兔支气管败血波氏杆菌菌毛粗提物3种抗体检测方法的建立及比较

利用超声波处理结合TritonX-100溶解法制备粗提的菌毛抗原,建立了3种用于支气管败血波氏杆菌的抗体检测方法:琼脂免疫扩散试验(AGID)、玻片凝集试验(SAT)、间接血凝试验(IHA)。临床检测了458份兔血清样品,结果显示:HA试验的阳性检出率最高,为73.36%(336/458),AGID试验阳性63.54%(291/458),SAT试验阳性61.79%(283/458),三者平均阳性为57.20%(262/458);IHA与AGID的符合率为90.17%,IHA与SAT的符合率为86.68%,AGID与SAT的符合率为89.08%。表明IHA试验更为敏感,可用于支气管败血波氏杆菌的血清学监测。     

3种血清学试验检测鸡血清中新城疫抗体的比较研究

以鸡胚中和试验(NT)、血凝抑制试验(HI)和琼脂免疫扩散试验(AGID)分别检测相同36份鸡血清样品。将每个样品的抗体滴度转化为-logX后进行统计分析。对3种血清学试验所得到的3组数据进行方差分析及相关关系的检验。经方差分析,NT组与AGID组、HI组与AGID组之间差异极显著;NT组与HI组之间差异不显著。相关关系检验,NT组与HI组、NT组与AGID组、HI组与AGID组的相关系数分别为0.973 1、0.843 1、0.884 8,3组之间的差异均极显著。结果表明,免疫接种后一段时间内,鸡体内疫苗诱导的中和抗体滴度与HI抗体滴度基本相平行;AGID检出的抗体滴度与NT检出的中和抗体滴度及与HI试验检出的HI抗体滴度有密切的线性关系。AGID检测的NDV抗体平均滴度比NT、HI检测的分别低1.640 8(1/25.45)-1.471 1(1/24.89)、1.731 8(1/25.69)-1.509 5(1/25.01)。     

间接Dot—ELISA检查猪细小病毒抗原的研究

本研究首次成功地建立了检测PPV抗原的间接斑点酶联免疫吸附试验(Dot—ELISA)标准化程序,在所确定的最适条件下,对纯化PPV抗原的最低检出量为2.5ng/dot,其敏感性为血凝试验(HA)的125倍,但稍低于银加强胶体金检测法(SECGA)。PPV阳性猪血清的特异性阻断试验及与猪瘟病毒,猪伪狂犬病病毒,猪巴氏杆菌的交叉反应试验证明,该方法对PPV抗原的检测具有特异性。以该方法检测PPV人工感染兔样本和自然感染猪样本,PPV抗原的阳性检出率分别为肾样本100％(17/17)、81.82％(9/11),肝样本100％(16/16)、56.52％(13/23)。20份随机样本的间接Dot—ELISA检测结果与病毒分离和鉴定结果相符。 试验证明间接Dot—ELISA对PPV感染的检测具有简单、快速、经济、敏感性高、特异性强、重复性好和便于推广应用等优点,适用于大批量抗原样本的检测,是PPV感染快速诊断和流行病学调查的有效方法。     

绵羊进行性肺炎血清学调查

琼脂凝胶免疫扩散试验(AGID)检查表明,新疆特克斯、昭苏、尼勒克、伊吾4个马场的绵羊均自然感染绵羊进行性肺炎(OPP),平均感染率为3.5％。倍比稀释试验表明,OPP琼扩抗原浓度对检出率影响极大(P<0.01)。     

珍禽霉形体抗体检测方法的建立和应用

本试验经培养特性、形态特征、红细胞吸附试验和生长抑制试验等从8株珍禽霉形体中筛选出1株具有代表性的菌株MG—P,将MG—P和标准株MG-S分别建立了HI和Dot-ELISA试验,检测3批120份共 100多种珍禽动物的血清样本,MG—P的阳性检出率为HI 14. 2％（17/20）,Dot—ELISA 16.7％（20/120）,两法阳性符合率为 85％（17/20）;MG—S_6的阳性检出率为HI 9.2％（11/120）,Dot—ELISA16. 7％（20/120）,两法符合率为 55％（11/20）。以MG—P为检测抗原,将 HI、Dot—ELISA和常规血清平板凝集试验（SPA）比较,结果表明HI具有高特异性和敏感性,而Dot—ELISA和SPA具有较高的非特异性,且 SPA试验重复性差。因此以 MG—P建立的HI试验为检测珍禽霉形体血清抗体的最佳方法。     

