凡纳滨对虾血细胞蛋白制备及其双向电泳体系的建立

为建立凡纳滨对虾血细胞蛋白质的双向电泳体系,实验将凡纳滨对虾血细胞蛋白质提取后,用双向电泳技术(2-DE)分离蛋白质,分别对蛋白质样品的制备方法、不同pH值范围IPG胶条、上样量等关键因素进行了探索和优化。结果显示,采用裂解液裂解-10%TCA/丙酮沉淀法制备蛋白质样品,使用17 cm pH值5~8的IPG胶条进行第一向等电聚焦电泳,第二向SDS-PAGE电泳采用浓度为12.5%的凝胶进行,上样量为每胶条200μg蛋白,第二向电泳后的凝胶采用硝酸银染色,扫描得到的凡纳滨对虾血细胞蛋白质双向电泳图谱蛋白质分离程度好、蛋白点清晰、分辨率高、横纹少等优点。文章建立并优化了凡纳滨对虾血细胞蛋白质组学的双向电泳技术体系,为进一步开展对虾等甲壳动物的蛋白质组学研究奠定了基础。研究表明,该双向电泳体系适用于凡纳滨对虾血细胞蛋白质的分离,可用于后续凡纳滨对虾血细胞蛋白质组学的研究。     

雏鸡法氏囊蛋白质组学双向电泳技术的建立及其初步分析

为了建立并优化鸡法氏囊蛋白质组学的双向电泳技术体系,以不同日龄雏鸡的法氏囊组织为研究对象,用固相pH梯度胶条进行等电聚焦、SDS-PAGE垂直电泳,采用不同的样品制备方法,对上样量、水化、等电聚焦、胶条平衡和凝胶染色方法等进行一系列优化,并应用PDQuest8.0.1软件对图谱进行初步分析.结果显示法氏囊组织在pH 5～8范围、17 cm的2-DE胶上可以得到很好的分离,胶体考染后经PDQuest软件分析,在正常法氏囊组织可检测到800个以上蛋白点,不同2-DE图谱间蛋白点平均匹配率为83.5%,不同日龄雏鸡法氏囊存在有明显表达差异的蛋白质点37个,其中表达上调蛋白点17个,表达下调蛋白点11个,新增蛋白点5个,消失蛋白点4个,试验建立的鸡法氏囊组织蛋白质组双向电泳技术为法氏囊发育进化及其免疫功能的研究提供了新技术和方法.     

滩羊羊毛蛋白质双向电泳图谱体系的建立及优化

为建立宁夏滩羊羊毛蛋白质双向电泳体系,比较分析了滩羊羊毛蛋白质不同上样量、不同pH值范围的IPG胶条以及聚焦参数对羊毛蛋白质双向电泳的影响。结果表明:使用TCA/丙酮沉淀法对羊毛蛋白进行处理,上样量600μg,选择pH值为4~7的IPG胶条,聚焦时间90 000 Vhr,12%SDS-PAGE凝胶进行双向电泳,经考马斯亮蓝染色,用Images-Scanner扫描,所得到的滩羊羊毛较清晰的2-DE图谱较好,为后续滩羊羊毛的差异蛋白质组学研究建立了条件。     

新城疫病毒感染细胞的双向凝胶电泳方法建立及其初步分析

为了研究新城疫病毒(NDV)和宿主细胞之间的相互作用关系,本研究以NDV感染鸡胚成纤维细胞(CEF)为材料,对细胞培养方式、样品制备方法、上样量、等电聚焦以及凝胶染色等步骤进行一系列优化,建立了NDV感染CEF的双向凝胶电泳技术。运用PDQuest8.0.1软件对电泳图谱分析后显示:17cmIPG胶条(pH4～7)对应的凝胶上可检测到800个左右蛋白点、蛋白点匹配率达90%,表明NDV感染CEF蛋白质组双向凝胶电泳模型稳定、分辨率高、重复性好。电泳图谱上共发现36个差异表达明显的蛋白点,其中上调表达蛋白点有16个,下调表达蛋白点15个,新出现蛋白点3个,消失蛋白点为2个。NDV感染CEF双向凝胶电泳技术的建立为NDV的致病机理研究提供了有力的工具。     

双向电泳指纹图谱分析法鉴别鲜乳和复原乳

为选择鲜乳和复原乳鉴别方法,采用双向电泳指纹图谱分析技术分析鲜乳和复原乳总蛋白.通过不同胶条比对分析发现,pH4.7～5.9的17 cm胶条等电聚焦后能够有效区分蛋白点,最适合牛乳蛋白电泳;选用pH4.7～5.9的17 cm胶条,对市场上购买的巴氏乳以及巴氏处理的复原乳进行电泳分析,发现电泳图谱与自制参照乳图谱基本一致...     

