葡萄总RNA提取方法的研究

针对葡萄组织中多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了改进SDS/酚法、异硫氰酸胍法和市售总RNA提取试剂盒等不同的提取方法,3种改进方法均能从葡萄幼嫩叶片中提取到总RNA。其中改进的SDS/酚法能有效抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,能够从成熟的叶片和完熟果实的果皮中获得质量高、完整性好的总RNA,28SrRNA亮度约为18SrRNA的2倍,A260/A280介于1.8～2.0之间,A260/A230大于2.0,且总RNA产率高,其中幼叶总RNA产率为261.20μg/g,成熟叶产率为191.40μg/g,完熟果皮产率为31.50μg/g,完全适于进行DDRT-PCR、Northernbolt和cDNA文库构建等研究。且该方法具有快速、简单、有效的特点。     

核桃内果皮RNA提取方法研究

以核桃果壳硬化期的内果皮为试材,针对核桃内果皮木质化程度高且富含多酚多糖的特点,比较CTAB法Ⅰ、CTAB法Ⅱ和试剂盒3种方法提取核桃内果皮RNA的效果。结果表明:3种方法提取的RNA均可见3条带。CTAB法Ⅰ提取的RNA略微拖带,OD_(260)/OD_(280)为1.540,RNA产率为75.9μg/g,RNA完整性差,质量低;CTAB法Ⅱ的RNA图谱较完整,但亮度较弱,OD_(260)/OD_(280)为1.801,产率为86.1μg/g,但RNA提取过程耗时太长;试剂盒法提取的RNAOD_(260)/OD_(280)为2.055,RNA产率96.4μg/g,RNA图谱清晰、稳定、明亮,证明得到的RNA多糖及酚类等去除较彻底,纯度、完整性和产率均较高。因此,应用复杂植物总RNA提取试剂的试剂盒法可获得高质量与高产率的核桃内果皮总RNA,完全满足后续分子生物学研究。     

巨大口蘑子实体总RNA提取方法的比较

为给巨大口蘑cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)等后续试验提供高质量的RNA,以巨大口蘑子实体为试验材料,筛选最适的巨大口蘑总RNA提取方法。采用Trizol法、CTAB-LiCL法和试剂盒法提取巨大口蘑总RNA,并对所提取的总RNA浓度、A260/A280、A260/A230以及凝胶电泳效果等指标进行比较分析。结果表明,3种方法都可以提取巨大口蘑子实体总RNA,CTAB-LiCl法提取总RNA的A260/A280为1.92,A260/A230为2.25,质量浓度为235μg/g,说明其完整且纯净;而Trizol法和试剂盒法提取总RNA的A260/A230均小于2.0,说明提取RNA中存在蛋白质、酚类等杂质,且RNA纯度低,其质量浓度分别为147μg/g、89μg/g。CTAB-LiCl法提取的巨大口蘑总RNA浓度高,纯度也较理想,凝胶电泳效果好,是进行后续相关研究的较佳选择。     

李果实果肉组织RNA提取方法的比较分析

以中国李品种‘槜李’的果肉组织为试材,比较了Trizol法、RNA提取试剂盒和改良的CTAB法提取RNA的效果,筛选出适合李果实果肉组织总RNA的提取方法。结果表明:Trizol法和RNA提取试剂盒均不能得到完整的RNA;改良的CTAB法能有效去除多糖,28S条带的荧光亮度是18S条带的1.5~2.0倍,D260/D280值都在1.8~2.1,样品的平均得率为770.96~1 029.04ng/μL,RT-PCR结果扩增出了特异性条带,说明改良CTAB法从李果实果肉组织中提取的RNA质量高、完整性好、产率高,完全可以用于后续的分子生物学试验。     

富含多糖的甜瓜果肉中提取总RNA方法的比较研究

以甜瓜品种河套蜜瓜果肉为试验材料,比较了异硫氰酸胍法、CTAB法和SDS法3种RNA提取方法,结合KAc沉淀多糖和低浓度乙醇沉淀多糖2种去糖方法。结果表明:异硫氰酸胍法结合KAc沉淀多糖的去糖效果最佳,提取的RNA中28S亮度约为18S的2倍,且OD260/OD280值在1.8以上,RNA产率为64.48μg/g。经RT-PCR获得了乙烯受体基因etr1长达2.3 kb的cDNA特异性条带,说明异硫氰酸胍结合KAc沉淀多糖法从甜瓜果肉中提取的RNA质量好、产率较高、完整性好,适合于甜瓜进一步的分子生物学研究。     

