高效液相色谱法检测鸡肉中氟喹诺酮类药物残留量前处理方法的优化

【目的】建立一种用高效液相色谱法快速检测鸡肉组织中5种氟喹诺酮类药物(诺氟沙星、环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星)残留量的方法.【方法】样品的提取液由乙腈与三氯乙酸溶液(质量分数2%)按体积比1∶3的比例混合而成,流动相为乙腈-磷酸/三乙胺溶液(0.02 mol·L-1),荧光激发波长280 nm,发射波长450 nm.【结果和结论】添加低、中、高浓度水平时,回收率为84.71%~99.66%,变异系数为0.20%~4.34%.该方法检测诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星的残留定量限为10μg·kg-1,达氟沙星的残留定量限为2μg·kg-1,沙拉沙星的残留定量限为20μg·kg-1.此法操作简单、实用,灵敏度高,可以满足鸡肉食品中氟喹诺酮类药物残留检测的需要.     

QuEChERS-液相色谱法同时测定蜂蜜中6种氟喹诺酮类药物的残留

为建立一种简便、快速、重现性好的高效液相色谱-荧光检测器检测蜂蜜中的诺氟沙星、环丙沙星、单诺沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星6种氟喹诺酮残留量的方法,采用QuEChERS-液相色谱法同时测定蜂蜜中6种氟喹诺酮类药物残留。结果表明:QuEChERS测定6种氟喹诺酮的分离度较好,在0.02~0.5μg/mL具有良好的线性关系(r=0.999 9),检出限为0.97~3.91μg/kg,平均加标回收率为72%~115%。相对标准偏差在1.4%~11%。     

超高效液相色谱法检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留

为寻求快速、高效和低成本的样品分析方法,在高效液相色谱法基础上通过前处理条件及色谱条件的优化,建立快速检测鸡蛋中恩诺沙星、环丙沙星、达氟沙星和沙拉沙星残留的超高效液相色谱法(UPLC),即选用1%磷酸-乙腈作为提取溶液、水饱和正己烷作为除脂溶液、Waters Oasis HLB柱为固相萃取柱及1/4提取液过柱、89%(0.05mol/L磷酸/三乙胺)∶11%(乙腈)的流动相比例,并对建立的方法进行验证。结果表明:利用新建立的UPLC检测,4种氟喹诺酮类药物在0.2~50μg/kg线性范围良好(R20.999 7),经添加低中高3种不同浓度的混和标准液进行回收率和变异系数分析,其回收率在85.7%~94.3%,变异系数为1.50%~3.77%,最低检测限为0.17~0.59μg/kg,定量限为0.81~2.01μg/kg。该方法易于操作,准确度和精密度高,能满足大批量鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留检测需要。     

环境友好的HPLC方法检测鸡蛋中6种氟喹诺酮类药物残留

为减少有机试剂使用,减轻环境污染,提高检测效率,建立了可同时检测鸡蛋中氧氟沙星(Ofloxacin,OFL)、培氟沙星(Pefloxacin,PEF)、环丙沙星(Ciprofloxacin,CIP)、达氟沙星(Danofloxacin,DAN)、恩诺沙星(Enrofloxacin,ENR)和沙拉沙星(Sarafloxacin,SAR)6种氟喹诺酮类药物残留的环境友好型高效液相色谱荧光检测方法。鸡蛋样品用纯水提取,氯化钠盐析,加热冷冻净化,正己烷脱脂,采用0.5%甲酸水-乙腈体系作为流动相,荧光激发波长280nm,发射波长450nm检测。结果显示:OFL的线性范围为8~1 000μg/kg,DAN为0.4~50.0μg/kg,其余4种均为2~250μg/kg,相关系数大于0.99。OFL检测限为4μg/kg,DAN为0.2μg/kg,其余4种均为1μg/kg;OFL定量限为20μg/kg,DAN为1μg/kg,其余4种均为5μg/kg。6种药物添加平均回收率为80.52%~101.10%;相对标准偏差为2.99%~10.40%。     

