中华鳖和杂交鳢血清免疫球蛋白免疫印迹和酶联免疫分析

[目的]探讨中华鳖和杂交鳢血清免疫球蛋白的同源性及其含量。[方法]采集中华鳖和杂交鳢血清与25种商品二抗共同抚育,进行免疫印迹及酶联免疫分析。[结果]中华鳖和杂交鳢血清可与兔抗鸡IgM、兔抗猪IgG、兔抗鸡IgG、兔抗大鼠IgM、兔抗猴IgG和羊抗人IgG等6种二抗发生免疫印迹反应。利用鸡IgG、鸡IgM、猪IgG、大鼠IgM、猴IgG和人IgG的ELISA试剂盒测定了中华鳖和杂交鳢血清免疫球蛋白水平,中华鳖血清免疫球蛋白浓度为28.5～215.4μg/L,杂交鳢血清免疫球蛋白浓度为24.5～201.5μg/L。[结论]该研究能够丰富中华鳖、杂交鳢特异性免疫系统的研究,对中华鳖、杂交鳢的健康养殖有一定的指导意义。     

猪繁殖与呼吸综合症GP5蛋白的纯化与免疫活性分析

1材料与方法1．1表达菌及试剂猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）6P-1-GP5表达质粒由该实验室保存。Novagen蛋白纯化试剂盒、硝酸纤维素膜（NC膜）均购自华美公司;弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂购自Sigma公司;辣根酶标记兔抗猪IgG购自北京中杉金桥生物技术有限公司;其他常规试剂均由国内生产。试验用豚鼠由中国农业科学院兰州兽医研究所实验动物厂提供,体重400-500g,共8只。     

羊抗鸡酶标二抗用于鹅血清抗体检测的研究

通过比较鸡IgG与鹅IgG的相似性,探讨羊抗鸡酶标二抗用于检测鹅血清抗体的可行性。用辛酸-硫酸铵盐析法提纯鸡、鸭、鹅、小鼠、兔、猪、羊的IgG,比较上述动物IgG粗提物的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱,并用蛋白免疫转印法定性检测上述动物血清IgG与羊抗鸡酶标二抗的结合情况;然后用直接ELISA方法分析不同动物血清分别与抗鸡酶标抗体和抗鹅酶标抗体结合程度的差异;最后用间接ELISA方法比较两种酶标抗体对同一鹅群大肠杆菌抗体的检测结果。结果表明,鸡、鸭、鹅IgG具有较大的相似性,都能够与抗鸡酶标二抗结合;羊抗鸡酶标二抗可以替代抗鹅酶标二抗来检测鹅的血清抗体。     

鸡免疫球蛋白G的提纯及定量测定

从成年鸡血清中用硫酸铵三次沉淀粗提r球蛋白。然后,用G200凝胶柱过滤,洗脱液含O.14M NaCl,0.01M PB,流速6—8滴/分。取第二峰,用DE52纤维素柱层析,洗脱液是0.1M PH7.0 PBS。洗脱蛋白用免疫电泳等技术鉴定为纯化IgG。以此抗原1毫克加福氏完全佐剂首次免疫家兔后,再用同种抗原2—3次加强免疫,总蛋白用量3—5毫克。兔抗鸡IgG抗血清效价在1:16—1:32以上。以单向免疫扩散试验,测出不同周龄鸡血清中IgG的含量: 2周龄:2.9117±0.0779(n=20); 4周龄:3.8748±O.0591 (n=20); 10—13周龄:8.2243±O.4000 (n=59); 18—21周龄:13.3107±0.7434(n=44);     

