黑麦草属DNA条形码鉴定技术研究

以毒麦、田毒麦、多花黑麦草、多年生黑麦草、硬直黑麦草、高羊茅与狗牙根等禾本科的7种植物为材料，拟采用 DNA 测序、特异性位点比对、种间遗传距离测定、建立系统树等分析候选 DNA 条形码 psbA-trnH 鉴别黑麦草属常见植物的能力。实验结果表明，以 psbA-trnH 为 DNA 条形码时，建立的系统发育树能较好区分毒麦和田毒麦与其他几种植物。psbA-trnH 序列可以作为黑麦草属植物的潜在条形码。     

基因芯片检测5种动物冠状病毒的初步研究

采用蔗糖密度梯度离心,纯化浓缩犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪呼吸道冠状病毒(PRCV)的细胞培养物,分别设计7,17,11,10和4对引物,构建了49个基因片段的克隆。煮沸裂解法制备质粒DNA,回收PCR扩增产物,点制冠状病毒基因芯片。抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,与芯片进行杂交检测,淘汰交叉的克隆片段。结果表明:克隆CCV1,CCV2,CCV5和CCV7可特异诊断CCV,克隆FCV6,FCV7,FCV8和FCV9可特异诊断FCV,克隆FIPV2,FIPV7,FIPV8和FIPV9可特异诊断FIPV,克隆PRCV1,PRCV2和PRCV3可特异诊断PRCV,克隆TGEV3,TGEV4,TGEV5和TGEV6可特异诊断TGEV。将这些特异克隆扩增片段重新点制基因芯片,与病毒PCR产物杂交,未发现交叉现象。基因芯片检测比传统PCR敏感1000倍,可有效应用于这5种动物冠状病毒的检测与区分。     

诊断剂量法在黄曲条跳甲抗性监测中的应用

利用诊断剂量法测定的毒死蜱、丁硫克百威、氯氰菊酯3种杀虫剂的敏感个体与抗性个体诊断剂量分别为40和600mg.L-1、50和800 mg.L-1、63和1000 mg.L-1.根据诊断剂量,利用滤纸药膜法测定4个菜区黄曲条跳甲成虫的抗性个体频率,并与点滴法、浸叶法测定结果进行比较分析.结果表明利用诊断剂量法确定的平坡诊断剂量监测田间种群的药剂敏感性,基本上能够反映黄曲条跳甲田间种群的抗药性水平.因此,诊断剂量法也是一种可供选用的害虫抗性监测方法.     

土地流转地区性差异及其影响因素的分析——基于浙江3市的对比分析

土地流转是农村资源优化配置的重要方式,在不同的地区,土地流转率存在较大的差异,一般认为经济越发达,农户土地流转的意愿越高,土地流转越频繁.但在发达地区,土地流转率都比较高的情况下,具体的土地流转行为仍然存在较大的差别.该研究基于对浙江省余姚市、临安市和丽水市3个地区的调查,分析各地区农户土地流转行为的差异,结合地区经济状况分析造成这些差异的原因,并就如何提高土地流转效率、缩小土地流转的地区差异提出政策建议.     

金正日花叶片组培的初步研究

以金正日花幼嫩叶片为外植体进行组织培养研究。结果表明：采用培养基1／2MS BA 1．0mg／L NAA 0.1mg／L有利于愈伤组织的诱导和不定芽的分化；采用培养基1／2MS BA 0．7mg／L IBA 0.07mg／L丛芽增殖效果好，增殖率达到5．8；采用1／3MS NAA 0．6mg／L AC 1．0g／L为生根培养基，生根效果最佳。     

进口动物性饲料中沙门氏菌的分离鉴定

通过常规分离培养鉴定技术，对上海口岸2001年1－6月份进口的动物性饲料498份进行了沙门氏菌的分离鉴定。结果共分离到沙门氏菌23株，分离率为4．62％（23／498）。其中，鱼粉164份，阳性6份，阳性率3．66％（6／164）；肉骨粉86份，阳性12份，阳性率为13．95％（12／86）；明虾壳27份，阳性5份，阳性率18．52％（5／27）；乳清粉和饲料添加剂类221份，阳性0份，阳性率0％。最终对21株沙门氏菌进行定型。     

犬猫3种冠状病毒基因克隆的构建与芯片检测技术

蔗糖密度梯度离心纯化浓缩犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)和猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的细胞培养物,分别设计7、17、11对引物,对病毒RNA进行反转录和PCR扩增,回收PCR产物连接pGEM-T载体并转化大肠杆菌TGI,构建35个基因片段的克隆。煮沸裂解法制备质粒DNA,回收PCR扩增产物,点制冠状病毒基因芯片。抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,与芯片进行杂交检测,淘汰交叉的克隆片段,每种病毒只选择其4对引物克隆的基因片段。将特异克隆扩增片段重新点制基因芯片,与病毒样品PCR扩增产物杂交,未发现交叉现象。基因芯片检测比传统PCR敏感1000倍,可有效应用于3种病毒的检测与区分。     

出口渔场灭鲑气单胞菌灭鲑亚种的分离鉴定

灭鲑气单胞菌 (Ａｅｒｏｍｏｎａｓｓａｌｍｏｎｉｃｉｄａ)属弧菌科 (Ｖｉｒｂｒｉ ｏｎａｃｅａｅ)气单胞菌属 (Ａｅｒｏｍｏｎａｓ) ,为革兰氏阴性短杆菌 ,在世界各地都有分布。本菌营养要求不高 ,专性需氧 ,可引起多种水生动物的传染病 ,主要有疥疮病等[1] 。近期澳大利亚等国家对我国出口的观赏鱼要求检疫此菌。为此 ,我们对上海地区所有的观赏鱼出口渔场开展了该病菌的监测工作 ,并在某渔场送检样品中分离到 1株革兰氏阴性杆菌。经鉴定为灭鲑气单胞菌灭鲑亚种 ,结果报告如下。1　材料和方法1.1　病原菌分离无菌取肾脏划线接种于ＴＳＡ…     

基于α-乳白蛋白基因序列的牛奶过敏原PCR检测

采用收集牛奶中脱落体细胞的方法提取牛奶DNA,针对牛奶过敏原蛋白α-乳白蛋白基因序列设计引物α-La-F/R,筛选适宜的实验条件,建立了检测牛奶过敏原的PCR方法.结果表明:PCR反应的最佳退火温度为56.5℃,引物浓度0.15μmol/L,循环数35,进一步实验表明该方法特异性良好,检测灵敏度可达到0.04ng DNA.将建立的PCR方法应用于10种食品的牛奶过敏原检测,实验结果与商品标示一致,表明该方法具有较高的准确性和可靠性,适用于实际商品中牛奶过敏原的检测.