诱导富集胞外灵芝酸A的液态发酵培养基优化

采用响应面法对诱导富集三萜类化合物灵芝酸A的液态培养基配方进行优化,得到最优配方为：葡萄糖35 g,组氨酸0.7 g,复合VB 40 mg（VB1 6 mg,VB2 3 mg,VB6 0.4 mg,烟酰胺20 mg,泛酸钙2 mg）,牛磺酸0.1 g,蒸馏水1 000 mL。用5% NaOH以及5% HCl调节pH至6.4。在26 ℃、160 r·min-1的条件下,此培养基上灵芝菌丝生物量为11.45 g·L-1,灵芝酸A的产量为137.98 mg·L-1。     

通过多种培养基优化长白落叶松体细胞胚再生

为建立稳定高效的落叶松体细胞胚再生体系,本研究以长白落叶松未成熟合子胚作为外植体材料,选择生长良好的胚性愈伤组织,依次通过液体培养基A,半固体培养基B,固体培养基C三种成熟培养基诱导体细胞胚形成。其中,愈伤诱导培养基为S培养基+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+KT 0.3 mg/L,蔗糖20 g/L,琼脂3 g/L;继代培养基为S培养基+2,4-D 0.15 mg/L+6-BA 0.05 mg/L+KT 0.05 mg/L,蔗糖30 g/L,琼脂6 g/L;成熟培养基A为S培养基+PEG-4000 100 g/L+ABA 15 mg/L+Ag NO310 mg/L,蔗糖45 g/L的液体培养基;成熟培养基B和C分别为添加了2 g/L和10 g/L琼脂的成熟培养基A。该方法体胚成熟时间为32 d左右,同步率为78.0%,正常形态体胚比例为83.0%。正常形态体胚形成效率可达223.0个/g胚性愈伤,体细胞胚萌发率可达47.2%。相较于单一成熟培养基,缩短成熟时间,使体胚生成更同步,并提高了体胚产量和质量。为落叶松体胚再生的商业化提供了途径,为大规模化育种繁殖、生理生化研究和转基因改良带来极大的方便,具有较大实际应用价值。     

树舌灵芝发酵产漆酶培养基优化

在单因素试验的基础上,采用Plackett-Burman设计对影响树舌灵芝产漆酶活性的因素进行了评价,筛选出具有显著影响的因素并优化了树舌灵芝产漆酶培养基的主要成分。结果表明,产酶培养基中小麦麸皮、豆粕、硫酸铜和香兰素的添加量对树舌灵芝产漆酶活性具有显著影响;预测得到最佳培养基组成为:小麦麸皮(20 g/L)、豆粕(2 g/L),硫酸铜(0.625 g/L)和香兰素(0.037 5 g/L);优化培养基后漆酶活性达到45.85 IU/m L,约为优化前的56倍,为大规模发酵生产漆酶提供技术支持。     

活性炭对小白菜游离小孢子培养的影响

以24个小白菜品种为材料,通过在NLN培养基中添加不同浓度活性炭,研究其对游离小孢子培养的影响.结果表明:在NLN-13培养基中添加活性炭(0.5 g/L),有利于小孢子胚的诱导和形成,供试材料(N4,N8)添加活性炭处理胚诱导率较未添加活性炭的处理分别提高19,66.5倍.采用添加活性炭(0.5 g/L)的NLN培养基对24份小白菜品种进行游离小孢子培养,有20份材料诱导出胚,培养成功率为83.3%.表明添加活性炭的培养基对小白菜游离小孢子培养有较好的效果.不同基因型间胚诱导率差别较大,每花蕾诱导胚数为0.4～86.7个.依据胚诱导率的高低可将其分为极易诱导、易诱导、难诱导和不能诱导出胚4类.B5 6-BA 0.2 mg/L NAA 0.02 mg/L 活性炭0.5 g/L 3%蔗糖 1%琼脂培养基有利于幼胚长成植株.     