CD58抗体的制备及其检测方法的建立

【目的】建立CD58特异性抗体的制备方法,及检测CD58抗体的间接ELISA方法。【方法】用CD58混合弗氏佐剂和兔淋巴细胞吸附CD58的方法免疫家兔获取CD58的抗体,双向免疫扩散试验检测抗体特异性,间接ELISA检测抗体水平。【结果】两种方法都能够使动物机体产生免疫应答;双向免疫扩散试验证实,弗氏佐剂法获得2种抗体,淋巴细胞吸附法制备抗原可获得1种抗体;间接ELISA检测法CD58的最适包被浓度为10.0μg/mL,最佳封闭液为10 g/L明胶,辣根酶标记的羊抗兔IgG工作浓度为1∶2 000。【结论】兔淋巴细胞吸附法可制备针对CD58的单一抗体,间接ELISA检测方法可以用于CD58抗体水平的检测。     

猪小肠碱性磷酸酶提取与性质研究

碱性磷酸酶是酶标技术较理想的标记物。我们本着原料来源广泛,研究了猪小肠粘膜制备碱性磷酸酶方法。其活力在20000单位/mg,经聚丙烯酰胺凝胶园盘电脉,呈现一条粗蛋白带和两条细蛋白带。酶染色粗带呈现特异活性。将该酶标记在兔抗猪 IgG、羊抗人 IgG,羊抗兔 IgG 制成结合物。分别用 ELISA 间接法检测猪旋毛虫,人血吸虫,兔血吸虫等均获得满意结果。并与辣根过氧化物酶比较结果一致。碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase 称 AKP)广泛存在哺乳动物各脏器中。文献报     

ELISA双抗夹心法检测IBDV抗原

采用IBD细胞毒油佐剂灭活苗多次免疫易感鸡，制取高免血清效价1：64，提纯IgG抗体并用HRP标记同一IgG抗体，建立一种检测IBDV的敏感性方法──ELISA双抗夹心法。实验用盐析法和离子交换层析法纯化IgG。酶标抗体E／IgGmol比1：43。方阵实验确定最佳反应条件；包被抗体50ug／ml，E－Ab2稀释度为1：120，Ag灵敏度为1：3200；取代反应，抗原阻断反应，无关病毒对照试验均为阴性，并与AGP法对照实验．灵敏度高200倍。以上结果表明：本实验敏感性高，特异性强，简单快速判定客观，对临床诊断IBD流行病有很好的使用价值和推广价值。     

鸡免疫球蛋白 GFc(IgGFc)重链的分离纯化及其抗血清制备——Ⅰ 兔抗鸡 IgGFc 重链抗血清制备

经硫酸铵盐析沉淀、柱色谱分离纯化得到鸡血清 IgG。然后用木瓜蛋白酶水解IgG,再经 DEAE-纤维素柱色谱纯化制得 IgGFc 重链。继用 IgGFc 重链免疫家兔制备兔抗鸡 IgGFc 重链抗血清。     

H5N1亚型禽流感油佐剂疫苗安全性试验研究

通过对H5N1亚型禽流感油佐剂疫苗的急性毒性试验、眼结膜刺激试验、肌肉刺激试验与溶血试验研究,评价其安全性。急性毒性试验：取AA+肉鸡70只,随机分成7组,设为高剂量疫苗组与佐剂组,中剂量疫苗组与佐剂组,低剂量疫苗组与佐剂组,空白对照组。眼结膜刺激试验：取兔12只,随机分成2组,为疫苗组和佐剂组,采用自身对照法,观察兔...     

抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的定量检测

以免抗鼠 IgG 作为抗血清,首先验证了应用单向琼脂扩散法与酶联兔疫测法(ELISA)测定中试样品中抗鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)单抗浓度的相应关系;以 DEAE 纤维离子交换层析法纯化的鼠 IgG(3.8mg/ml)作标准样品,以单向琼扩法确定中试样品 F.中具有生物活性单抗含量为330uG/ml,并以 F.作为 ELISA 标准样品,作标准曲线,检测不同样品中抗 IBDV 单抗含量皆在50ug/ml(此为1:10稀稀应用的浓度标准值)以上,ELISA 效价皆在10~(-4)以上。证明了我们的中试产品 OD 值在0.050以上,都可以1:10稀释,可靠地投放市场广泛应用。