如何养好茸鹿

鹿属哺乳纲、偶蹄目、鹿科、鹿属动物,其中茸角有药用价值的鹿都称为茸鹿。我国驯养的茸鹿主要有梅花鹿、马鹿、白唇鹿和黑鹿等。鹿茸是一种名贵的中药材,具有生精补髓、益血、壮阳、强筋健骨等功效。其他如鹿胎、鹿血、鹿筋、鹿鞭、鹿骨、鹿肉、鹿心、鹿肝及鹿皮等,均是上等的制药及工业原料。茸鹿的经济价值高,野生资源又稀少,因此养鹿是有前景的好行业。     

动物产品及饲料中牛源和羊源性成分PCR检测方法的优化

以牛肉、山羊肉为试验材料，对动物产品及饲料中牛源、羊源性成分PCR检测方法进行了优化。结果，牛源性成分的最低检测限可达10μg/g，羊源性成分的最低检测限达0．1μg/g。PCR检测和酶切鉴定结果表明，在水平测试的混合饲料粉中可检出牛源、羊源性成分。     

超高效液相色谱-质谱法同时检测龟鹿补肾丸中龟甲胶、鹿角胶成分

建立检测龟鹿补肾丸中龟甲胶、鹿角胶成分的超高效液相色谱-质谱方法。恒温酶解样品中的胶类特征性肽段，采用超高效液相色谱-质谱识别技术分别对龟甲胶和鹿角胶进行鉴别，ESI+电离模式进行多响应监测。结果表明，本方法重复性好，精密度和稳定性考察RSD均小于6.0%，龟甲胶及鹿角胶检出限分别为0.02 mg/mL和0.01 mg/mL。用建立的检测方法测定6批次龟鹿补肾丸样品，均检测出了龟甲胶及鹿角胶特征性成分。说明该方法简便准确，灵敏度高，适用性强，可为龟鹿补肾丸中胶类成分的质量管控提供依据。     

食品中肉类成分种属检测技术中国专利申请分析

正我国人口泱泱,市场前景需求大,为食品中肉类成分种属检测技术提供了巨大的市场。民以食为天,食以安为先,吃放心健康绿色的肉类制品是食品质量安全的一个重要方面。但是,在动物源性原料和加工产品中,经常出现动物成分的掺假造假掺杂和无意污染现象,因此肉类制品掺假是公众关注的焦点问题之一。我国作为猪肉生产消费大国,猪肉产品却难以进入国际市场。为确保食品成分的真实性,质检"十二五"规划纲要明确指出,需重点加强开展食品掺假鉴别技术研究。国内已发布哺乳动物(包括牛、绵羊、山羊、猪、兔、鹿、马、驴、狗、猫等)、反刍动物(牛、羊和鹿)、骆驼、马、驴、猪、兔、狗等多种动物源性饲料成分检测的国家或行业标准,而鸡、鸭、蛇、猫等多种动物源性成分的检测方法也已有研究报道,更多品种的动物源性成分检测方法还在陆续研究开发中。由于其应用与百姓生活密切相关,动物源性成分检测成为执法管理部门以及企业生产质量控制的关键检测技术和热门研究领域。     

食品中肉类成分种属检测技术中国专利申请分析

<正>我国人口泱泱,市场前景需求大,为食品中肉类成分种属检测技术提供了巨大的市场。民以食为天,食以安为先,吃放心健康绿色的肉类制品是食品质量安全的一个重要方面。但是,在动物源性原料和加工产品中,经常出现动物成分的掺假造假掺杂和无意污染现象,因此肉类制品掺假是公众关注的焦点问题之一。我国作为猪肉生产消费大国,猪肉产品却难以进入国际市场。为确保食品成分的真实性,质检"十二五"规划纲要明确指出,需重点加强开展食品掺假鉴别技术研究。国内已发布哺乳动物(包括牛、绵羊、山羊、猪、兔、鹿、马、驴、狗、猫等)、反刍动物(牛、羊和鹿)、骆驼、马、驴、猪、兔、狗等多种动物源性饲料成分检测的国家或行业标准,而鸡、鸭、蛇、猫等多种动物源性成分的检测方法也已有研究报道,更多品种的动物源性成分检测方法还在陆续研究开发中。由于其应用与百姓生活密切相关,动物源性成分检测成为执法管理部门以及企业生产质量控制的关键检测技术和热门研究领域。     