玉米幼胚再生体系的建立

为建立高效稳定的玉米再生体系,以玉米幼胚为受体材料,研究了基因型对胚性愈伤组织诱导率的影响以及适宜玉米幼胚生长的诱导培养基、继代培养基、分化培养基及生根培养基。结果表明,基因型可显著影响胚性愈伤组织诱导率,H99×A188的诱导率最高(45.28%);N6培养基适合用于胚性愈伤组织的诱导同时也适合继代培养;激素组合为MS+6-BA 1.0 mg/L+KT 2.0 mg/L的分化培养基出苗率和转化率最高,易成活;1/2MS培养基附加IBA1.0 mg/L和1.0 g/L活性炭适合于生根培养。     

铁皮石斛愈伤组织诱导研究

研究了8种不同浓度的2,4-D培养基和3种不同的培养条件对铁皮石斛愈伤组织诱导的影响。结果表明:诱导愈伤组织时,培养基以0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA及1.5 mg/L 2,4-D+20.0 g/L蔗糖+200.0 g/L马铃薯泥+2.0 g/L活性碳+10.0 g/L琼脂的培养基效果最好,在暗培养15 d后光培养的条件下诱导愈伤组织效果最好。     

水稻植株再生与农杆菌介导的遗传转化研究

本研究以不同籼稻品种的成熟胚为材料, 研究了不同培养基对愈伤组织诱导、分化和植株再生的影响,并研究了利用农杆菌介导bar基因和ipt基因的遗传转化技术.结果表明,采用NBD (N6salts B5Vitamin casamino acids 500 mg/L proline 500 mg/L glutamine 300 mg/L mannitol 36.4 g/L sucrose 30 g/L 2,4-D 2 mg/L 6-BA 0.2 mg/L phytagel 2.5 g/L,pH 5.8) 为诱导培养基,MSD(MS casamino acids 500 mg/L proline 500 mg/L glutamine 300 mg/L mannitol 36.4 g/L sucrose 30 g/L 2,4-D 2 mg/L 6-BA 0.2 mg/L phytagel 2.5 g/L,pH 5.8)与NBD培养基交替继代培养,籼稻愈伤组织诱导率高、质量较好;采用MSR3c(MS casamino acids 500 mg/L glutamine 300 mg/L proline 500 mg/L mannitol 36.4 g/L maltose 30 g/L TDZ 0.2 mg/L phytagel 5 g/L pH 5.8)为分化培养基,愈伤组织分化率均在90%以上.本研究利用农杆菌介导,将Act启动子驱动的抗除草剂基因(bar)和异戊烯基转移酶基因(ipt)构建的融合基因表达载体对水稻进行遗传转化.初步确定了愈伤组织筛选及分化培养基附加除草剂(glufosinate ammoniun)4 mg/L、头孢霉素300 mg/L,愈伤组织预培养2-3天,共培养基中加入乙酰丁香酮浓度为39 mg/L,共培养2-3天.通过上述培养条件,已获得移栽成活的水稻转基因植株.     

郁金香试管种球诱导的研究

以郁金香试管苗为试材,研究了激素浓度和蔗糖浓度、温度、光照等因素对试管种球诱导的影响.结果表明:在培养温度20～25℃,每天光照12 h,光强1 500 lx,蔗糖浓度为90 g/L,KT和NAA分别为0.03 mg/L和0.3 mg/L的MS培养基上,诱导郁金香试管微种球较理想,且诱导的试管微种球可保持品种原有的特性.     

桔梗试管苗再生体系优化研究

桔梗有极高的药用作用和观赏价值.本试验以桔梗试管苗为外植体,通过筛选最适桔梗试管苗叶片愈伤组织诱导、分化、生根激素种类和浓度,对其再生体系进行优化.结果表明,最适的愈伤组织诱导培养基为:MS+4 mg/L 2,4-D+ 30 g/L蔗糖+6.5 g/L琼脂;最适分化培养基为:MS+ 0.5 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6.5 g/L琼脂;最适生根培养基为:1/2 MS+0.25 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6.5 g/L琼脂.     

低酚陆地棉直接体细胞胚胎发生和植株再生

选用低酚陆地棉无菌苗下胚轴为材料进行全固体组织培养,直接诱导获得了胚性愈伤组织,并进一步分化为再生植株.结果表明,激素是影响棉花直接体细胞胚胎发生的重要因素.MSB培养基中添加2,4-D有利于愈伤组织的形成,却不能直接诱导获得胚性愈伤组织.MSB培养基中添加IBA和BA也不能直接诱导获得胚性愈伤组织.MSB培养基附加适当浓度的IBA和KT能直接诱导出胚性愈伤组织.最适激素组合(1.0 mg/L IBA,0.5 mg/L KT)能使诱导棉花下胚轴产生大量胚性愈伤组织,并且在3个月内就可肉眼观察到不同发育时期的胚.MSB培养基中附加1.0 g/L谷氨酰胺和0.5 g/L天门冬酰胺有利于胚萌发成苗.本研究建立了简便高效的棉花直接体细胞胚胎发生和植株再生培养体系,从胚性愈伤组织诱导到植株再生约需5～6个月时间.     