刺山柑总RNA提取方法的比较研究

以刺山柑为试材,研究比较了改良SDS提取法、RNApure Plant Plus Reagent法、RNAplant Plus Reagent法和RNAprep Pure Plant Kit法提取总RNA的效果,以期寻找一种适于野生刺山柑叶片高质量总RNA最佳提取方法。结果表明:4种方法提取的总RNA均可见28S和18S2条电泳谱带,RNAprep Pure Plant Kit法获得的RNA图谱条带清晰、明亮、稳定,28S rRNA亮度约是18SrRNA的2倍,OD260/OD280为2.00,产率为175.3μg/g,除RNAprep Pure Plant Kit法能够从叶片中提取到完整性好、纯度高及产率高的总RNA外,其它3种方法提取的总RNA均存在降解及DNA和蛋白等污染,经cDNA-SRAP分析检测,此方法获得的RNA反转录后能扩增出清晰稳定的多态性条带,能够满足后续试验的要求。进一步采用RNAprep Pure Plant Kit法从刺山柑幼苗整株、根、茎及叶中能够获得高质量的总RNA,因此,RNAprep Pure Plant Kit法适合刺山柑总RNA的提取。     

适于SSR分析的树莓基因组DNA的快速提取

通过改良CTAB法对不同品种的树莓幼嫩叶片进行DNA提取,并对得到的DNA进行了电泳检测、含量测定和SSR分析.结果表明:该方法所提DNA的纯度和产率都较高,OD260/OD280比值均介于1.7～1.9之间,OD260/OD230比值介于2.0～2.5之间,无降解现象,RNA去除干净,产率均在50～130μg/mL之间.经SSR-PCR分析条带清晰,多态性好,说明此方法提取的树莓基因组DNA完全适于SSR分析.     

适合转录组测序的苹果果实RNA提取方法的筛选

为了筛选适用于转录组测序的苹果果实RNA提取方法,试验以苹果叶片、野生苹果未成熟和成熟果实、栽培种苹果成熟果实为材料,采用7种方法对4种材料进行RNA提取,并通过凝胶电泳、Agilent 2100 RNA芯片对提取的总RNA进行质量检测。结果表明,采用的7种方法中有2种方法可以成功提取4种材料的RNA,证实改良CTAB法是适合转录组测序的苹果果实RNA提取方法。     

分蘖洋葱叶片RNA提取方法的比较和分析

以新鲜的分蘖洋葱叶片为材料,比较了Trizol法、Trizol改进法、SDS法、SDS改进法以及柱式植物RNA提取法提取总RNA的效果。结果表明:Trizol法和Trizol改进法所提取的RNA得率很低,且不能有效除去叶片中的多糖成分;SDS改进法能够有效的去除分蘖洋葱叶片中的多糖,提取的RNA中28S RNA亮度约为18S RNA的2倍,OD260/OD280值介于1.7~2.2之间,但RNA的得率偏低,约为56.32μg/g;柱式植物RNA提取法提取的RNA 28S、18S、5S条带清晰,完整性好,RNA的得率最高,为123.58μg/g,完全适合于分蘖洋葱进一步的分子生物学研究。     

枇杷果实总RNA的提取及八氢番茄红素合成酶基因(PSY)片段的克隆

【目的】为从枇杷果实中提取高质量的RNA,【方法】以枇杷果实为材料,对6种总RNA提取方法进行分析和比较。【结果】结果表明,在裂解前先用70%丙酮和80%乙醇分别对枇杷果皮和果肉进行预处理,再结合CTAB-LiCl法,得到的总RNA质量较好,OD260/OD280在1.8～2.2,OD260/OD230超过2.0,得率分别为幼果果皮56.78μg.g-1,幼果果肉40.62μg.g-1,成熟果果皮40.86μg.g-1,成熟果果肉9.24μg.g-1;并根据其他植物的八氢番茄红素合成酶基因(PSY)保守区设计引物,用以上方法提取的RNA为模板进行RT-PCR,得到453 bp的基因片段,其推导的氨基酸序列与其他植物的同源性高达95%,推测该片段为PSY基因。【结论】先用70%丙酮和80%乙醇分别对枇杷果皮和果肉进行预处理,再结合CTAB-LiCl法,得到的RNA质量好,可用于后续的分子生物学研究。     