支气管败血波氏杆菌外膜蛋白双向电泳图谱的建立

为建立支气管败血波氏杆菌(Bb)外膜蛋白(OMPs)双向电泳(2-DE)图谱,本研究利用碳酸钠法提取OMPs,并分别对裂解液、pH值、上样量、聚焦条件、染色方法等进行优化。2-DE结果表明,用裂解液5 MUrea、2 M Thiourea、2%CHAPS、2%SB3～10溶解蛋白,pH4～7的13 cm线性胶条考染上样量为750μg、银染上样量为75μg,聚焦条件为500 V,2 h,1 000 V,1 h,8 000 V,2∶30 h,8 000 V,4 h时,能获得聚焦良好、分离清晰的Bb OMPs图谱。本研究首次建立了Bb OMPs的2-DE图谱,为其蛋白质组学研究奠定了基础。     

牛精子全蛋白二维电泳等电聚焦程序优化及染色方法的比较

以牛精子全蛋白为试验材料进行二维电泳试验研究,优化和改进了一向等电聚焦参数,比较了不同的染色方法,并运用Image Master 6.0软件分析了二维电泳图谱。结果表明,采用24 cm,pH3～10线性IPG胶条进行牛精子全蛋白二维电泳,等电聚焦80000 Vh和结合硝酸银染色方法可得到较多蛋白点和较高分辨率的二维电泳图谱。     

双向电泳分析鸡羽髓蛋白组学方法的建立

为建立双向电泳方法研究鸡羽髓蛋白组学,以进一步了解病毒与宿主相互作用的新机制,从SPF鸡羽根挤出羽髓,提取其中蛋白进行双向电泳,并对不同裂解液、IPG胶条pH值范围、一向等电聚焦条件、二向SDS-PAGE凝胶浓度等影响因素进行优化.结果显示,采用17cm,pH 5～8 1PG胶条,400μg羽髓蛋白进行的双向电泳,图谱用PDQuest8.0.1分析,可分辨的蛋白点约为700左右,不同样本间的匹配率大于80%.可见,本研究建立的双向电泳方法分辨率及重复性均较高.     

不同条件对鸭瘟病毒感染细胞蛋白质组二维电泳分析结果的影响

本研究以鸭瘟病毒感染鸭胚成纤维细胞为材料,围绕影响二维电泳因素进行全面探讨,以建立和优化鸭瘟病毒感染细胞蛋白质组二维电泳模型.结果表明,样品经过冷丙酮处理,水化液DTT浓度为30 mmol/L都有利于等电聚焦;采用PH5～8 IPG窄胶条和混合两性裁体电解质pH3～10/pH5～8为2/1比pH3～10 IPG宽胶条和单一两性载体电解质PH3～10分离蛋白时,各蛋白点间距较大,分辨率高,更有利于显示低丰度蛋白点;1.5 mg的蛋白上样量偏大,2～DE图像出现拖尾和水平条纹,部分相邻高丰度的蛋白重叠,且还掩盖了低丰度蛋白点.PDQuest7.40软件分析显示:17 cm PH5～8 IPG胶条电泳鸭瘟病毒感染细胞蛋白质组,银染可获得1 253个蛋白点,而考染却检测到388个蛋白点;重复试验仍获得清晰、稳定的2-DE图像,同一样本不同时期,考染可获得约348、331个蛋白点,蛋白点匹配率达88%,表明了鸭瘟病毒感染细胞蛋白质组二维电泳模型稳定、分辨率高、重复性好,为鸭瘟病毒蛋白组的进一步研究和新蛋白的发现提供了重要的研究方法.     