液相色谱-质谱联用检测牛奶中氟喹诺酮类药物残留的确证方法

 【目的】建立牛奶中诺氟沙星、氧氟沙星、麻保沙星、培氟沙星、环丙沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、二氟沙星等10种氟喹诺酮类药物残留检测的液相色谱-大气压化学电离-离子阱质谱确证方法。【方法】牛奶经三氯乙酸和乙腈沉淀蛋白、聚合物反相Strata-X固相萃取柱净化、ODS2 分离后，用大气压化学电离-离子阱质谱测定。【结果】对诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星和沙拉沙星等5种药物进行了定量方法学验证：在1.0～100.0 ng•ml-1范围内线性良好（r>0.99）；以1.0、10.0、100.0 ng•ml-1浓度水平的添加回收率为60.6%～101.0%，日内变异系数≤17.5%，日间变异系数≤22.1%；检测限为0.2～0.8 ng•ml-1，定量限为0.8～2.8 ng•ml-1。【结论】此方法为一种检测氟喹诺酮类药物在牛奶中残留的高通量确证分析方法。     

高效液相色谱法测定鸡肉中的氟喹诺酮类药物

建立鸡肉中4种喹诺酮类药物的HPLC—FLD检测方法。鸡肉样品经过无水硫酸钠脱水后用酸化乙腈提取,用乙腈饱和的正己烷除去杂质,下层乙腈液经氮气吹干后用流动相定容,再加入乙腈饱和的正己烷,混匀后在高速离心机上离心,下层液体用于高效液相色谱分析。采用Xbridge C18柱分离,以乙腈-磷酸二氢钠为流动相等度洗脱,荧光检测器检测,外标法定量。4种喹诺酮类药物标准曲线的线性回归系数均在0．999以上,线性范围为0．2～50μg／L,环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星检出限为1．0μg／kg,达氟沙星检出限为0．3μg／kg。在20、40、80μg／kg添加水平下的添加回收为86．3％～102．3％,相对偏差为1．0％～4．6％。该方法具有快速,灵敏的特点,符合现行兽药残留分析的要求。     

液相色谱法测定饲料中氟喹诺酮类含量方法研究

以2％甲酸乙腈溶液为提取液,采用MCX固相萃取,荧光检测器检测,激发波长280nm,发射波长450nm,外标法定量,本项目建立了同时测定饲料中4种氟喹诺酮类药物的反相高效液相色谱分析方法。4种药物在5—500μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数R。大于0．99996。添加药物水平20--500μg／kg的回收率在75．6％一97．2％。环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星的定量检出限为20μg／kg,达氟沙星为4μg／kg。试验结果表明：该方法快速简便,准确可靠,重现性好,可用于监测饲料中氟喹诺酮类含量。     

高效液相色谱法测定石岐乳鸽中氟喹诺酮类药物残留

研究了石岐乳鸽中环丙沙星、达氟沙星、沙拉沙星和恩诺沙星4种氟喹诺酮类药物残留量的高效液相色谱测定方法。采用磷酸缓冲液提取,水饱和正己烷除脂,C_(18)固相萃取小柱净化分离,LC-FLD检测器检测。结果表明,氟喹诺酮类药在15 min内获得良好的分离,线性相关系数r2为0.999 5~0.999 6,检测限可达0.02 mg/kg,回收率范围为74.2%~93.2%。该方法净化效果良好,操作简便。     

水产品中氟喹诺酮类药物残留的测定

[目的]建立水产品中诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星3种氟喹诺酮类药物残留测定的超高效液相色谱法。[方法]以0.10%甲酸-乙腈为提取溶剂,提取液经浓缩,正己烷净化去脂,采用超高效液相色谱-荧光检测器检测3种氟喹诺酮类药物,外标法定量。[结果]该方法的相对标准偏差为1.4%~8.1%,回收率为82%~106%,3种氟喹诺酮类药物在0.01~1.00μg/m L的浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数均大于0.995,方法检出限为5.00μg/kg。[结论]该检测方法准确、快捷、高效,可广泛应用于水产品中氟喹诺酮类药物残留的检测。     