应用PCR等核酸技术检测动物饲料中牛羊组织成分

为准确鉴别不同品种动物源性饲料，防范疯牛病及羊痒病的传播，建立了检测牛、绵羊和山羊组织种间特异的合酶链反应（PCR）；用Mbo I、Vsp I、Rsa I分别对从动物饲料中检测得到的牛、绵羊和山羊组织的PCR产物进行酶切分析、酶切图谱与序列结构相符；核酸测序结果表明，3种动物组织的PCR产物序列与基因库中检索到的相应序列相吻合。用3种检测方法检测牛、绵羊和山羊组织无交叉反应，检测猪、鸡、兔和鱼等动物组织均呈阴性。PCR检测的敏感性可达0．25％（质量分数），PCR检测全过程包括样品处理，可在3h内完成。     

用分子生物学方法鉴别检测动物源性饲料中的牛羊源性成分

为了防止海绵状脑病疫区和痒病疫区反刍动物源性饲料进入我国 ,非常有必要对贸易往来中的肉骨粉品种来源进行鉴定检测。我们采用分子生物学方法从动物源性饲料中鉴别检测牛、羊特异性线粒体DNA的片段 ,并用限制性内切酶SspⅠ对PCR产物进行酶切鉴定及DNA序列测定。该方法的灵敏度可达 0 .12 5 % ,具有灵敏度高、快速和特异性强的优点。     

利用线粒体COI序列快速检测狐源性成分

狐狸是一种重要的经济皮毛动物,养殖业十分发达.选择狐狸线粒体COI基因序列,设计特异性引物和探针,经条件优化和验证,建立狐狸成分的实时荧光PCR检测方法.该方法灵敏度高,检测限可达12 fg DNA,而且与常见的猪、牛、羊、犬以及大豆、玉米等其他物种无交叉反应.该方法可作为食品和饲料中狐狸源性成分鉴别检测的有效方法,也可作为狐狸皮毛真伪鉴别的方法.     

根据线粒体基因的特异性鉴别检测饲料中的动物源性成分

为了防止海绵状脑病疫区和痒病疫区的反刍动物源性饲料入手动物食物链，继而进入人类消费的食物链，因而，非常用必要对贸易往来中的肉骨粉品种来源进行鉴定检测。我们运用聚合酶链反应技术（Polymerase Chain Reaction,PCR），以检测不同种动物特异性线粒体基因片段为目标，分别建立了从动物源性饲料中鉴别检测猪、鸡、马成分的方法。该方法具有灵敏度高、快速和特异性强的优点，可作为动物源性饲料中猪、鸡、马源性成份鉴别检测的常规方法之一。     

二重实时荧光PCR方法检测山羊和绵羊源性成分

本研究根据山羊、绵羊线粒体中的cyt b基因序列,利用ABI primer express 3.0和DNAStar软件设计了特异性引物和探针.通过对引物和探针浓度、Mg2 浓度、dNTP浓度和Taq酶用量以及反应条件等因素的优化筛选,建立了能同时鉴别山羊和绵羊源性成分的二重实时荧光PCR方法.所建方法灵敏性高、特异性好,对17种不同源性的动物DNA和50份不同来源的样品DNA进行实时荧光PCR检测,结果表明引物与探针能特异地鉴别检测出山羊和绵羊源性成分.实验结果表明该检测方法适用于饲料、肉制品、奶制品和生皮等动物源性产品的山羊和绵羊源性成分鉴定.     

