖可以作为免疫增强剂与PRRSV弱毒苗联合使用。     

公猪精液PRRSV变异株检测及NSP2、ORF5基因序列分析

用荧光RT-PCR方法从某猪场精液中检测到猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)变异株(NSP2 1 594～1 680 bp缺失)核酸阳性.提取1份阳性样品病毒核酸测定和分析其NSP2和OBF5全基因序列,结果表明NSP2基因由950个氨基酸组成,与CH-1a、VR-2332等经典PRRSV相比481位缺失1个氨基酸、532～560位连续缺失29个氨基酸,与JXA1、HUN4等毒株具有相同的缺失特性;ORF5基因第13、151位为具有强毒特性的精氨酸(R),存在4个潜在的糖基化位点,分别位于30～32、35～37、44～46和51～53位氨基酸.遗传进化分析表明,测定序列与JX-A1、HUN4等毒株关系最近,与CH-1a、NVSL等同属一个大分支,而与BJ-4、P129、RespPRRS MLV、VR-2332等处于不同分支.研究证实公猪精液可携带PRRSV变异株,因此猪场(群)在人工授精和引进精液时必须强化检疫和生物安全措施.     

1株NSP2蛋白5个氨基酸缺失的PRRSV遗传进化分析

【目的】研究新疆猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异情况。【方法】提取PRRSV感染病猪肺脏RNA,通过RT-PCR方法对PRRSV NSP2部分基因和ORF5基因进行扩增、克隆和测序,分析其分子变异特征。【结果】成功克隆到1株PRRSV,命名为XJzx1株,其NSP2基因编码蛋白第472~476位存在5个氨基酸的连续缺失,有别于高致病毒株第482、533~561位30个氨基酸的典型缺失,位于经典毒株HB-2(sh)/2002第471~482位12个氨基酸缺失区域内;XJzx1与HK13株NSP2部分基因核苷酸序列相似性最高,为87.5%,系统进化树分析显示,XJzx1株与我国高致病毒株JXA1、HUN4、SX2009等同属一个分支;XJzx1 ORF5基因与我国经典毒株CH-1a、BJ-4、HK6等同属一个分支,其GP5蛋白不存在氨基酸的缺失或插入,而表现为多位点的突变。【结论】PRRSV XJzx1株具有独特的遗传进化特征,其毒性较经典毒株有所加强,推测为新型变异株。     

兔脑炎微孢子虫感染对家兔细胞免疫功能的影响

以临床症状和病理学变化确诊为兔脑炎微孢子虫感染的家兔为研究对象,用流式细胞计数仪检测外周血CD4+、CEB+细胞比例,并与健康家兔进行比较。结果表明兔脑炎微孢子虫病患兔外周血CD4+细胞比例与对照组相比无明显变化,P>0.05;而CD8+细胞比例明显高于对照组,CD4+/CD8+比值则明显低于对照组,P<0.05。提示兔脑炎微孢子虫患兔外周血CD4+/CD8+比值明显下降,机体免疫力减弱,可能是导致兔脑炎微孢子虫入侵机体,引起家兔发病的重要原因。     

土壤镉污染及其生物修复研究进展

随着工农业发展,土壤中镉污染程度日趋严重。镉通过在作物体内富集而进入食物链,对人畜健康构成巨大威胁。文中概述了土壤中镉污染来源、赋存状态及其生物有效性、对人体及生物健康危害等的研究情况,分析了土壤镉污染生物修复的研究动态,并提出了今后的研究方向。     

