树莓果实总RNA提取方法的比较研究

比较了SDS法和Trizol法提取树莓果实总RNA的效果。结果表明:Trizol法提取的RNA经电泳检测,未见条带,说明Trizol法并不适合富含多糖多酚的树莓。SDS方法提取树莓果实总RNA完整性好,28S和18S条带清晰,OD260/OD280值为1.83,在1.7～2.0之间,OD260/OD230值为2.01。结果证明,SDS法提取的总RNA可直接用于分子克隆等分子生物学实验。     

富含多糖的甜瓜果肉中提取总RNA方法的比较研究

以甜瓜品种河套蜜瓜果肉为试验材料,比较了异硫氰酸胍法、CTAB法和SDS法3种RNA提取方法,结合KAc沉淀多糖和低浓度乙醇沉淀多糖2种去糖方法。结果表明:异硫氰酸胍法结合KAc沉淀多糖的去糖效果最佳,提取的RNA中28S亮度约为18S的2倍,且OD260/OD280值在1.8以上,RNA产率为64.48μg/g。经RT-PCR获得了乙烯受体基因etr1长达2.3 kb的cDNA特异性条带,说明异硫氰酸胍结合KAc沉淀多糖法从甜瓜果肉中提取的RNA质量好、产率较高、完整性好,适合于甜瓜进一步的分子生物学研究。     

3种方法提取辣椒根总RNA的效果比较

针对辣椒根中富含多糖多酚的特点,比较了Trizol法、改良Trizol法和改良CTAB法3种方法对辣椒根总RNA提取的效果。结果表明,Trizol法、改良Trizol法能提取到辣椒根总RNA,但效果不理想;改良CTAB法提取到的辣椒根总RNA,28 S rRNA的亮度是18 S rRNA的2倍,OD260/OD280和OD260/OD230值分别为1.88和1.80,RNA质量浓度为254.0 mg·L-1;用提取到的RNA进行RT-PCR后可扩增出acting基因特异片段。因此改良CTAB法提取辣椒根总RNA的效果好、质量高、完整性好,能够满足后续试验要求。     

刺山柑总RNA提取方法的比较研究

以刺山柑为试材,研究比较了改良SDS提取法、RNApure Plant Plus Reagent法、RNAplant Plus Reagent法和RNAprep Pure Plant Kit法提取总RNA的效果,以期寻找一种适于野生刺山柑叶片高质量总RNA最佳提取方法。结果表明:4种方法提取的总RNA均可见28S和18S2条电泳谱带,RNAprep Pure Plant Kit法获得的RNA图谱条带清晰、明亮、稳定,28S rRNA亮度约是18SrRNA的2倍,OD260/OD280为2.00,产率为175.3μg/g,除RNAprep Pure Plant Kit法能够从叶片中提取到完整性好、纯度高及产率高的总RNA外,其它3种方法提取的总RNA均存在降解及DNA和蛋白等污染,经cDNA-SRAP分析检测,此方法获得的RNA反转录后能扩增出清晰稳定的多态性条带,能够满足后续试验的要求。进一步采用RNAprep Pure Plant Kit法从刺山柑幼苗整株、根、茎及叶中能够获得高质量的总RNA,因此,RNAprep Pure Plant Kit法适合刺山柑总RNA的提取。     

葡萄总RNA提取方法的研究

针对葡萄组织中多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了改进SDS/酚法、异硫氰酸胍法和市售总RNA提取试剂盒等不同的提取方法,3种改进方法均能从葡萄幼嫩叶片中提取到总RNA。其中改进的SDS/酚法能有效抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,能够从成熟的叶片和完熟果实的果皮中获得质量高、完整性好的总RNA,28SrRNA亮度约为18SrRNA的2倍,A260/A280介于1.8～2.0之间,A260/A230大于2.0,且总RNA产率高,其中幼叶总RNA产率为261.20μg/g,成熟叶产率为191.40μg/g,完熟果皮产率为31.50μg/g,完全适于进行DDRT-PCR、Northernbolt和cDNA文库构建等研究。且该方法具有快速、简单、有效的特点。     

李果实果肉组织RNA提取方法的比较分析

以中国李品种‘槜李’的果肉组织为试材,比较了Trizol法、RNA提取试剂盒和改良的CTAB法提取RNA的效果,筛选出适合李果实果肉组织总RNA的提取方法。结果表明:Trizol法和RNA提取试剂盒均不能得到完整的RNA;改良的CTAB法能有效去除多糖,28S条带的荧光亮度是18S条带的1.5~2.0倍,D260/D280值都在1.8~2.1,样品的平均得率为770.96~1 029.04ng/μL,RT-PCR结果扩增出了特异性条带,说明改良CTAB法从李果实果肉组织中提取的RNA质量高、完整性好、产率高,完全可以用于后续的分子生物学试验。     