应用PCR技术检测鸽源性成分

根据鸽子线粒体DNAD-loop环基因中的保守序列,用Primer5.0设计针对鸽的特异性扩增引物。通过聚合酶链式反应从鸽样品中得到约150bp的特异条带。通过测序对扩增产物进行验证,鸽组织的PCR产物序列与基因库中检索到的相应序列相吻合。该实验建立了检测鸽动物源性成分的PCR方法,其检测灵敏度为0.1%。     

The pCS20 PCR assay for Ehrlichia ruminantium does not cross-react with the novel deer ehrlichial agent found in white-tailed deer in the United States of America

White-tailed deer are susceptible to heartwater (Ehrlichia [Cowdria] ruminantium infection) and are likely to suffer high mortality if the disease spreads to the United States. It is vital, therefore, to validate a highly specific and sensitive detection method for E. ruminantium infection that can be reliably used in testing white-tailed deer, which are reservoirs of antigenically or genetically related agents such as Ehrlichia chaffeensis, Anaplasma (Ehrlichia) phagocytophilum (HGE agent) and Ehrlichia ewingii. Recently, a novel but as yet unnamed ehrlichial species, the white-tailed deer ehrlichia (WTDE), has been discovered in deer populations in the United States. Although the significance of WTDE as a pathogen is unknown at present, it can be distinguished from other Ehrlichia spp. based on 16S rRNA gene sequence analysis. In this study it was differentiated from E. ruminantium by the use of the pCS20 PCR assay which has high specificity and sensitivity for the detection of E. ruminantium. This assay did not amplify DNA from the WTDE DNA samples isolated from deer resident in Florida, Georgia and Missouri, but amplified the specific 279 bp fragment from E. ruminantium DNA. The specificity of the pCS20 PCR assay for E. ruminantium was confirmed by Southern hybridization. Similarly, the 16S PCR primers (nested) that amplify a specific 405-412 bp fragment from the WTDE DNA samples, did not amplify any product from E. ruminantium DNA. This result demonstrates that it would be possible to differentiate between E. ruminantium and the novel WTDE agent found in white tailed deer by applying the two respective PCR assays followed by Southern hybridizations. Since the pCS20 PCR assay also does not amplify any DNA products from E. chaffeensis or Ehrlichia canis DNA, it is therefore the method of choice for the detection of E. ruminantium in these deer and other animal hosts.     

牙釉质基因鉴定麇鹿性别

性别鉴定是调查野生种群雌雄性比的重要方法,对野生动物种群管理具有重要意义。而牙釉质(AMEL)基因在性染色体上具有较高的保守性,在鉴定动物性别方面得到了应用,本次试验采用北京麋鹿生态实验中心的15头糜鹿组织样本,其中11个来自雄性麇鹿鹿茸,4个来自雌性糜鹿静脉血液。对所取样本分别进行基因组DNA提取、AMEL基因片段PCR扩增、纯化、测序。得到了AMEL基因鉴定和实际雌雄性别个数差异不显著(P>0.05)。结果表明:雌性麋鹿产生1条322 bpX带和1条N带,雄性麋鹿则产生322 bpX带和277 bpY带以及1条N带,雄鹿(10/10)和雌鹿(4/4)性别鉴定结果分别都与实际性别符合,所以,使用鹿茸角和血液样本进行AMEL.基因扩增电泳分析可以对糜鹿性别鉴定。     

狍Sry基因PCR扩增的初步研究

为研究狍性别决定机制,采用聚合酶链式反应(PCR)技术对野生狍(Capreoluscapreolus)(n♀=2,n♂=2)Sry基因(哺乳动物Y染色体DNA雄性特异区)进行扩增。根据人的SRY基因核心序列设计合成了1对引物1,2。结果在野生狍雄性个体中扩增出1条带,大小约为220bp,而在雌性个体中未见扩增带,表明了Sry基因的性别特异性,为探讨野生狍的性别决定机制提供了分子资料。     

锦鲤疱疹病毒双基因检测方法的研究

为建立锦鲤疱疹病毒(KHV)双基因检测方法,本研究根据KHV聚合酶基因(Sph)和胸苷激酶基因(TK)的保守序列设计2对引物,建立两基因同时检测的PCR方法.结果表明,利用双基因同时检测KHV,可以同时特异扩增出570 bp和155 bp片段,而与鲤春病毒血症病毒、传染性造血器官坏死病毒和鲤鱼疱疹病毒无扩增反应.而且所建立的双基因检测方法对临床样品的检测结果与单一PCR方法比较符合率为100％.为进一步研究KHV以及诊断方法奠定了基础.     

