广东省H1和H3亚型猪流感病毒抗体血清学调查

为了解广东省规模化猪场H1和H3亚型猪流感病毒的流行情况,采用ELISA检测方法对采集于广东省14个市的28个规模化猪场的1 015份猪血清进行H1亚型和H3亚型猪流感病毒的抗体检测。结果表明,H1亚型抗体总阳性率为40.9%,猪场阳性率高达92.9%(26/28);H3亚型抗体总阳性率为16.8%,猪场阳性率为78.6%(22/28)。其中粤西和珠三角地区H1亚型抗体阳性率分别为49.6%和45.4%,H3亚型抗体阳性率分别为14%和20.8%;而粤东和粤北地区H1亚型抗体阳性率分别为2.7%和12%,H3亚型抗体阳性率分别为6.3%和0。说明在广东省被调查的猪场中,H1和H3猪流感病毒的感染较为普遍,其中H1型感染率高于H3型。广东省SIV流行情况存在明显的地域性差异。     

广东省部分地区规模化猪场猪流感病毒感染的血清学调查与分析

为了解广东省规模化猪场猪流感病毒(SIV)感染情况,本研究采用ELISA方法和血凝抑制试验(HI),对2011年～2012年采集的1 050份血清样品进行SIV血清学检测.两种检测方法结果显示1 050份血清样品中SIV抗体阳性率分别为50.4％(ELISA)和50.2％(HI).其中珠三角地区和粤东地区的感染率高于粤西地区.SIV亚型调查结果显示该地区流行的SIV主要为H1和H3亚型,抗体阳性率分别为39.2％和18.2％(ELISA).部分猪场存在H9亚型SIV抗体.部分猪群中同时存在H1和H3两种亚型SIV抗体,表明猪群中存在不同亚型SIV混合感染.本研究为广东省猪流感的预防提供参考依据.     

部分猪场H1和H3亚型猪流感的血清学调查

为了解中国部分省市规模化猪场H1和H3亚型猪流感病毒的流行情况,采用血凝抑制试验对采集于广东、湖南、河南省12个市县28个规模化猪场的799份血清进行H1和H3亚型猪流感病毒的抗体检测。结果表明,H1亚型抗体阳性率在0~83.33%之间,猪抗体总阳性率为46.18%(369/799),猪场阳性率为89.29%(25/28)。H3亚型抗体阳性率在0~100.00%之间,猪抗体总阳性率为61.33%(490/799),猪场阳性率为85.71%(24/28)。广东、湖南和河南地区H1亚型抗体阳性率分别为48.91%、40.26%和50.67%,H3亚型抗体阳性率分别为58.55%、70.78%和78.67%。在被调查的上述3个地区的猪群中,H1和H3亚型猪流感病毒的感染较为普遍,其中H3亚型感染率高于H1亚型,且各地区猪流感病毒的流行情况存在地域性差异。     

2019～2022年辽宁省规模场猪流感血清流行病学调查

为了解和掌握最近几年时间里辽宁省规模化猪场猪流感的感染和流行情况,本试验利用血凝抑制试验对2019年3月～2022年6月期间在辽宁省沈阳、大连、本溪和铁岭四个城市的规模化猪场采集的572份猪血清样本进行了抗体检测。结果显示,调查期间内,猪流感抗体阳性血清总数为304份,总血清阳性率达53.15%;2019～2022不同年份时间内,2009年甲型H1N1(pdm/09H1N1)年平均抗体阳性率分别为8.15%、12.30%、18.56%和16.22%,欧洲类禽型H1N1(EA H1N1)年平均抗体阳性率分别为17.04%、23.77%、13.17%和19.59%,经典H1N1(CS H1N1)年平均抗体阳性率则分别为20.00%、26.23%、21.56%和20.98%;四个城市中沈阳规模化猪场中猪的抗体阳性率最高,达到72.09%,沈阳的猪场以EA H1N1亚型猪流感为主,本溪和铁岭的猪场以CS H1N1亚型为主,大连猪场则主要是pdm/09 H1N1亚型;不同生长阶段的猪样本中仔猪的血清阳性率最高（78.65%）,其次是保育猪（58.97%）,而育肥猪的阳性率最低（37.61%）。本...     

