刺山柑总RNA提取方法的比较研究

以刺山柑为试材,研究比较了改良SDS提取法、RNApure Plant Plus Reagent法、RNAplant Plus Reagent法和RNAprep Pure Plant Kit法提取总RNA的效果,以期寻找一种适于野生刺山柑叶片高质量总RNA最佳提取方法。结果表明:4种方法提取的总RNA均可见28S和18S2条电泳谱带,RNAprep Pure Plant Kit法获得的RNA图谱条带清晰、明亮、稳定,28S rRNA亮度约是18SrRNA的2倍,OD260/OD280为2.00,产率为175.3μg/g,除RNAprep Pure Plant Kit法能够从叶片中提取到完整性好、纯度高及产率高的总RNA外,其它3种方法提取的总RNA均存在降解及DNA和蛋白等污染,经cDNA-SRAP分析检测,此方法获得的RNA反转录后能扩增出清晰稳定的多态性条带,能够满足后续试验的要求。进一步采用RNAprep Pure Plant Kit法从刺山柑幼苗整株、根、茎及叶中能够获得高质量的总RNA,因此,RNAprep Pure Plant Kit法适合刺山柑总RNA的提取。     

一种高质量葡萄基因组DNA提取方法

针对葡萄组织中多酚、多糖类物质含量较高的特点,对比研究了利用植物总DNA提取试剂盒和改良CTAB法提取葡萄总DNA.结果表明:改良的CTAB法能够从不同葡萄品种和不同生长时期的叶片中获得高质量、完整性好的总DNA,其OD260/OD260介于1.7～1.9之间,无降解现象,RNA去除干净,完全适于进行PCR和酶切等研究.     

分蘖洋葱叶片RNA提取方法的比较和分析

以新鲜的分蘖洋葱叶片为材料,比较了Trizol法、Trizol改进法、SDS法、SDS改进法以及柱式植物RNA提取法提取总RNA的效果。结果表明:Trizol法和Trizol改进法所提取的RNA得率很低,且不能有效除去叶片中的多糖成分;SDS改进法能够有效的去除分蘖洋葱叶片中的多糖,提取的RNA中28S RNA亮度约为18S RNA的2倍,OD260/OD280值介于1.7~2.2之间,但RNA的得率偏低,约为56.32μg/g;柱式植物RNA提取法提取的RNA 28S、18S、5S条带清晰,完整性好,RNA的得率最高,为123.58μg/g,完全适合于分蘖洋葱进一步的分子生物学研究。     

3种方法提取辣椒根总RNA的效果比较

针对辣椒根中富含多糖多酚的特点,比较了Trizol法、改良Trizol法和改良CTAB法3种方法对辣椒根总RNA提取的效果。结果表明,Trizol法、改良Trizol法能提取到辣椒根总RNA,但效果不理想;改良CTAB法提取到的辣椒根总RNA,28 S rRNA的亮度是18 S rRNA的2倍,OD260/OD280和OD260/OD230值分别为1.88和1.80,RNA质量浓度为254.0 mg·L-1;用提取到的RNA进行RT-PCR后可扩增出acting基因特异片段。因此改良CTAB法提取辣椒根总RNA的效果好、质量高、完整性好,能够满足后续试验要求。     

树莓果实总RNA提取方法的比较研究

比较了SDS法和Trizol法提取树莓果实总RNA的效果。结果表明:Trizol法提取的RNA经电泳检测,未见条带,说明Trizol法并不适合富含多糖多酚的树莓。SDS方法提取树莓果实总RNA完整性好,28S和18S条带清晰,OD260/OD280值为1.83,在1.7～2.0之间,OD260/OD230值为2.01。结果证明,SDS法提取的总RNA可直接用于分子克隆等分子生物学实验。     

利用RT-PCR检测葡萄扇叶病毒的研究

以一年生品丽珠葡萄品种为试材，改进葡萄叶片总RNA的提取方法，获得了纯度较高、完整性较好的总RNA，在此基础上进行反转录和PCR扩增，检测到了葡萄扇叶病毒（GFLV), 建立了GFLV的RT－PCR检测程序，并得到应用。     

番木瓜叶片总RNA提取方法比较研究

采用了CTAB法和GHCL法及SDS法3种方法分别对番木瓜的叶片进行RNA的提取。该试验采用SDS法、GHCL法提取番木瓜总RNA,并对提取的RNA进行质量比较。结果表明:GHCL法(方法2)提取的RNA产率高,无明显降解,OD260/OD280比值较好,是有效提取总RNA的方法。     

三种提取酿酒葡萄不同组织总RNA的方法比较

通过对比改良SDS-酚法、改良CTAB法和改良Trizol法3种RNA提取方法,提取"赤霞珠"(‘Cabernet Sauvignon’)葡萄芽、叶片和果皮RNA的质量及浓度,并进一步分离、纯化得到较高质量的RNA。结果表明:改良SDS-酚法与改良CTAB法适用于芽和叶片的提取,可以获得较好质量、高浓度的总RNA,其28S与18S亮度极高,5S清晰可见,完整性较好;改良Trizol操作环节较少,省时,质量好,条带锐利,可清晰看出28S与18S亮度比为2∶1,虽提取的样品浓度较低,但足以供下一步研究使用。     

大蒜不同组织总RNA提取与质量分析

以大蒜幼叶、蒜薹和鳞茎为试验材料,采用3种方法提取大蒜总RNA.通过1.2%非变性甲醛凝胶电泳和紫外分光光度计检测提取RNA质量.结果表明:3种方法能够从3个不同的组织中提取完整性较高的总RNA,但从蒜薹和鳞茎中提取的总RNA的纯度不高,可能是因为这2种组织中含有大量多糖或其它代谢产物.从叶片中提取的总RNA质量较好,产率较高,提取大蒜叶片总RNA的效果最好.     

新疆阿魏RNA提取的不同方法比较

以新疆阿魏叶片为材料，采用3种不同的方法分别提取其总RNA，用核酸蛋白检测仪、琼脂糖凝胶电泳方法检测其浓度、纯度及完整性，旨在建立提取新疆阿魏总RNA的最适方法，为后续深入研究新疆阿魏生物合成途径及机制奠定基础。结果表明：3种方法均能提取出新疆阿魏叶片总RNA。试剂盒法提取的总RNA质量最好，28S RNA亮度是18S RNA的2倍，条带清晰，操作简单，耗时短；Trizol法提取的RNA质量次于试剂盒法，且过程中无法判断次级代谢产物对RNA提取的影响，Trizol裂解液存在毒性物质；改良CTAB法提取的总RNA质量较差，无法满足下一步试验的要求，操作复杂，耗时较长。因此，试剂盒法为提取新疆阿魏RNA最佳方法。以试剂盒法提取的总RNA为模板进行PCR检测，得到的扩增条带清晰，与目的片段大小一致，进一步证明此方法提取的总RNA质量能够满足后续试验的要求。