检测鸡蛋中12种喹诺酮类药物残留的HPLC方法

【目的】建立并验证同时检测诺氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、二氟沙星、噁喹酸、萘啶酸和氟甲喹等12种喹诺酮类药物在鸡蛋中残留的高效液相色谱-荧光检测分析方法。【方法】鸡蛋样品以乙腈-三氯乙酸溶液匀浆和超声提取,经反相聚合物SPE净化和浓缩;样品以乙腈-柠檬酸/乙酸铵缓冲液为流动相、经C18柱HPLC梯度洗脱分离,用荧光检测器程序波长检测。【结果】线性范围除达氟沙星为5.0～160.0 μg•kg-1外,其余11种药物为12.5～400.0 μg•kg-1。添加6个浓度测得的校正曲线的相关系数除氟甲喹为0.982以外,其它11种药物均大于0.995。添加1/2 MRL、MRL、2 MRL共3个浓度水平3批样品的回收率除萘啶酸为52%外,其它11种药物为68%～85%。批内变异系数＜8%,批间变异系数除氟甲喹1/2 MRL为18.0%和恩诺沙星1/2 MRL为18.8%外,其它药物均≤13.0%。12种药物的检测限为0.2～4.1 μg•kg-1,定量限为0.9～13.5 μg•kg-1。【结论】建立的检测鸡蛋中12种喹诺酮类药物残留的HPLC方法简便、快速、使用有机溶剂少,适用范围广,适合大量样品的筛选和定量检测。     

浙江省主要畜禽产区养殖废水中抗生素残留研究

结合固相萃取、高效液相色谱—串联质谱分析,建立了适合畜禽养殖废水中磺胺类、氟喹诺酮类、四环素类、氯霉素类等共29种抗生素残留的测定方法,废水样品经盐酸调节pH 6.0、离心后经HLB固相萃取柱净化,液相色谱—串联质谱正离子模式测定磺胺类、氟喹诺酮类、四环素类,负离子模式测定氯霉素类。空白地表水中磺胺类和氟喹诺酮类添加浓度为0.02～1.0μg.L-1,四环素类和氯霉素类添加浓度为0.04～1.0μg.L-1,回收率范围为68.6%～95.0%(n=5),相对标准偏差(RSDs)为2.8%～12.3%,方法的定量限(LOQ)为0.02～0.04μg.L-1。利用该方法对养殖废水、养殖场附近河域20个水样进行测定,检出5种磺胺类化合物和氟苯尼考。     

蚯蚓体内恩诺沙星残留的检测方法研究

为进一步研究恩诺沙星对蚯蚓的生态毒理,建立了用荧光检测高效液相色谱法测定蚯蚓体内恩诺沙星残留量的检测方法。以0.1 mol·L~(-1)磷酸液(pH12)+乙腈=1+3(V/V)作为提取液,脱脂,浓缩,再用流动相溶解。液相色谱条件:荧光检测器,激发波长280nm,发射波长450nm。流动相:0.025 mol·L~(-1)磷酸/三乙胺缓冲液(pH3.0)+乙腈=83+17(V/V)。恩诺沙星标准曲线范围5~500ng·mL~(-1),对其进行3种浓度回收率测定,回收率在81%~88%之间,平均回收率为84.5%,变异系数10%以内,恩诺沙星的最低检出限为2ng·g~(-1)。对蚯蚓进行恩诺沙星滤纸染毒,浓度分别为0.16、1.6、16、32μg·cm~(-2),每个浓度设置4个平行,对照为不加恩诺沙星的超纯水,48 h后检测各个浓度下蚯蚓体内恩诺沙星的平均含量分别为1.53、16.81、113.32、120.83μg·g~(-1)。可见,蚯蚓对外源恩诺沙星有较好的吸收,但当外源药物浓度达到一定程度后,对恩诺沙星的吸收量将不再无限制增加,且趋于稳定,验证了该测试方法是简单、快速、可行的。     

三穗鸭不同组织三种氟喹诺酮类药物残留分布研究

采用固相萃取-反相高效液相色谱法,对三穗鸭胸肉、腿肉、心脏、鸭胗和鸭肠等不同组织中氟喹诺酮含量进行检测。结果表明：各组织中环丙沙星与恩诺杀星含量均在国家标准限度内,沙拉沙星未检出。在不同组织中环丙沙星与沙拉沙星的残留规律类似。胸肉和腿肉中环丙沙星、恩诺沙星的含量显著高于其他组织,作为主要代谢器官的鸭胗和鸭肠中含量最少。     