东莞市H1N1亚型猪流感抗体血清学调查

为了解东莞市猪群感染H1N1亚型猪流感病毒的情况,2015~2017年在东莞市猪养殖场采集猪血清937份,采用ELISA方法进行H1N1亚型猪流感抗体检测,抗体阳性数411份,抗体阳性率为43.86%,其中2015~2017年的抗体阳性率分别为62.83%、57.08%、26.06%。结果表明,东莞市养殖场的猪群普遍存在H1N1亚型猪流感病毒的感染,分析3年的感染抗体阳性率,2015~2017年有下降的趋势可能与猪流感流行的毒株有关。     

国内部分猪场猪流感检测情况分析

采用ELISA试验对上海市及部分外省市24个猪场的365份猪血清样品进行了猪流感病毒H1、H3亚型抗体的检测。结果：在被调查的24个猪场中,H1N1猪流感型抗体阳性率为30．96％,H3N2猪流感抗体阳性率为14．79％;在育肥猪和种猪的检测中,H1N1猪流感型抗体阳性率为36．6％,H3N2猪流感抗体阳性率为17．6％。表明在所调查的猪场中,猪流感病毒的感染较为普遍,大部分猪场都曾被H1、H3亚型感染,其中育肥猪和种猪的感染占主要地位。     

福建省猪流感血清学调查

猪流感是一种高度接触的急性传染病,为了了解福建省猪流感的感染情况,我们于2006年5月中旬对福建省8个地区的25个猪场进行了猪流感血清学调查。结果猪流感H1亚型抗体阳性率为6.81%,H3亚型抗体阳性率为35.11%。H1亚型仅在宁德、龙岩和南平地区检测到,H3亚型则在8个设区市均检测到。散养户的猪感染H1亚型猪流感(12.04%)较规模场的(2.33%)要高,H3亚型猪流感在规模场和散养户中感染的情况大致相同,分别为36.24%和33.63%。沿海地区H1亚型感染率(2.41%)明显低于山区猪场(17.39%),H3亚型在沿海地区比山区要高,而同时出现H1亚型和H3亚型抗体阳性的猪场只有4个,且主要在龙岩(3/4)和南平(1/4)。调查结果表明,我省H3亚型猪流感感染较为普遍。     

2015～2017年东莞市H 3N 2亚型猪流感血清学调查

为了解本地养猪场H3N2亚型猪流感的流行情况,2015~2017年,在东莞市本地养殖场采集了873份猪血清,采用酶联免疫吸附试验方法检测H3N2亚型猪流感抗体,结果为H3N2亚型猪流感抗体阳性501份,抗体阳性率为57.39%,其中2015~2017年的抗体阳性率分别为24.20%、66.21%、69.66%,抗体阳性率呈上升的趋势。结果表明,东莞市本地养猪场存在H3N2亚型猪流感的流行,2015~2017年抗体阳性率的上升趋势可能与近年来东莞市人流行的H3亚型甲型流感有相关性。     

宁夏猪流感血清学调查

采用血凝抑制试验对宁夏22个县（区、市）43个规模猪场、10个屠宰场、197个散养户的1710份猪血清样品进行了猪流感病毒H1、H3亚型抗体的检测。结果显示,被调查的样品中,H1亚型抗体阳性率为11．81％,H3亚型抗体阳性率为0．46％,HI＋H3亚型抗体阳性率为0．35％。表明在所调查的宁夏猪场中,猪流感病毒的感染较为普遍,大部分猪场都曾被H1、H3亚型感染。     

2011年～2012年我国不同地区猪流感血清学监测

为了解猪流感病毒(SIV)在我国的流行情况,本研究对2011年～2012年从不同省市重点地区屠宰场、规模化猪场和个体养殖户采集猪血清样品13044份,以经典H1N1 (CS)、类禽H1N1 (EA)、甲型H1N1(pdm/09)、H3N2、H5N1、H9N2亚型SIV抗原并采用血凝抑制(HI)方法检测.结果显示,2011年～2012年我国猪血清中类禽H1N1亚型SIV抗体平均阳性率比其他亚型高,分别为42.24％和45.89％,2011年甲型H1N1亚型SIV血清抗体平均滴度(GMT)比其他亚型高,GMT为53.32,2012年经典H1N1 GMT比其他亚型高,GMT为73.2.结果表明2011年～2012年我国猪群中H1N1亚型SIV感染较为普遍.     