一株产胶原酶海洋微生物发酵条件的研究

于海洋污泥中筛选得到的Aeromonas sp.F3所产的胞外酶对胶原蛋白有水解作用,采用单因素试验法对Aeromonas sp.F3的发酵条件及培养基组分进行全面优化,提高该胶原酶生产菌的产酶效率。经优化试验结果表明,该菌株最佳发酵条件为：培养时间24 h,温度40℃,初始pH为8,装瓶量80~100 mL/250 mL;培养基组分为：葡萄糖3 g/L,酵母浸粉9 g/L,NaCl 5 g/L,MnSO4 10 mg/L。经优化试验明显提升了该菌株的产酶能力。     

影响文心兰原球茎增殖培养之因素分析

以蜜糖文心兰茎尖诱导形成的原球茎（PLB）为试材，研究了影响文心兰原球茎增殖的主要因素，结果表明：采用改良1号为基本培养基，配合6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L，添加香蕉泥50g/L+Peptone 1g/L作为有机添加剂、2%的白糖作为外源碳源，以液体振荡方式进行培养，这样的组合是原球茎增殖培养的最佳组合，能够获得最大的繁殖效率，有利于原球茎形态的保持。研究还表明，同一外植体的原球茎繁殖代数控制在9~10代即繁殖种苗数量控制在1.5万~2.0万以内，既能保证较高的增殖速度又能避免变异种苗的发生。     

基于营养培养基发酵的虫草素功能饮料配方优化

使用自行设计的次生代谢产物诱导营养培养基发酵蛹虫草菌丝,并将发酵后的培养液制成一种新型保健饮料。通过响应面试验,研究了培养基中的碳源、氮源、生长因子对虫草素产量的影响,并基于此发酵液,调配并研究了甜味剂、酸味剂、发酵液添加量对饮料感官品质的影响。结果表明,虫草素诱导营养培养基的最优配方为:葡萄糖添加量25 g/L,精氨酸添加量0.4 g/L,复合B族维生素20 mg/L(每mL含维生素B13 mg、维生素B21.5 mg、维生素B60.2 mg、烟酰胺10 mg、泛酸钙1 mg),蒸馏水1000 mL,pH 6.4。在此培养基上蛹虫草菌丝生物量为9.14 g/L,虫草素含量为68.54 mg/L。发酵液保健饮料的最佳配方为:D-木糖添加量5%,柠檬酸添加量0.1%,菌丝发酵液添加量30%。制得的饮料成品符合国家相关标准,颜色淡棕黄色,口味清淡,酸甜适宜,虫草素含量达到40.012~41.364 mg/L。     

不同果树枝条栽培灵芝基质配方研究

通过利用农业副产物果树枝条进行灵芝栽培基质配方优化研究,筛选出适合果树可持续发展的最佳灵芝栽培配方。本研究利用桃树、梨树和苹果树枝屑,通过不同配方优化设计进行灵芝优良菌株的栽培研究,对灵芝子实体的农艺性状进行差异分析,同时结合其氨基酸和矿质元素含量分析。结果表明：通过对灵芝子实体农艺性状差异分析,苹果-2配方表现最好;通过对氨基酸含量分析,配方组氨基酸含量顺序为桃树组配方＞梨树组配方＞苹果树组配方;综合9个配方中灵芝子实体内矿质元素含量分析,梨树-1配方表现最佳。以上不同的配方栽培出的灵芝其产量、氨基酸和矿质元素含量各不相同,芝农可根据不同的需要而选择合适的灵芝栽培基质配方。     

魔芋愈伤液体培养与植株再生的研究

以魔芋颗粒状愈伤组织为试材,进行了液体培养及植株再生诱导的探讨。结果表明,MS BA 1.0 mg/L 2,4-D 0.2 mg/L 蔗糖30 g/L 琼脂6.0 g/L培养基适合从芽鞘诱导颗粒状愈伤组织。获得的愈伤组织切割成0.3cm左右在MS BA 0.05 mg/L NAA 0.1 mg/L 蔗糖30 g/L PVP 1.0 g/L液体培养基中振荡培养,建立液体培养体系。液体培养材料的生长曲线呈上升的半抛物线型,从第6天到第12天期间增重占整个培养周期增重的80%以上,随着液体培养材料的生长,培养液pH值上升。将液体培养12 d的材料转到1/2MS BA 0.6 mg/L NAA 0.1 mg/L 葡萄糖30 g/L 维生素C100 mg/L 琼脂6.0 g/L培养基上,进行愈伤组织的分化培养;然后将长到出叶期的大芽切割转入到1/2MS NAA 0.1 mg/L 蔗糖30 g/L 琼脂6.0 g/L生根培养基诱导生根,形成再生植株。     