三抗体间接法Dot—ELISA检测牛副结核病IgG_1抗体的研究

本试验建立了检测副结核病牛血清中特异性抗体的一种新的免疫学诊断方法——三抗体间接法斑点酶联免疫吸附试验(Dot一ELISA)。并与粪便培养法,常规 ELISA,补体结合反应(CFT)及二抗体间接法 Dot一ELISA 进行了比较,试验结果表明,三抗体间接法Dot——ELISA 比常规 ELISA、CFT 和二抗体间接法 Dot——ELISA 显著敏感,而且快速、简易、经济,适用于大规模的现场检疫。     

牛白血病免疫酶技术的研究

本文介绍用酶联免疫吸附检测法(ELISA)检测牛白血病病毒(BLV)的抗体。以FLK-BLV细胞培养液制备的免疫扩散(ID)用的粗提抗原,经ConA-Sepharose 4B亲和层析,或先经乙醚处理,再经Sephadex G-150层析等方法,分别提取了gp和p抗原。用gp抗原作ELISA,对91份牛血清样品进行检测,阳性共67份,比微量免疫扩散(MID)高14％,两者的符合率为85％。用p抗原作ELISA对240份牛血清样品进行检测,阳性占162份,比MID法高12％,两者的符合率为87％。用gP抗原对33份样品和用p抗原对160份样品进行三次重复试验,它们的变异系数在10％以内的分别为100％和92.5％。ELISA抑制试验表明,p抗原和gP抗原对BLV抗体的特异性良好。     

鸡传染性囊病双抗体夹心Dot-ELISA诊断法的建立及应用

本研究以醋酸纤维素膜作为固相载体、辣根过氧化物酶标记鸡抗传染性囊病病毒抗体(IBD—IgG)、饱和联苯胺为底物显色建立了一种简便、快速、敏感的鸡传染性囊病双抗体夹心Dot—ELISA诊断法。经方阵实验确定最佳反应条件为:IgG的包被液为0.05MpH9.6碳酸缓冲液,包被浓度为1:50;酶标抗体的工作浓度为1:100;洗涤液为含0.05％吐温—80的0.02MpH7.4磷酸缓冲液,封闭液为含0.2％明胶的洗涤液,封闭时间,抗原及酶标抗体的作用时间均为37℃30分钟。应用本方法和琼扩试验一同检测20份已知阳性病料,120份待检病料和胚毒尿囊液、10份正常鸡样品进行对比试验,结果表明Dot—ELISA阳性率为90％,而AGP只有40％;凡AGP阳性者,Dot-ELISA匀呈强阳性,而在Dot—ELISA阳性样品中,只有44％AGP阳性,其敏感度比AGP高100倍。     

小反刍兽疫防控知识问答(下)

<正>6.实验室诊断方法有哪些?如何确诊?血清学检测方法:抗体检测可采用竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)。病原学检测方法:病毒检测可采用琼脂凝胶免疫扩散、抗原捕获酶联免疫吸附试验(ELISA)、实时荧光反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、普通反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),对PCR产物进行核酸序列测定可进行病毒分型。疑似患病动物的病料需经国家外来动物疫病研究中心进行确诊。(地址:山东省青岛市南京路369号,联系电话0532—85621552)     

鸡传染性支气管炎(IB)诊断方法的研究

本试验用鸡胚大量繁殖鸡传染性支气管炎病毒（IBV）,收集尿囊液,用1％胰蛋白酶处理制备IBV血凝抗原,建立了血凝—血凝抑制（HA—HI）检测IBV抗体的方法,其特异性强、操作简便。另外,本试验建立Dot—ELISA方法用于检测IBV,病料经处理后,点样于硝酸纤维素膜,加兔抗IBV抗体,经PPA—DAB—H_2O_2系统显色,其检测结果与双抗体夹心ELISA的检测结果一致。两种诊断方法的建立为临床上检测病原和监测抗体提供了便捷的手段。     

BA—Dot—ELISA检测牛结核血清抗体的研究

利用BA—Dot—ELISA检测72份结核变反阳性牛血清,阳性率为69.5％,比常规ELISA(44.4％)高。用该法检测布鲁氏菌病、粘膜病、传染性鼻气管炎、白血病病牛血清及堪萨斯分枝杆菌、偶发分枝杆菌高免牛血清均无交叉反应,但对50份副结核变反阳性牛血清出现了一定的交叉。该法重复性好,简便快速,结果判定不需特殊仪器。     