广东部分地区H1和H3亚型猪流感抗体监测和病毒分离

从广东省17个未免疫猪流感病毒(SIV)疫苗的规模化猪场和3个肉联厂的待屠宰猪群中采集2 155份血清样品,采用ELISA方法进行猪流感的血清学调查。结果发现,种猪和肉猪H1亚型猪流感抗体阳性率分别为39.6%(329/830)和37.6%(498/1325),H3亚型抗体阳性率分别为10.8%(90/830)和4.6%(61/1325),H1+H3阳性率分别为5.2%(43/830)和1.8%(25/1325)。从281份猪鼻拭样品和肺样品中分离并鉴定出5株猪流感病毒,其中H1N1亚型3株,H3N2亚型和H1N2亚型各1株。     

华南地区猪群猪流感病毒病原学和血清学调查

为了解华南地区猪群中猪流感病毒(SIV)的流行及其遗传变异情况,本研究从2016年~2017年广东、广西等地猪群236份猪肺脏病料组织和143份鼻拭子样品中分离鉴定得到3株SIV,全基因组测序和遗传演化分析结果显示,3个分离株均属于H1N1亚型欧亚类禽分支SIV,并且均与pdm09分支病毒株发生了重组。HA蛋白分子特征分析结果显示,A/Swine/Guangxi/NK/2016 HA蛋白第23位糖基化位点发生了缺失。3265份血清样品抗体监测结果显示,欧亚类禽H1N1、pdm09 H1N1和H3N2 SIV的血清抗体阳性率分别为27.53%、20.98%和34.85%。另外,0.64%的(21份)血清样品为H9N2亚型流感病毒抗体阳性,并且猪群中不同亚型和不同分支SIV之间混合感染的情况非常普遍。猪群中流感病毒血清抗体监测结果显示,EA H1N1、pdm09和H3N2亚型SIV HI抗体滴度最高均可达到1:1280,而H9N2亚型HI抗体滴度最高为1:160,表明H9N2 AIV虽然可以感染猪,但对猪还不适应。各月份的血清抗体阳性率分析显示,SIV的流行具有季节性,冬季(11月、12月和1月份)的流行最为严重。本研究可为华南地区猪群SI防控及疫苗株的筛选提供参考依据。     

上海地区猪群中H1N1甲型流感抗体检测

对2009年H1N1甲型流感流行前后的上海地区养殖场户410份猪血清样品,分别采用血凝抑制试验（hemagglutination inhibition,HI）和酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）进行检测H1N1甲型流感病毒和猪流感病毒（Swine in？uenza virus,SIV）。检测结果表明,除2007年外,2008~2010年猪血清中均存在不同水平的HI抗体,阳性率呈显著上升趋势,且抗体水平与猪群饲养周期及饲养密度正相关,而与猪流感病毒的流行无相关性。     

部分省市猪群猪流感的血清学调查及猪流感病毒的分离与鉴定

对黑龙江、吉林、辽宁、安徽、山东、内蒙、河南、河北、江苏、安徽、浙江、湖北、福建、广东、海南、上海等省、市猪群进行了猪流感的血清学和病原学调查研究。从 130 6份猪鼻棉拭子样品和死亡猪肺、气管样品中分离到 39株H3N2亚型猪流感病毒 ,12株 H1亚型猪流感病毒及其它亚型猪流感病毒 ,病毒粒子在透射电镜下呈现典型的正粘病毒特征 ,有囊膜和纤突 ,多为椭圆形、圆形、或杆形 ,直径约 80～ 12 0 nm。对 1997- 2 0 0 1年 3895份猪血清的血清学调查结果表明 ,近年中国多个地区猪群存在抗SWTN77(H1)、SWCO77(H3)、DKAT6 9(H1)、TKUK6 3(H3)流感病毒抗体 ;1998年来自河北的猪血清中抗 SWTN77阳性率高达 33.3% ;1999年来自内蒙的猪血清中抗 TKUK6 3和SWCO77阳性率分别为 13.3%和 2 6 .7% ;2 0 0 0- 2 0 0 1年调查的所有省市的猪群中均存在抗SWCO77抗体 ,阳性率从 3.2 %～ 10 0 %。说明近年我国猪群中 H3亚型猪流感的污染相当普遍     

