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单抗介导的银加强金标免疫技术检测传染性支气管炎病毒 总被引:1,自引:0,他引:1
利用胶体金标记纯化的羊抗鼠IgG,建立了一种银加强金标免疫技术(SECGA)检测IB抗原.检测抗原时先将抗原点样于硝酸纤维素膜(NCM)中央,封闭后浸于1:40 IBV单抗中作用10 min,洗涤后再浸于1:4金标羊抗鼠IgG液中作用1 h,银染10 min后观察,在膜上出现灰黑斑点的为阳性结果,反之,不出现斑点为阴性结果.SECGA对IB抗原最低检测量为0.703 ng/点(2 μL),对含毒尿囊液的最低检测量为102.9 EID50,检测IBV M41在鸡胚中繁殖时以36~54 h含毒量最高;检测SPF鸡气管粘液,至少于感染后3 d内检出病毒.结果表明,SECGA检测抗原可用于IBV早期诊断,具有群特异性、快速、敏感、简便,不需特殊设备、结果易判定等优点,尤适于基层实验室或现场应用. 相似文献
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IBVNP基因的可溶性表达及间接ELISA方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
利用RT-PCR技术将传染性支气管炎病毒M41株的N基因克隆至原核表达载体pET-28a,构建了重组表达载体pET-NP.将其转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后,NP基因获得高效表达.经SDS-PAGE与Western blotting检测证实表达的NP蛋白具有免疫学活性,且以可溶性蛋白形式存在.以此抗原建立了检测传染性支气管炎病毒抗体的酶联免疫吸附试验 (NP-ELISA)方法.敏感性测定证实,当阳性血清1∶500倍稀释时,D450值为0.356,说明仍能检测到IB抗体,该方法比较敏感.特异性试验显示该法与AIV H9、H5、IBD、ND、EDS76的标准阳性血清不发生交叉反应,具有良好的特异性;NP-ELISA和商品化试剂盒对75份血样的阳性检出率分别为57.33%和61.33%,符合率为85%.NP-ELISA与商品化的HI试剂检测结果没有明显相关性,其效价与攻毒保护也没有相关性. 相似文献
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抗菌肽(antibacterial peptides)是生物体内经诱导产生的一种具有生物活性的多肽,是天然免疫的重要组成部分.为了提高抗菌肽的表达量以及很方便地检测抗菌肽的表达情况,本研究利用口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV) 2A将荧光蛋白dTomato基因和3个串联的MagaininⅡ基因融合到一个开放阅读框中(open reading frame,ORE),融合的基因被置于pPIC9K载体醇氧化酶基因(AOX1)启动子的下游,构建分泌型重组酵母表达载体pPIC9K-dTomato -2A-3M,将线性化的重组酵母表达载体通过电击法转入毕赤酵母(Pichia pastoris )GS115中,经G418筛选和PCR鉴定得到阳性转化子,然后将其转至摇瓶,在30℃、0.5%甲醇的条件下进行诱导表达,连续诱导3d.SDS-PAGE电泳图谱显示,在31 kD(dTomato)和9.5kD(3M)处有蛋白条带出现,在荧光显微镜下观察酵母表达上清发出红色荧光,对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)抑菌试验结果表明,重组抗菌肽串联的MagaininⅡ具有明显的抑菌效果.结果表明,由2A连接的融合基因(荧光蛋白dTomato和串联的MagaininⅡ)在毕赤酵母中成功的进行了表达,FMDV 2A在其C端剪切多聚蛋白,得到dTomato和串联的MagaininⅡ两个独立而有活性的蛋白,为小分子抗菌肽的表达提供一个高效的检测方法. 相似文献
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猪疥螨病,是由猪疥螨(Sarcoptesscabiei)寄生于猪的表皮内引起的慢性皮肤病。该病各地广泛流行,患猪生长缓慢,皮张质量严重损伤,阻碍养猪业的发展,造成巨大的经济损失。为了寻求更好的诊断和防治方法,我们对辉县市任村养猪场的疥螨病猪(简称“患猪”)及河南职业技术师范学院实习猪场健康猪(简称“健猪”)进行了血像值的测定及分析,为临床诊断提供辅助依据。1材料和方法1.1动物“患猪”为27头5~12周龄长白猪,病变部位占体表面积的1/3以上,经实验室检查确诊为疥螨病;“健猪”为20头5~12同龄长白猪.经临床检查确认为健康… 相似文献
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【研究目的】提取沙门氏菌鞭毛蛋白并鉴定其抗原性;【方法】选用鸭沙门氏菌经半固体培养基诱导鞭毛,经肉汤培养后,用酸裂解、经差速离心、硫酸铵沉淀,分离出粗制鞭毛蛋白。将粗制的鞭毛蛋白用SDS-PAGE和磷钨酸负染投射电镜观察,并包板做ELISA检测其抗原性;【结果】SDS-PAGE显示提取的鞭毛蛋白相对分子质量约为58.0KD,且纯度较高,抗原性较好,每1000ml培养液可获得32.8mg鞭毛蛋白;【结论】酸裂解法可获得高质量的鞭毛蛋白,抗原性较好,为禽副伤寒沙门氏菌病诊断方法的建立奠定了基础。 相似文献
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将编码CPl5/60的基因插入真核表达载体pcDNA3( )中构建重组质粒pcDNA3-15/60,然后经鼻粘膜免疫怀孕成年山羊,观察其免疫应答的产生情况及其对后代的保护力。结果为抗CPl5/60抗体存在于免疫山羊的血浆和初乳中。pcDNA3-15/60经鼻粘膜免疫的怀孕山羊产生的免疫力能传给子代,使子代对微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)感染产生保护。CPl5/60-DNA免疫母羊的后代比非免疫母羊的后代排出卵囊少且排卵时间短。这就表明重组质粒pcDNA3-15/60可作为隐孢子虫候选核酸疫苗。 相似文献
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将编码CP15 / 6 0的基因插入真核表达载体pcDNA3(+)中构建重组质粒pcDNA3 15 / 6 0 ,然后经鼻粘膜免疫怀孕成年山羊 ,观察其免疫应答的产生情况及其对后代的保护力。结果为抗CP15 / 6 0抗体存在于免疫山羊的血浆和初乳中。pcDNA3 15 / 6 0经鼻粘膜免疫的怀孕山羊产生的免疫力能传给子代 ,使子代对微小隐孢子虫 (Cryp tosporidiumparvum)感染产生保护。CP15 / 6 0 DNA免疫母羊的后代比非免疫母羊的后代排出卵囊少且排卵时间短。这就表明重组质粒pcDNA3 15 / 6 0可作为隐孢子虫候选核酸疫苗 相似文献
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[目的]介绍禽类艾美耳球虫生物学和免疫生物学的研究进展,减少其对养禽业造成的经济损失。[方法]从禽类球虫的生活史、遗传学、生物化学、种类鉴定和诊断、免疫生物学、球虫病的控制及未来发展方向和亟待解决的问题等方面,阐述了近年来的发展情况。[结果]禽类的艾美耳球虫的生活史包括有性生殖阶段和无性生殖阶段;球虫的生物学发育也比较清楚;在外界环境中进行孢子生殖;目前其种类主要为7类;在球虫感染的免疫学方面研究有很大进展;在了解以上生物学和免疫生物学的研究进展后,提出了防治措施。[结论]该研究为防治养禽业球虫病提供了依据。 相似文献