树莓果实总RNA提取方法的比较研究

比较了SDS法和Trizol法提取树莓果实总RNA的效果。结果表明:Trizol法提取的RNA经电泳检测,未见条带,说明Trizol法并不适合富含多糖多酚的树莓。SDS方法提取树莓果实总RNA完整性好,28S和18S条带清晰,OD260/OD280值为1.83,在1.7～2.0之间,OD260/OD230值为2.01。结果证明,SDS法提取的总RNA可直接用于分子克隆等分子生物学实验。     

适于ISSR-PCR扩增的百合基因组DNA的提取

为了方便稳定地获得适合于ISSR-PCR扩增的高质量百合基因组DNA,以卷丹百合为试材,在传统的CTAB法基础上进行了改良和优化,筛选出较理想的DNA提取方法.结果表明:用改良CTAB法提取的百合基因组DNA电泳条带清晰,无降解现象,OD260/OD280值在1.7～2.0之间,用于ISSR-PCR扩增时其稳定性和可重复性都很好,说明DNA纯度和产率完全满足百合ISSR-PCR扩增分析的要求,为百合属植物遗传多样性分析和品种分子鉴别等研究奠定了基础.     

扁桃基因组DNA的提取

通过改良 CTAB 法提取扁桃 4 个品种的基因组DNA.经检测,所提样品OD260/OD280比值在1.68～1.97之间,得率为272～580μg/mL,SSR-PCR检测条带清晰,说明DNA质量较高,完全满足深入的分子生物学研究需要.     

一种高质量葡萄基因组DNA提取方法

针对葡萄组织中多酚、多糖类物质含量较高的特点,对比研究了利用植物总DNA提取试剂盒和改良CTAB法提取葡萄总DNA.结果表明:改良的CTAB法能够从不同葡萄品种和不同生长时期的叶片中获得高质量、完整性好的总DNA,其OD260/OD260介于1.7～1.9之间,无降解现象,RNA去除干净,完全适于进行PCR和酶切等研究.     

花椒DNA提取方法的研究

采用经过改良的SDS法和CTAB法对不同品种花椒进行基因组DNA提取,用核酸蛋白分析仪测量DNA浓度,将提取的基因组DNA进行ISSR分析,以期找到一种提取花椒总DNA提取的最优方法。结果表明:改良的CTAB法更适合花椒基因组DNA的提取,CTAB法比SDS法提取的DNA纯度好,所获得DNA样品的OD260/OD280比值在1.8~2.0范围内,琼脂糖凝胶电泳图谱显示条带清晰。     

改良CTAB法提取冷季型草坪草基因组DNA的研究

为获得高质量的冷季型草坪草基因组DNA,用改良和优化常规CTAB提取方法,提取冷季型草坪草基因组DNA,并对所得DNA的质量和浓度进行了检测.结果表明:改良CTAB-B法要好于常规CTAB法和改良CTAB-A法,提取的基因组DNA的OD260/OD280在1.8～1.9之间,电泳条带清晰,RNA消化彻底,DNA无明显降解,其含量和纯度均能满足基因工程操作的要求,且酶切效果理想.     

适于宁夏枸杞RAPD分析的DNA高效提取方法

采用优化的CTAB法提取枸杞叶片基因组DNA.利用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测所得DNA的浓度和纯度,并进行了RAPD初步扩增分析.DNA浓度在300 μg /mL,可达400 μg/g(叶片鲜重).OD260/OD280比值为1.44～1.6(理想值为1.8).结果表明:优化CTAB法所提取枸杞总DNA的纯度高、完整、量大,能满足RAPD扩增,条带清晰、稳定,并且提取操作的程序快速、简便,试验成本低、效率高.优化的CTAB法高效提取的枸杞基因组DNA不需经氯化铯梯度离心或柱层析纯化,可以直接用于RAPD分析.     

番木瓜叶片总RNA提取方法比较研究

采用了CTAB法和GHCL法及SDS法3种方法分别对番木瓜的叶片进行RNA的提取。该试验采用SDS法、GHCL法提取番木瓜总RNA,并对提取的RNA进行质量比较。结果表明:GHCL法(方法2)提取的RNA产率高,无明显降解,OD260/OD280比值较好,是有效提取总RNA的方法。     

不同方法提取青藏高原蕨麻总DNA的比较研究

以改良CTAB法、改良SDS法、试剂盒法提取青藏高原蕨麻总DNA;用紫外分光光度法测定提取的青藏高原蕨麻的总DNA浓度和质量;用琼脂糖凝胶电泳法、分光光度法测定提取的青藏高原蕨麻的总DNA质量,以期筛选出青藏高原蕨麻总DNA提取的最佳方法。结果表明:用改良SDS法提取的蛋白质含量最高,OD260/OD2801.61左右,用改良CTAB法提取的DNA的OD260/OD2801.76左右;用试剂盒法提取的DNA的OD260/OD2801.70左右;用改良CTAB法提取DNA的浓度在100μg/mL。     

板栗SSR和RAPD技术体系的建立

主要从板栗DNA提取、PCR条件的优化等环节对SSR和RAPD的反应条件进行了优化。结果表明,采用PVP和β-巯基乙醇联合除酚,用多次洗涤和高盐相结合进行除糖提取高质量板栗基因组DNA,所获得的DNA完整,无降解,分子量在23kb以上,可扩增、可酶切,D260nm/D230nm在2.0以上,D260nm/D280nm为1.8～2.0,产率为40～300μgDNA/g叶组织,完全满足SSR、RAPD、AFLP等分子标记技术分析的需要。采用单因素对PCR反应体系中各个影响因素进行优化,结果表明对PCR结果影响最为明显的是退火温度和Mg2+浓度的变化。对退火温度和Mg2+浓度进行优化,确定RAPD的PCR反应体系Mg2+浓度为2.0mmol/LMgCl2,退火温度38℃;SSR反应体系Mg2+浓度为2.0mmol/L,退火温度56℃。建立了一套完善的适用于板栗的SSR和RAPD分析的稳定技术体系。