分娩前后奶牛血浆差异表达蛋白初步分析

本研究运用双向电泳方法分析奶牛产前及产后1周血浆蛋白的差异表达,为理解围产期免疫抑制以及分娩前后奶牛的生理状态提供参考。血浆样品经过热SDS法处理后,使用pH4～pH7的胶条,在硝酸银染色的7.5%～17.5%的梯度聚丙烯酰胺凝胶上,利用PDQuest6.0图像分析软件检测到239个蛋白质点。比较奶牛产前及产后1周血浆蛋白差异表达情况发现,表达量变化3倍以上的点有12个。MADIL-TOF/TOF质谱鉴定出2种蛋白:白蛋白和结合珠蛋白。结合珠蛋白在产后1周的奶牛血浆中的含量显著增加,反映了产后奶牛的生理变化。但是需要结合其他标记共同作为疾病诊断的标记。     

癸氧喹酯干混悬剂含量测定的改进

采用高效液相色谱法测定癸氧喹酯干混悬剂的含量,在2-250μg/mL范围内,峰面积的常用对数与进样量浓度的常用对数呈良好的线性关系,R^2=1(n=5),平均回收率为99.24%~99.51%,RSD在0.05%~0.28%。此方法分析时间短,样品前处理简便、定量结果准确,重现性好,结果满意,为其质量控制提供了依据。     

商会自治的基石——商会自治规范研究

在现代法律秩序中,商会自治规范是制定法的基础和必要的补充,甚至在某些方面替代了制定法;商会自治规范主要包括商会组织规范、行为规范、惩罚规范以及争端解决规范等;其效力仅及于其内部成员;商会自治规范和制定法之间存在冲突,但也存在整合的基础。     

猪毛色遗传的研究进展

本文概述了猪的毛色类型、猪的毛色遗传模式,着重综述了猪毛色基因分子基础的研究进展,指出存在问题并就未来发展方向做了思考。     

中华人民共和国农业部公告 第267号

为贯彻落实《兽药生产质量管理规范》(简称《兽药GMP》),进一步推动兽药GMP实施进程,我部制定了《兽药生产质量管理规范检查验收办法》,现予公告。本公告自2003年6月1日起施行。附件:兽药生产质量管理规范检查验收办法二○○三年四月十日第一章 总则 第一条 为推动《兽药生产质量管理规范》(以下简称兽药GMP)的实施,规范兽药GMP检查验收工作,制定本办法。 第二条 农业部负责全国兽药GMP管理和检查验收工作;负责制修订兽药GMP检查验收管理规定;负责兽药GMP检查员队伍建设和监督管理工作,负责国际兽药贸易中GMP互认工作。 …     

鸡败血支原体垂直传播模式及其阻断方法

以国际标准强毒Ｒ株人工感染非免疫产蛋鸡,定时扑杀,分别从鼻窦、眶下孔、气管、肺、气囊、卵巢和输卵管分离ＭＧ,并收集感染鸡所产蛋分离ＭＧ。结果表明,人工感染４８小时后上、下呼吸道及肺已被全面感染,９６小时气囊已被感染,１２０小时输卵管已能分离到ＭＧ,卵巢始终分离不到ＭＧ。人工感染鸡自１４４小时便能在其所产蛋中分离出ＭＧ。药物治疗能在７２小时内消除感染,油乳剂苗则需２４天后逐渐降低蛋内ＭＧ分离率,药物卵内注射、种蛋药浴、高温处理均能杀死卵内ＭＧ,但以研制的种蛋浸泡剂药浴效果为最好。     

Comparison of 2 methods of centesis of the bursa of the biceps brachii tendon of horses