三种提取酿酒葡萄不同组织总RNA的方法比较

通过对比改良SDS-酚法、改良CTAB法和改良Trizol法3种RNA提取方法,提取"赤霞珠"(‘Cabernet Sauvignon’)葡萄芽、叶片和果皮RNA的质量及浓度,并进一步分离、纯化得到较高质量的RNA。结果表明:改良SDS-酚法与改良CTAB法适用于芽和叶片的提取,可以获得较好质量、高浓度的总RNA,其28S与18S亮度极高,5S清晰可见,完整性较好;改良Trizol操作环节较少,省时,质量好,条带锐利,可清晰看出28S与18S亮度比为2∶1,虽提取的样品浓度较低,但足以供下一步研究使用。     

葡萄叶片中提取总RNA的三种方法比较

采用试剂盒法、热酚法和LiCl沉淀法3种方法提取葡萄叶片总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳和Agilent 2100计检测总RNA的完整性和提取纯度.对红地球葡萄叶片总RNA提取方法做比较,以得到完整的、高质量的葡萄RNA.结果表明:LiCl沉淀法提取的RNA收率高,完整性好,OD260/OD280均在1.80～2.00,纯度高,28S、18S条带清晰完整.可以满足后续分子生物学的研究.     

番木瓜叶片总RNA提取方法比较研究

采用了CTAB法和GHCL法及SDS法3种方法分别对番木瓜的叶片进行RNA的提取。该试验采用SDS法、GHCL法提取番木瓜总RNA,并对提取的RNA进行质量比较。结果表明:GHCL法(方法2)提取的RNA产率高,无明显降解,OD260/OD280比值较好,是有效提取总RNA的方法。     

枇杷果实总RNA的提取及八氢番茄红素合成酶基因(PSY)片段的克隆

【目的】为从枇杷果实中提取高质量的RNA,【方法】以枇杷果实为材料,对6种总RNA提取方法进行分析和比较。【结果】结果表明,在裂解前先用70%丙酮和80%乙醇分别对枇杷果皮和果肉进行预处理,再结合CTAB-LiCl法,得到的总RNA质量较好,OD260/OD280在1.8～2.2,OD260/OD230超过2.0,得率分别为幼果果皮56.78μg.g-1,幼果果肉40.62μg.g-1,成熟果果皮40.86μg.g-1,成熟果果肉9.24μg.g-1;并根据其他植物的八氢番茄红素合成酶基因(PSY)保守区设计引物,用以上方法提取的RNA为模板进行RT-PCR,得到453 bp的基因片段,其推导的氨基酸序列与其他植物的同源性高达95%,推测该片段为PSY基因。【结论】先用70%丙酮和80%乙醇分别对枇杷果皮和果肉进行预处理,再结合CTAB-LiCl法,得到的RNA质量好,可用于后续的分子生物学研究。     

不同方法提取牛心朴子基因组DNA效果的比较研究

以牛心朴子的叶片、茎段、根为试材,采用改良的CTAB法Ⅰ、CTAB法Ⅱ和SDS法对其进行了基因组DNA提取效果的比较分析.结果表明.CTAB法Ⅰ从3个部位都能提出较高浓度的DNA,电泳条带完整清晰;CTAB法Ⅱ从3个部位都能提出DNA,条带明亮,但有明显拖尾现象;SDS法从叶片中能提出较高的DNA,但从茎和根中所提的DNA含量较小,电泳条带暗;3种方法所提的DNA其RAPD扩增效果以CTAB法Ⅰ最好,CTAB法Ⅱ次之,SDS法最差.叶片提取的DNA平均纯度、浓度和得率为最高,RAPD扩增效果最好,茎次之,根最低.说明CTAB法工是牛心朴子DNA的高效提取方法,不同部位以牛心朴子叶子提取的DNA得率高,扩增效果最好.     

茎尖脱毒生姜组培苗病原检测研究

利用PCR技术及扫描电镜技术对茎尖脱毒生姜组培苗进行病原检测。用细菌16SrRNA通用引物对生姜组培种苗根部和固体培养基混合提取的基因组DNA作为模板进行16SrRNA扩增,不能扩增出16S rRNA;Trizol提取生姜组培苗根部和茎段RNA经凝胶电泳检测无明显RNA目的条带;生姜组培苗茎段组织经扫描电镜观察组培苗茎段中无呈球形、杆状、卵圆形、丝状、冠状及蝌蚪形等规则形状的病毒颗粒,只见表皮、微管等组织。研究认为,PCR、RT—PCR和扫描电镜是茎尖脱毒生姜组培苗病原检测的有效手段。     

香蕉种质资源的AFLP鉴别与分类中DNA模板的制备

在运用AFLP技术进行香蕉种质资源的鉴别与分类时,成功的关键之一是HMW基因组DNA的成功制备和避免降解,为了获得高纯度的HMW香蕉模板DNA和清晰的AFLP指纹图谱,以粉蕉为试材进行了用不同方法从不同植物体部位提取香蕉DNA的研究。结果表明,以香蕉未展开的幼叶、成熟叶、新根为材料提取的DNA量足以进行AFLP分析,但考虑到取材的方便性,最好选用未展开的幼叶或成熟叶;用改进后的SDS、CTAB法均可以获得HMW基因组DNA和AFLP指纹图谱,SDS法(用氯仿异-戊醇溶液抽提3次)提取的DNA量将近是CTAB法提取的DNA量的2倍,但SDS法提取的DNA纯度不如CTAB法提取的高。两种方法提取的DNA片段大小一致,大约在16kb左右。     