高效液相色谱-荧光检测畜禽粪污中四种氟喹诺酮类抗生素残留

为了建立高效液相色谱-荧光测定畜禽粪污中氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星残留的分析方法,将畜禽粪便样品经乙腈超声提取,再经正己烷液-液萃取,并经氮吹浓缩,乙腈与水混合溶解残渣,过微孔滤膜,采用高效液相色谱-荧光检测,以0.01 mol/L四丁基溴化胺(pH 3.0)/乙腈(94/6,V/V)为流动相,于激发波长280 nm、发射波长480 nm处进行检测。结果表明,畜禽粪污样品中4种喹诺酮类抗生素的平均回收率为77.8%～98.2%,相对标准偏差为3.5%～7.2%,检测限为0.005～0.010μg/kg。该方法简便、快速,可满足畜禽粪污中4种喹诺酮类兽药残留量的同时检测。     

三种兽用氟喹诺酮类药物对人工诱发鸡霍乱的疗效比较

采用试管肉汤两部类法,测得恩诺沙星、单诺沙星脑二氟沙星对鸡多杀性巴氏杆菌的最小抑菌质量浓度分别是０．０５、０．２及０．４ｍｇ／Ｌ,按５ｍｇ／ｋｇ的剂量,分别给人工诱发霍乱病鸡内服恩诺沙星、单诺沙星脏一氟沙星,每１２ｈ给药１次,连续３ｄ,这些药物对鸡霍乱的治愈率分别为９６．７％、８３．３％及８３．３％。而感染对照鸡的死亡率为１００％。     

SA-HPLC-MS/MS法快速检测豆芽中4种喹诺酮类药物残留量

采用平行定量浓缩仪—高效液相色谱—串联质谱(SA- HPLC- MS/MS)方法检测豆芽中4种喹诺酮(QNs)类药物的残留量.以氘代试剂为内标,样品经酸化乙腈萃取后,平行定量浓缩仪浓缩,用正己烷脱脂,采用HPLC- MS/MS选择反应监测(SRM)正离子模式,可同时对豆芽中QNs进行定性和定量测定.结果表明:QNs的检出限可达0.5 μg/kg,定量限可达1μg/kg.在2.5 ～ 200.0 ng/mL范围内峰强度与质量浓度的线性关系良好(r ＞0.999),方法的平均回收率为80％ ～ 113％.     

红星凤梨组织培养与快速繁殖

以红星凤梨为试材,研究了生长调节物质、外植体类型、抑菌剂等对离体不定芽再生的影响。在MS＋TDZ2．0mg·L^-1＋NAA0．5mg·L^-1培养基上,腋芽、顶芽和叶片均可以诱导再生不定芽,腋芽和顶芽的不定芽再生频率相差不大,均为37．2％-53．3％,但叶片不定芽再生频率较低,仅为2．8％-13．3％MS＋0．2—0．5mg·L^-1 TDZ＋0．05mg·L^-1 NAA＋100g·L^-1椰子水为适宜的不定芽增殖培养基;试管苗生根的适宜培养基为MS＋IBA2．0mg·L^-1＋100g·L^-1椰子水;不定芽继代培养时,在灭菌后的培养基中加入25—50mg·L^-1青霉素G钠能有效控制内生菌的污染。     

Studies on Preparation and Characteristics of Monoclonal Antibodies Against Enrofloxacin and Cross-Reactivity of Related Fluoroquinolones

An ester activation method was employed to couple enrofloxacin(ENFX) to the carrier proteins BSA and OVA. The conjugates ENFX-BSA and ENFX-OVA were identified with an UV spectrophotometer and amino acid automation analysis instrument, and resulted in conjugates with 48 ENFX molecules per carrier molecule(BSA). Splenocytes from mice immunized with ENFX-BSA were fused with SP2/0 myeloma cells and hybridomas secreting antibodies against enrofloxacin were selected and cloned. Two stable monoclonal antibodies, 2C5, 5D5 of the subclass IgG2a, were isolated. Using antibody 5D5, an indirect competitive inhibition enzyme-linked immunosorbent assay (Ci-ELISA) was developed for the quantitative detection of enrofloxacin and its metabolites. The IC50 of the standard curve was 21.67 ng mL-1 and the limit of detection for enrofloxacin was 0.13 ng mL-1. This method was sensitive and had a linear range from 0.13 to 10 000 ngmL-1 (r=-0.9782). Monoclonal antibody 5D5 exhibited high relative affinity to enrofloxacin, and the cross-reactivities with ciprofloxacin,marbofloxacin, sarafloxacin and danorfloxacin were 110.8, 27.40, 71.05 and 37.41%,respectively. Three non-fluoroquinolones of cefadroxil, chloramphenicol, sulfadimethoxine were tested and there was no cross-reaction between them.