Sex determination based on fecal DNA analysis of the amelogenin gene in sika deer (Cervus nippon)

A sex determination method using DNA extracted from feces has been developed for sika deer (Cervus nippon). We determined a partial sequence of the amelogenin gene of sika deer, which exists on both X and Y chromosomes with a deletion region on the Y chromosome. Based on the sexually dimorphic sequences, we designed a pair of primers which could amplify DNA fragments the lengths of which are different between males and females. PCR products were detected in 34 out of 37 fecal samples collected from captured deer and the sexes estimated by the present method were perfectly matched with the actual sexes.     

Technical note: Detection of cat, dog, and rat or mouse tissues in food and animal feed using species-specific polymerase chain reaction

A PCR method based on the nucleotide sequence variation in the 12S ribosomal RNA, mitochondrial gene has been developed for the specific and qualitative detection and identification of cat, dog, and rat or mouse tissue in food and feedstuffs. The primers designed generated specific fragments of 108, 101, and 96 bp in length for cat, dog, and rat or mouse tissues, respectively. Specificity of the primers was tested against 32 nontarget species including mammals, birds, fish, and plant species. This PCR method allowed detection of raw and heated cat, dog, and rat or mouse tissues in meat/oats mixtures even when the concentration of the target species was reduced to 0.1%. Furthermore, the performance of the method was not affected by prolonged heat-treatment (up to 133 degrees C for 20 min at 300 kPa), and consequently, it could be very useful to verify the origin of raw materials in food and feedstuffs submitted to denaturing technologies, for which other methods cannot be applied.     

鸡传染性法氏囊病病毒RT-PCR检测方法的建立

根据GenBank中已经发表的传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP2基因的高度保守序列,设计并合成了一对引物,Blast在线检索GenBank数据库,未发现其他相似序列。提取已鉴定的IBDV—QD株传代病毒尿囊液的总RNA,合成cDNA模板,优化RT-PCR反应条件,最终获得预期453bp的目的片段,IBDV扩增产物经测序结果证实与GenBank中已发表的致病力不同的IBDV毒株相应序列同源性达97．4％～99．9％,最终建立了RT—PCR检测方法。用已建立的RT—PCR方法对已知的8份临床IBDV阳性法氏囊病料进行检测,阳性率达100％,另外对2份鸡白血病病毒（ALDV）,2份鸡传染性喉气管炎病毒（Infectious laryngotracheitis virus,ILTV）,2份鸡传染性支气管炎病毒（IBV）阳性病料进行平行同条件检测,结果均为阴性。表明所建立的RT—PCR特异性好、敏感性高,可用于鸡传染性法氏囊病的临床初步诊断及流行病学调查。     

牛新孢子虫内标多重PCR检测方法的试验

本试验以牛新孢子虫NcSAG1基因、Nc-5基因和NcSRS2基因作为检测新孢子虫病的目的基因,以牛性腺(prolac-tin)基因作为内标对反应过程进行监测,对上述基因各设计1对引物。结果表明,4对引物可分别扩增出201bp、231bp、256bp和156bp的目的条带。经反应条件的优化,该方法具有较好的灵敏度,各质粒在103 copies/反应时,均可于同一管中扩增出较清晰的目的条带,只比单重PCR的灵敏度低了10倍,且不受内标模板存在的影响。经临床应用研究,该方法具有较好的特异性和重复性,可用来对新孢子虫进行快速准确的检测。     

牛瑟氏泰勒虫ITS基因PCR诊断方法的建立

本试验根据GenBank上登录的牛瑟氏泰勒虫ITS基因序列(AY661522.1),应用Primer Premier 5.0和Oligo 6.31软件设计合成1对特异性引物,以牛瑟氏泰勒虫DNA为模板,建立了牛瑟氏泰勒虫ITS基因PCR诊断方法。该方法扩增片段大小为1020 bp,与参考序列的同源性为98%;建立的PCR方法与猪附红细胞体、犬新孢子虫和弓形虫均无交叉反应,最低DNA检出量为1.5 pg/μL;通过对60份临床样品的检测,并与血涂片方法进行比较,结果显示PCR方法具有特异、敏感等特点,适用于牛瑟氏泰勒虫的检测。