柑橘组织RNA提取方法研究

从操作耗时、所得RNA产量和质量等方面比较了5种RNA提取方法提取甜橙叶片、幼果、成熟果实果皮和汁囊组织RNA的效果。结果表明,改良Bugos法能从上述4种组织中获得较高产量和质量的RNA。用该方法提取的温州蜜柑成熟果实果皮RNA经RT-PCR扩增成功得到了蔗糖磷酸合成酶cDNA片段。该方法还可适用于猕猴桃、梨、甜瓜、龙眼、苹果和桃果肉RNA的提取。     

Prediction of Ripening Stage of Cameo Apple Using Fourier-Transform Infrared Spectroscopy

ABSTRACT

Traditionally, farmers determine when a crop is ready for harvest by observing sensible attributes. They inspect the color or other physical observables which their crops exhibit and make decisions based on these observations and their past experience. This research presents for the first time a mathematical method employing Fourier-transform infrared spectroscopy to quantify the maturation or ripeness of Cameo apple based on the changes in concentrations of selected constituent components (e.g., glucose) in the apple fruit. Cameo apple fruit samples were collected from a single tree every 15 days during the last 60 days of the apple fruit maturation cycle and then analyzed with Fourier-transform infrared spectroscopy. The vibrational bands from the Fourier-transform infrared spectra were assigned to specific functional group. The peak intensities of the vibrational bands corresponding to glucose molecule were normalized and plotted against the number of days remaining before the apple fruit maturity and were observed to show a linear relationship. This relationship can be used to calculate the time required for the apple fruit to reach maturity and also to calculate the concentration of constituent components at any stage of its growth cycle.     

套袋对桃果实成熟过程中酚酸类和类黄酮类物质积累的影响

 以‘晚蜜’桃为试材, 果实于盛花后75 d套袋、盛花后144 d除袋, 以未套袋果作对照, 应用HPLC - MS技术对果皮中酚酸类和类黄酮类物质进行了定性定量分析。在成熟果中分离、检测到了3种酚酸类物质, 8种黄酮醇类物质, 5种黄烷- 3 - 醇类物质和2种花色苷类物质。伴随果实成熟, 酚酸类和黄烷- 3 - 醇类物质的含量逐渐下降; 黄酮醇类物质在果实发育早期含量较高, 而后逐渐降低, 果实着色初期其含量骤然上升, 到成熟后期又急剧下降; 未套袋果在盛花后144 d已有花色苷积累, 套袋果除袋后果皮迅速合成花色苷。成熟期套袋果和未套袋果中的酚酸和黄烷- 3 - 醇类物质的含量没有差异, 但套袋果中花色苷类和黄酮醇类物质的含量显著高于未套袋果, 其中套袋果的花色苷含量为未套袋果的1174倍。试验表明, 酚酸类和黄烷- 3 - 醇类物质对光较敏感, 套袋显著抑制了这两类物质的合成, 但未影响成熟果中的含量, 套袋处理增加了成熟果中花色苷和黄酮醇的积累。桃果皮中的花色苷类物质代谢在果实发育早期向花色苷以外的各分支代谢方向进行, 果实着色初期同时积累黄酮醇和花色苷, 到成熟后期主要为花色苷的合成。     

晚熟苹果新品种‘山农红’

‘山农红’苹果是从‘国光’芽变中选出的新品种。果实中等大小,扁圆形,平均单果质量182.9 g,大者可达260 g;果面光滑,底色黄绿,充分着色时全果面鲜红色,着色指数明显高于‘国光’;果肉黄白色,质地细密而脆,果汁中多,酸甜适口,含可溶性固形物14.5%,味浓,有芳香,品质上等;在山东牟平10 月中下旬成熟,果实发育期180 d 左右。盛果期产量118.8 t · hm-2,抗性与‘国光’相近。     

特早熟高糖猕猴桃新品种‘金美’

‘金美’是从云南野外美味猕猴桃资源中选育出的绿肉高糖新品种。果实为卵形，果面黄褐色硬毛，果形整齐；平均单果质量60 ~ 80 g。果肉绿色或黄绿色，质嫩多汁，风味浓甜。软熟果实含可溶性固形物24.1%，可溶性总糖16.2%，总酸1.25%，维生素C 1 180 mg • kg-1，钾 342 mg • kg-1，钙84.2 mg • kg-1。在武汉地区8月果实成熟，此时果实采后7 d开始软熟，1 ~ 2 ℃低温和95%相对湿度下可存放100 ~ 120 d。盛果期产量22 t • hm-2。     

Energiebilanzen für Obstimporte: Äpfel aus Deutschland oder Übersee?