杜梨子叶离体再生体系的建立

为梨树品种改良、遗传转化及功能验证奠定基础,以杜梨(Pyrus betulaefolia)子叶外植体为试验材料,研究了基本培养基、植物生长调节剂、暗培养时间、碳源、外植体等因素对其再生能力的影响,筛选出适合杜梨不定芽分化的培养及生根培养条件,建立杜梨子叶的再生体系。结果表明,子叶诱导不定芽生长最佳培养基为NN69+6-BA5mg/L+IBA0.05mg/L+蔗糖35g/L,再生频率为100%;出芽后最佳继代培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,平均再生芽数4.84;诱导不定芽生根最佳培养基为1/2MS+IBA1.0mg/L+蔗糖30g/L,生根率为80%。通过上述条件的优化,建立了杜梨子叶高效的再生体系。     

玉米自交系高频率再生因素研究

以玉米自交系幼胚为外植体，就不同基因型、不同激素对其愈伤组织诱导和植株再生的影响进行了研究，并建立了玉米自交系高频率再生系统。方差分析表明：玉米自交系的高频率再生受基因型、激素以及二者间的互作影响。其中基因型是最重要的影响因素。同时，再生植株的分化还受到诱愈培养基、分化培养基、诱愈培养基与分化培养基     

一株黑曲霉转化低品位磷尾矿能力的研究

研究了在液体纯培养条件下,低品位磷尾矿粉用量、不同氮源和pH值对黑曲霉（Aspergillus niger）溶磷活性的影响,并初步探讨了其溶磷机制。结果表明,A. niger产生的有机酸主要是草酸,它在尾矿粉的溶解浸磷过程中起重要作用。磷尾矿粉的用量为5 g/L时,最大溶磷量是56.02 mg/L,溶磷率高达20.87%;磷尾矿粉的用量超过5 g/L时,溶磷能力显著降低,溶磷率由5 g/L时的20.87%降至40 g/L时的0.65%。此外,以(NH4)2SO4作为氮源时,最大溶磷率是以NaNO3为氮源时的2.17倍。pH值在5~6之间变化时,溶磷率达到最高。     

生防细菌SY286发酵条件优化

为探讨生防细菌SY286 菌株液体发酵条件,提高其活性次级代谢产物的产量,以菌体生物量和发酵液抑制葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola)活性为指标,采用单因子试验和正交试验对菌株的最适发酵培养基成分及发酵条件进行优化。结果表明,菌株SY286 最适发酵培养基为葡萄糖10 g/L、牛肉膏7.5 g/L、氯化钠2.5 g/L、硝酸钾5 g/L;最佳发酵培养条件为培养温度27℃、培养时间72 h、初始pH 7.0、250 mL三角瓶装液量90 mL、接种量体积分数5%、摇床转速150 r/min。在最佳发酵培养基和培养条件下,菌株SY286发酵液抑菌率达到99.19%,抑菌能力提高6.98%。     

一种海洋细菌显色分离培养基优化

针对一种海洋细菌显色分离培养基的成分进行了探究。通过改变科玛嘉海洋细菌培养基中硫代硫酸钠(0.500、0.375、0.250、0.125 g/L),ONPG(1.5、1.0、0.5 g/L),纤维二糖(4.0、3.0、2.0、1.0 g/L)的浓度,观察培养基中海洋细菌菌落形态,菌落面积大小和菌落颜色,统计对比出海洋细菌在不同浓度培养基上生长的状况。结果在硫代硫酸钠浓度为0.25 g/L,纤维二糖浓度为2.0 g/L,ONPG浓度为0.5~1.0 g/L时,培养基上菌落清晰,个体适中且菌落数较多,有较好的检测效果。说明该研究在保证海洋细菌显色分离培养基分离效果前提下,降低了海洋细菌显色培养基配制成本,同时,提升了其对海洋细菌的检测效果。