Development and Application of Duplex Real-time RT-PCR Assay for Detection of H1 and H3 Subtype Swine Influenza Viruses

To establish a rapid, accurate method to diagnose and detect H1 and H3 subtype swine influenza viruses (SIV) at the same time, the specific primers and TaqMan probes were designed according to the conserved region of the HA gene of H1 and H3 subtype SIV. A duplex Real-time RT-PCR assay was developed for detection of H1 and H3 subtype SIV. The results showed that the Real-time RT-PCR could detect 10² copies/μL of H1 and H3 subtype SIV, the sensibility was well. Coefficient of variation of Ct value between repeating groups were all below 5%, the repeatability was favorable. The results were negative for the detection of H4, H5, H7, H9 subtypes SIV, classical swine fever virus, porcine reproductive and respiratory syndrome virus, foot and disease virus and pseudorabies virus, the specificity was fine. One sample was H1 subtype SIV, and one sample was H3 subtype SIV, by the established assay, the positive rate was 1.16%. The method was highly accurate, rapid, sensitive and specific, and could provide a method for rapid detection and epidemiological investigation of H1 and H3 subtype SIV.     

H1、H3亚型猪流感病毒双重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立一种快速、准确地检测H1和H3亚型猪流感病毒（swine influence virus,SIV）的方法,根据H1和H3亚型SIV血凝素（hemagglutinin,HA）基因保守序列,分别设计2对特异性引物和2条TaqMan探针,建立双重实时荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法敏感性高,可检测到最低拷贝数为10²拷贝/μL;重复性良好,重复孔Ct值的变异系数均在5%以下;特异性好,除H1和H3亚型SIV外,H4、H5、H7、H9亚型SIV、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬病病毒检测均为阴性;在田间样品中成功检出1株H1和1株H3亚型SIV,检出率为1.16%。该方法准确、快速、灵敏、特异,可为H1、H3亚型SIV的快速鉴别检测及流行病学调查提供有效的技术手段。     

甘肃省猪流感H5和H9抗体的血清学调查

用血凝（HA）和血凝抑制试验（HI）对甘肃省742份猪血清进行了猪流感H5和H9亚型抗体检测。在12个市州的猪群中检出SIH9亚型抗体,检出阳性34份,平均阳性率为4．58％。阳性率最高为9．09％,最低为0．91％。在2个市州的猪群中检出SIH5亚型抗体,检出阳性3份,平均阳性率为0．40％。阳性率最高为4．76％,最低为2．98％。检测患病猪（非流感病）血清66份,其中8份检测出SIH9抗体．抗体阳性率为12．12％。     

安徽省北部地区猪高热病流行病学调查

2008年7月,安徽省北部地区生猪出现疫病,表现为不食、高热等特征,为查明病因,进行流行病学调查,同时采集发病猪群样品进行病原学和血清学检测。结果137份血清样品中,HPRRSV、PRRSV、PPV带毒率分别为25.5%、23.4%、37.9%;PRRSV、SIV(H1N1、H3N2)抗体阳性率分别为86.5%、9.49%和3.65%,仔猪CSFV抗体免疫合格率为50%;6份组织样品中HPRRSV、PRRSV、CSFV、PRV、PPV带毒率分别为50%、100%、66.7%、33.3%、33.3%。表明引起本次猪病为PRRSV、CSFV、PPV等多种病原体混合感染。     

猪流感病毒HA基因的原核表达及其ELISA检测方法的建立

根据H1N1亚型猪流感病毒血凝素基因序列设计并合成特异性引物,从本室保存的H1N1亚型猪流感病毒中扩增信号肽和跨膜区缺失的血凝素基因,并将其克隆到原核表达载体pET-28a中,在大肠埃希菌中诱导表达.对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot的结果表明,HA基因在大肠埃希菌中获得表达,产物具有免疫学活性,表达蛋白分子质量约为55 ku.表达产物经过纯化作为包被抗原建立了检测H1亚型猪流感抗体的间接ELISA方法.该方法具有较高的特异性和敏感性,重复性良好.应用该方法对2006年2 584份临床猪血清进行检测,结果显示多个地区检测猪流感抗体出现阳性,平均为20.5%.在6月、7月和12月分别出现抗体水平高峰,分别高达25.4%、25.0%和35.5%.