REASONS FOR PERFORMING STUDY: Centesis of the bicipital bursa using an 8.9 cm long spinal needle has been reported but the alternative of employing a 3.8 cm long hypodermic needle requires validation. OBJECTIVE: To compare the efficacy of 2 different methods of centesis of the bicipital bursa and to evaluate the usefulness of ultrasonographic imaging to determine the location of solution administered when centesis of the bursa is attempted. METHODS: For Trial 1, 6 clinicians, who had no previous experience of centesis of the bicipital bursa, attempted to inject a solution composed of an aqueous radiopaque contrast medium and physiological saline solution (PSS) into the bicipital bursae of 2/12 horses using the previously described distal approach to inject one bursa and a proximal approach to inject the contralateral bursa. The bicipital tendon and bursa were examined ultrasonographically before and after injection; and both shoulders were examined radiographically to identify the location of the medium. In Trial 2, another 6 clinicians, also with no previous experience of centesis, repeated Trial 1, using 6 horses, but the radiopaque contrast medium was mixed with air instead of PSS. RESULTS: Accuracy of centesis using the proximal approach was 39% and that of the distal approach 28%. Ultrasonographic examination of the shoulder allowed the location of solution and air to be accurately predicted in all 12 shoulders examined. CONCLUSIONS: Clinicians who have had no previous experience performing centesis of the bicipital bursa are unlikely to be successful in centesis using either approach. Radiographic examination after injecting a radiopaque contrast medium may be necessary to assess the success of centesis especially if bursal fluid is not obtained during centesis. Injecting air along with the radiopaque contrast medium provides more accurate ultrasonographic confirmation of centesis and better radiographic definition than does injection without air.     

不同样本商品蜂蜜中硒含量的测定

用硝酸和高氯酸消化蜂蜜,使硒游离出来,在微酸性环境下,硒和2,3-二氨基萘(DAN)生成有较强荧光的物质,用环己烷萃取,在激发波长378nm,荧光波长518nm处测定其荧光强度。蜂蜜中硒含量范围:0.10～0.82μg/g。表明:蜂蜜应视为天然富硒营养品。     

乳酸杆菌益生作用机制的研究进展

乳酸杆菌作为益生菌广泛用于人和动物。本文综述了乳酸杆菌改善宿主健康的机制。乳酸杆菌可通过产生抗菌物质如乳酸、过氧化氢、细菌素,或者通过竞争营养或肠道黏附位点来抑制致病菌;通过诱导黏附素的分泌或阻止细胞凋亡而增强肠道的屏障功能,从而保护肠道。文章重点讨论了乳酸杆菌表面成分（表面蛋白、脂磷壁酸和肽聚糖）与肠道受体（Ｃ型凝集素受体、Ｔｏｌｌ样受体和 Ｎｏｄ样受体）,阐述了他们结合后启动免疫调节信号,调控肠道免疫功能以发挥改善健康作用的机制。     

Effects of size of ingestively masticated fragments of plant tissues on kinetics of digestion of NDF

Ingestively masticated fragments were collected and sized via sieving. Different sizes of esophageal masticate and ruminal digesta fragments, and ground fragments of larger masticated pieces were incubated in vitro, and undigested NDF remaining at intervals of up to 168 h of incubation was determined. The ruminal age-dependent time delay (tau) for onset of digestion of NDF was positively correlated (P < 0.004) with the mean sieve aperture estimated to retain 50% of the fragments between successive sieve apertures (MRA). Degradation rate of potentially degradable NDF (PDF) and level of indigestible NDF were not related (P > 0.10) to MRA of masticated and ground fragments. Estimates of tau were positively related to MRA, with slopes of bermudagrass < corn silage < ruminal fragments of corn silage. It was concluded that fragment size-, and consequently, ruminal age-dependent onset of PDF degradation of a mixture of different fragment sizes results in an age-dependent rate of degradation of the more rapidly degrading of two subentities of PDF. Models are proposed that assume a tau before onset of simultaneous degradation of PDF from two pools characterized as having gamma-modeled age-dependency and age-constant rates. The ruminal age-dependent pool seems to be associated with the faster-degrading pool, and its rate parameter increases with range in MRA in the population of fragments. Conceptually, the ruminal age-dependent rate parameter for PDF degradation seems to represent a composite of several effects: 1) effects of the size-dependent tau; 2) range in MRA of the population of ingestively masticated fragments; and 3) subentities of PDF that degrade via more rapid age-dependent rates compared with subentities of PDF that degrade via age-constant rates. The estimated fractional rates of ruminative comminution of ingestively masticated fragments (0.060 to 0.075/h) were of a magnitude similar to the mean fractional rates of PDF digestion (0.030 to 0.085/h), which implies that ruminative comminution may be first-limiting to fractional rate of PDF digestion. The in vivo roles of ingestive and ruminative mastication of fragments on PDF degradation must be considered in any kinetic system for estimating PDF digestion in the rumen. These results and others in the literature suggest that the rate of surface area exposure rather than intrinsic chemical attributes of PDF may be first-limiting to degradation rate of PDF in vivo.