生物表面活性剂在生物修复石油污染中的应用

本文概述了生物表面活性剂及其结构特征、在生物治理石油污染土壤的生物修复中的研究现状及作用机制,对其发展前景作了展望。     

螯合剂和鼠李糖脂联合淋洗污染土壤中Cd

采用pH为4.31的土壤,制备3种Cd浓度水平的模拟污染土壤,研究了螯合剂和鼠李糖脂对土壤中Cd的淋洗特征,探讨了乙二胺四乙酸二钠(EDTA)和鼠李糖脂联合淋洗土壤中Cd的形态变化。结果表明,在淋洗剂浓度为0.025 mol·L~(-1)、初始pH为7时,EDTA、乙二胺二琥珀酸(EDDS)和柠檬酸(CIT)淋洗分别在220、140、60 min达到平衡,EDTA的淋洗效果最好,其对0.38、0.69、0.93 mg·kg~(-1)Cd污染土壤的最大淋洗率分别达到93.16%、93.62%和94.09%;淋洗过程符合准二级动力学模型,淋洗速率常数表现为0.38 mg·kg~(-1)Cd污染土壤0.69 mg·kg~(-1)Cd污染土壤0.93 mg·kg~(-1)Cd污染土壤。当EDTA和鼠李糖脂(浓度均为0.025 mol·L~(-1))的体积比为1.5∶1时,3种土壤中Cd的淋溶率分别为85.45%、89.25%和93.88%,淋洗平衡时间为50 min。EDTA和鼠李糖脂联用能够有效淋洗污染土壤中的交换态、碳酸盐结合态和有机结合态Cd,可能的作用机制是EDTA的螯合作用和鼠李糖脂的胶束增溶作用产生的协同效应。     

污染疫苗的禽腺病毒分离和鉴定

在用非免疫鸡胚增殖鸭病毒性肝炎病毒(E52株)过程中，发现种毒受到污染。采用聚乙二醇沉淀．Sephadex G100柱层析法纯化污染病毒，在电镜下发现一大小为70～80nm，无囊膜，20面体对称的病毒颗粒。挑选4条随机引物对其进行反转录PCR扩增，共扩增出3条基因片段。序列分析结果表明，与禽腺病毒(鸡胚致死孤儿病毒)基因组部分序列同源性分别高达99．5％、99．6％和99．5％，从而证明禽腺病毒污染了鸭病毒性肝炎病毒鸡胚尿囊液种毒。     

优化成品油管道设计减少混油量

成品油管道设计优化以往大多集中在对管径、壁厚、泵站数、进出站压力等工艺参数的优选,对影响混油量的因素考虑不多.介绍了顺序输送成品油管道产生混油的影响因素,包括:管内流体沿径向流速分布不均匀,管内流体沿径向、轴向的紊流扩散,站场工艺管道的“死区”“盲肠”等部位滞留油品,管道沿线地形起伏,不同油品的密度差,输油生产过程中的...     

香菇中污染真菌的分离与鉴定

从上海及周边地区的香菇子实体和培养料中分离污染真菌,并进行形态学观察和分子生物学鉴定。提取菌株基因组DNA,利用真菌通用引物ITS1和ITS4扩增菌株rDNA ITS区序列,测序后在数据库中进行比对分析,并利用软件:MEGA5构建菌株分子系统发育树。结果表明:香菇栽培到储藏过程中主要污染真菌有木霉属(Trichoderma)、曲霉属(Aspergillus)、附球菌属(Epicoccum)、镰孢属(Fusarium)、青霉属(Penicillium)和节菱孢属(Arthrinium)等。     

显脉旋覆花中重金属及硝酸盐、亚硝酸盐污染的研究

测定了云南显脉旋覆花中重金属、硝酸盐和亚硝酸盐的含量.结果表明:根据食品污染物限量标准GB2762-2005,显脉旋覆花的根除重金属Cr符合标准外,其他重金属元素Cd、Pb、Hg、As含量均超标;茎叶除重金属Cr、Cd符合标准外,Pb、Hg、As含量均超标,有潜在污染风险;而根据药用植物及制剂外经贸绿色行业标准WM/T2-2004,显脉旋覆花的根茎叶中所有重金属元素含量均符合标准,无污染风险;亚硝酸盐含量低于世界卫生组织(WHO)和联合国粮农组织1973年规定的标准值,同时也符合中国制定的无公害蔬菜亚硝酸盐含量的限量标准.根据硝酸盐分级评价标准,显脉旋覆花属于一级蔬菜.     

表面活性剂在污染土壤修复中的应用

污染土壤淋洗修复技术中,淋洗剂的选择是影响这一技术应用的限制因素之一.目前研究的淋洗剂包括表面活性剂、有机或无机酸、螯合剂EDTA等.大量研究表明,表面活性剂能够去除土壤中的污染物,特别是有机污染物,提高污染土壤的修复效果.综述了表面活性剂在污染土壤修复中的应用.土壤有机污染修复中表面活性剂的作用主要体现在增溶洗脱土壤中有机污染物,提高有机物在水中的溶解度和流动性;增强土壤对有机污染物的吸附作用,即增强截留固定作用;改变吸附态或溶解态有机污染物的生物利用性.土壤重金属污染修复中表面活性剂的作用主要体现在离子交换和络合作用.