This work compares the primary energy requirement for apples marketed in Germany in April which were either home-grown in Germany or imported from overseas. The primary energy requirement was calculated for apples (cv. ‘Braeburn’ and ‘Golden Delicious’) picked during mid-October near Bonn, Germany, with subsequent 5-month on-site CA storage at ca. 1°C until mid-March. This was compared with energy requirements for apples of the same cultivar grown in a Southern hemisphere winter in Hawke’s Bay, New Zealand or Grabouw-Elgin, Western Cape, South Africa, picked in March, and with subsequent 28- or 14-day transport, respectively, on reefers to Antwerp for sale in April in Germany. The primary energy required for cultivating Braeburn apples in New Zealand (ca. 2.1 MJ/kg apple fruit) represented 38% of their overall primary energy requirement, compared with 2.8 MJ/kg fruit in Germany or South Africa, with smaller harvests of 40 t/ha cf. 90 t/ha in New Zealand. Braeburn and Golden Delicious apples grown and stored locally in Germany consumed nearly 6 MJ/kg fruit, which included ca. 0.8 MJ/kg for 5-month CA storage during the winter. This compared favourably with 7.2–7.5 MJ/kg for overseas shipment from New Zealand or South Africa, i.e. a 22–27% greater energy requirement for imported fruits. The CA storage of home-grown apples in Germany partially compensated for the energy required to import the fresh fruit from overseas. To compensate fully for imports from South Africa or New Zealand, home-grown apples had to be stored locally for ca. 9 or 18 months, respectively, i.e. in the latter case beyond the next harvest. The lower primary energy required for domestic apple fruit is discussed with respect to providing local employment, fruit orchards preserving the countryside, fruit quality, food safety and quality assurance schemes such as QS and EUREP-GAP, food security of local fruit, and networking favouring regional produce.     

黄肉苹果转色期前后类胡萝卜素合成相关差异表达基因鉴定

为了了解黄肉苹果种质成熟时富集类胡萝卜素的分子机制,以黄肉种质‘东北黄海棠’为材料,选择转色期前后(盛花后90 d和115 d)两个发育时期的果实进行RNA-seq测序,分析两个样本差异表达基因,并利用实时荧光定量PCR技术验证获得的类胡萝卜素合成相关差异表达基因的表达水平。结果获得两个样本显著差异表达基因共3 056个,与盛花后90 d果实比较,成熟期果实中有1 270个基因上调表达,1 786个基因下调表达。对这些表达差异基因进行了Pathway富集分析,结果显示差异表达基因涉及类胡萝卜素、苯丙氨酸以及类黄酮等代谢途径,其中类胡萝卜素代谢途径基因有3个上调,4个下调。通过对这7个差异表达基因进一步的qRT-PCR及聚类分析,发现一个新的候选基因MdCCD4b,该基因与菊花以及桃等CCD4聚为一类,与其他作物功能已知的CCD4一样,其表达水平与黄肉种质中类胡萝卜素积累呈负相关,推测黄肉种质果实成熟后类胡萝卜素的富集与MdCCD4b基因显著下调有关。     

不同时期摘袋对'富士'苹果着色的影响

通过测定不同时期摘袋'富士'苹果果实着色生理指标的变化规律,探讨对其着色的影响.结果表明:盛花后130 d(熊岳9月20日左右)开始到月底(9月30日)摘袋,果实着色快,且随着摘袋时间的推迟,着色有加快趋势.摘内袋后10～15 d,果皮花青苷含量迅速上升且着色快,但果实含糖量尚未达到理想值,辽宁熊岳地区10月20～25日左右采收,可溶性固形物可达16%～17%,此时采收果实品质风味较佳.