应用酶联SPA免疫吸附试验(ELISA)检测奶山羊布氏杆菌病

本文应用酶联 SPA 免疫吸附试验(ELISA)对710份奶山羊血清进行了布氏杆菌病的检测,并与 SAT 和 CFT 相对应。检测结果:ELISA 的检出率(62％,441/710)高于 SAT(60.56％,430/710,包括可疑反应)和 CFT(2.16％);漏检率(5.5％,39/710)低于 SAT(7.0％,50/710);经抗原处理的 ELISA 和 SAT 均呈阳性或阴性反应血清的 O.D 值,与原血清的 O.D 值相对比,前者差异显著(P<0.05),后者差异不显著(P>0.05)。说明 ELISA 是检测奶山羊布氏杆菌病的一种简单、特异、灵敏和快速的血清学方法之一,可用于本病的诊断检疫。布氏杆菌病是一种人畜共患的慢性传染病,侵害多种家畜和动物,引起流产和不育等病症,影响畜牧业的发展,危害人民身体健康。目前常用的血清学试验方法有多种,各有其优缺点,但这些方法存在着敏感性低或因操作复杂而不易推广。因此,寻求简便、特异和敏感的检测法已为众望所归。用 ELISA 检测人、牛和猪的布氏杆菌病已有报道。现将我们应用酶联 SPA 免疫吸附试验检测奶山羊布氏杆菌病报道如下。     

检测鸡IBDV血清抗体的IHA的建立

以大肠杆菌表达的传染性法氏囊病病毒(IBDV)衣壳蛋白VP2致敏绵羊红细胞,建立间接血凝试验(IHA).对参考阳性血清(鸡新城疫病毒抗血清、鸡传染性支气管炎病毒抗血清、鸡禽痘病毒抗血清)及鸡参考阴性血清等分别进行微量IHA,加上抑制试验,结果证实其特异性高.对商品肉用仔鸡的30个血清样品、IBDV重组亚单位疫苗免疫试验鸡的20个血清样品,分别进行微量IHA和琼脂免疫扩散试验(AGID),将肉用仔鸡血清的阳性检出率进行t检验(P＜0.05);而20份免疫试验鸡血清样品IHA阳性检出率与AGID阳性检出率均为100%.对30份肉用仔鸡血清样品和20份免疫试验鸡血清样品检测得到的阳性血清的平均滴度进行方差分析,IHA的平均滴度与AGID的平均滴度之间均具有显著性差异.对20份免疫试验鸡血清及IBDV参考阳性血清以3个批次和第2批次IHA试验制剂,分别进行重复性试验,对其IHA平均滴度进行了方差分析,均无显著性差异.对20份免疫试验鸡血清以在4℃、保存期分别为3、6、9个月的IHA的试验制剂进行了微量IHA,检出的IBDV抗体平均滴度中,3个月的与6个月的无显著差异;3个月的与9个月的及6个月的与9个月的,均有显著差异,结果表明该IHA试验制剂在4℃的保存期可达6个月.     

用酶联免疫吸附试验检测鸡白血病以及控制、根除鸡白血病措施的探讨

用酶联免疫吸附试验(ELISA),对2群鸡的鸡蛋清和1株鸡的马立克氏病疫苗进行检测,发现2群鸡的鸡蛋清中,鸡白血病病毒的阳性率分别是11％和29％,鸡马立克氏病冻干苗隐藏鸡白血病病毒群体特异性(gs)抗原的阳性率为100％。本文指出我国禽苗可能带有鸡的白血病病毒,分析讨论了鸡白血病病毒的垂直传递和水平传播的规律,提出在曾祖代和祖代鸡群中,采用ELISA试验,检测鸡蛋清,能减少以至根除鸡的白血病。     

荧光免疫法、ELISA法与PCR在婴幼儿腹泻常见病毒检测中的价值

目的 探讨荧光免疫法、酶联免疫吸附试验(ELISA)法与聚合酶链式反应(PCR)检测婴幼儿腹泻常见病毒的结果与一致性.方法 对急性腹泻婴幼儿61例分别用荧光免疫法、ELISA法、PCR技术对患儿粪便标本中肠道腺病毒、轮状病毒、星状病毒及诺如病毒抗原进行检测.结果 荧光免疫法肠道腺病毒、轮状病毒、星状病毒及诺如病毒抗原阳性检出率分别为11.48％、11.48％、6.56％及13.11％;ELISA法上述病毒抗原阳性检出率分别为1.64％、27.87％、13.11％及29.51％,PCR上述病毒抗原阳性检出率分别为26.23％、1.64％、1.64％、1.64％.荧光免疫法与ELISA法对比,轮状病毒、诺如病毒抗原阳性检出率差异均有统计学意义(P＜0.05),对于轮状病毒两种方法检测结果有较好一致性;荧光免疫法同PCR对比,肠道腺病毒、诺如病毒抗原阳性检出率差异有统计学意义(P＜0.05),对于轮状病毒及肠道腺病毒,两种方法检测结果有较好一致性;ELISA法与PCR对比,4种病毒抗原阳性检出率差异均有统计学意义(P＜0.05),对于4种病毒,两种方法检测结果有较好一致性.结论 ELISA法与PCR对婴幼儿腹泻常见病毒检测一致性较高,在临床诊断中,可采用ELISA法进行初筛,再通过PCR进行确认,以提高诊断效率及准确性.     