4种冬虫夏草总RNA提取方法的比较

以冬虫夏草新鲜子实体为材料,分别采用SDS抽提法、TRIzol法、CTAB-LiCl法和DEPC水法4种方法进行总RNA的提取试验,并对其进行了紫外及变性琼脂糖凝胶电泳检测。检测结果表明,4种提取方法中DEPC水法提取的总RNA质量最好,SDS抽提法次之,CTAB-LiCl法和TRIzol法效果最差。从RNA质量、操作难度、经济与否等方面综合分析,DEPC水法是较为理想的提取冬虫夏草新鲜子实体总RNA的方法。     

葡萄茎痘病毒病的RT-PCR检测

根据症状随机选取石河子大学校园内的多年生全球红、无核白等葡萄为试材,采用SDS法提取高质量总RNA作为模板,以GRSPaV的特异互补引物引导,反转录合成cDNA,通过PCR扩增,获得830bp的预期目的片段。将此目的片段纯化回收,克隆测序分析。与NCBI中的此病相关序列同源性达到96%。     

羊肚菌菌丝体总RNA提取方法的比较

采用SDS抽提法、TRIzol法、CTAB-LiCl、DEPC水法对羊肚菌菌丝体进行了总RNA的提取,并对其进行了紫外及琼脂糖凝胶电泳检测。结果表明:4种提取方法中DEPC水法提取的总RNA质量最好,SDS抽提法次之,CTAB-LiCl法和TRIzol法效果最差。从RNA质量、操作简单、经济与否等方面综合分析,DEPC水法是羊肚菌菌丝体总RNA提取较为理想的方法。     

山葡萄基因组DNA提取及RAPD鉴定

以雌花山葡萄（７３０６４）冷藏幼叶、香妃葡萄新鲜幼叶为试材,分别采用修改的ＣＴＡＢ法、高盐法、ＳＤＳ法提取基因组ＤＮＡ。结果表明,三种方法所提的ＤＮＡ纯度及产率有差别,从综合结果看,以ＣＴＡＢ法为好,所得ＤＮＡ不需经氯化艳梯度离心或柱层析,可直接用于ＲＡＰＤ分析。     

霜霉病菌侵染的黄瓜叶片cDNA文库的构建及抗病相关基因筛选

以接种黄瓜霜霉病菌的抗病黄瓜品种‘649’的叶片为材料,使用改良SDS法提取总RNA,构建黄瓜叶片全长cDNA文库,得到的原始文库滴度为5.5 × 106 pfu • mL-1,扩增后的文库滴度达6.5 × 109 pfu • mL-1,重组率约为99%,插入片段在0.5 ~ 2.0 kb之间,大多在1.0 kb左右。随机选取3 360个克隆进行测序,共拼接出2 507个unigenes,其中包括211个重叠群（Contigs）和2 296个单拷贝EST（Singlets）。生物信息学分析显示：这些unigenes中存在427条与植物防御/抗病相关的基因,其中包括两类抗病基因和细胞程序性死亡相关基因,这些基因的发现为下一步研究黄瓜抗病机理,克隆抗霜霉病相关基因提供了重要的参考。     

几种三华李基因组DNA提取方法的比较研究

以CTAB法、改良CTAB法、SDS法、改良SDS法、改良陈大明法、高盐低pH值法、SDSCTAB法和氯化苄法等8种目前常用植物基因组DNA提取方法为基础,通过采用异丙醇和无水乙醇进行2次常温短暂沉淀、提高离心力等多种去杂质措施进行适当改进,对它们用于三华李基因组DNA提取的效果进行比较。结果表明,8种方法中以CTAB法最优,改良CTAB法其次,高盐低pH值法稍逊,其他5种方法则不适合于三华李基因组DNA的提取;CTAB法不仅适合于早食李不同季节(4月、8月和12月)和不同成熟度叶(未展开嫩叶、展开嫩叶、成熟叶和老叶)基因组DNA的提取,也适合于华蜜大蜜李、白脆鸡麻李、大鸡麻李、中蜜李、小蜜李、串珠李、从化三华李、红线李、香蕉李、中熟李和软枝三华李等11个三华李品种嫩叶基因组DNA提取。     

越橘基因组DNA的快速提取及分析

为了从富含多酚、多糖及色素的越橘叶片中提取适用于分子生物学研究的高质量基因组DNA。以越橘幼叶为实验材料,比较了CTAB、SDS、高盐低pH值3种提取方法,获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、RAPD-PCR、酶切等方法对获得的DNA进行了分析,结果表明,快速CTAB法所提取的DNA产量高、质量好,完全能够满足RAPD、PCR等分子生物学实验的要求。