种传病毒种子检测技术的新进展

对种传病毒的检测方法的要求是,灵敏、快速、可靠。目前,在国际上检测种子带毒的先进方法主要是以下几种:免疫电镜(ISME)、酶标免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫测定(RISA)、dot—blot免疫吸附试验(dot—blot immunoassay,又称dot-ELISA)和核酸分子杂交(Nucleic acid hybridisation)。在这些新技术中,放射免疫测定虽灵敏,能定性定量,但标记用的位同素价格昂贵、测定结果需要复杂     

大豆叶片及种子内大豆花叶病毒(SMV)的生物与免疫测定方法的比較

用生物测定(局部枯斑反应)、免疫吸附电镜(ISEM)、酶联免疫吸附试验(ELISA)三种方法对大豆叶片及种子内的SMV进行了定性定量测定。结果表明,三种方法均可用来检测叶片及种胚和子叶内的SMV,并可对其定量,结果高度吻合,相关系数达0.97以上。ELISA能测出稀释2430—7290倍病叶中的SMV,测提纯病毒的下限为70ng—20ng/ml,生物测定可测出稀释640—1280倍病叶中的SMV。种皮内含有非侵染性SMV,不能用生物方法测出,而需用免疫方法检测。     

小鼠抗重组山羊胎盘催乳素多克隆抗体的制备及其在山羊胎盘组织中定位的研究

用rcPL对6-8周龄的昆明小鼠进行免疫注射制备多抗,第3次加强免疫后第6天采集少许血清,用琼脂凝胶免疫扩散（AGID）和间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗体的产生情况;分娩后立即通过剖腹产的方法获得山羊胎盘组织,用获得的抗血清通过免疫组织化学（IHC）和间接荧光抗体试验（IFA）的方法定位胎盘催乳素。结果表明,琼脂扩散检测抗原浓度为100μg／mL,用ELISA中酶标仪检测450nm处OD值,免疫血清与阴性对照的比值P／N为7．77;IHC和IFA显示胎盘催乳素在肉阜和子叶的双核细胞及单核细胞中表达。使用背部皮下多点注射的方法对昆明小白鼠进行免疫来制备重组山羊胎盘催乳素多克隆抗体是可行的,制备的抗体能满足免疫组织化学和荧光免疫组织化学检测胎盘催乳素的要求。     

用单抗夹心ELISA快速检测鸡新城疫病毒

采用传统的病毒分离的方法将免疫鸡群泄殖腔棉拭样品盲传一代，再用新城疫单抗夹心ELISA对F1尿囊液进行新城疫病毒(NDV)检测。结果表明本方法具有良好的特异性，NDV阳性样品检出率很高，且鸡禽流感病毒(AIV)对此无干扰作用；分别检测阳性样品453份、阴性样品2959份，与动物世界卫生组织(OIE)推荐的病毒分离及鉴定、毒力试验的经典检测方法相比较，符合率为99．3％、99．7％；测定的变异系数为8％，稳定性较好，同时本法比经典的检测方法缩短检测时间7d。结果表明用单抗夹心ELISA法检测鸡泄殖腔棉拭样品F1尿囊液新城疫病毒实用、准确、特异、稳定、快速。     

猪乙型脑炎新型协同凝集试验与酶联免疫吸附试验(ELISA)方法的比较

用新型SPA(Staphylococcal Protein A)协同凝集试验对88份猪血清进行了乙型脑炎病毒(JEV)抗体检测,并与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行了对比,两种方法检测结果为:ELISA检测阳性率为62.5%(55/88),SPA阳性率为68.18%(60/88),二者阳性符合率为90.0%(54/60),总符合率为86.3%(76/88).对8份SPF猪血清进行检测,两种方法检测结果均为阴性.结果表明,SPA与ELISA检测乙型脑炎结果符合,前者更为简便和实用.