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通过对微小隐孢子虫TSP3氨基酸序列进行生物信息学分析设计多肽片段,偶联KLH载体蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA方法检测血清效价并利用特异性亲和层析的方法纯化抗体。以该抗体作为一抗,利用Western blot检测虫体天然蛋白质在体内的表达情况,通过间接免疫荧光方法进行亚细胞定位分析。结果表明:制备的多克隆抗体能够特异性识别虫体天然蛋白,亚细胞定位发现其位于子孢子以及裂殖子的顶端。 相似文献
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猪血凝性脑脊髓炎病毒HE基因的克隆及真核表达 总被引：1，自引：1，他引：0
应用特异性引物，从猪血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）中扩增出HE蛋白基因，PCR产物纯化后克隆入pGEM-T载体，得到重组质粒pTHE。用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切pTHE，回收目的基因HE片段并将其定向克隆到pPiCZαA中，构建重组质粒pPiCZαA HE。用BstXⅠ酶切pPICZαA HE使其线性化，并电击转化至感受态毕赤酵母细胞GS115。PCR法鉴定阳性重组子，用1％甲醇诱导表达后，进行SDS-PAGE及westem blot分析。结果在酵母菌培养基上清中检测到相对分子量为43kD的重组蛋白，且该重组蛋白可与HEV多克隆抗体发生特异性血清学反应，表明HEV的HE蛋白片段在Pichia Pastoris中获得成功表达。 相似文献
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碘醚柳胺脂质体定向剂是抗肝片吸虫药—碘醚柳胺的一种新剂型,为了探讨其是否对绵羊细胞免疫机能有影响,本试验将8只通过粪检为肝片吸虫病阳性的绵羊分为两组每组4只,试验组以0.3mg·kg~(-1)体重皮下注射碘醚柳胺脂质体定向剂,对照组以3mg·kg~(-1)体重皮下注射碘柳胺注射液,分别于用药前和用药一周后用 E-玫瑰花环形成试验对 T 细胞计数,并对用药前后的数据进行 t 检验。结果为:试验组用 相似文献
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将编码CPl5／60的基因插入真核表达载体pcDNA3( )中构建重组质粒pcDNA3-15／60，然后经鼻粘膜免疫怀孕成年山羊，观察其免疫应答的产生情况及其对后代的保护力。结果为抗CPl5／60抗体存在于免疫山羊的血浆和初乳中。pcDNA3-15／60经鼻粘膜免疫的怀孕山羊产生的免疫力能传给子代，使子代对微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)感染产生保护。CPl5／60-DNA免疫母羊的后代比非免疫母羊的后代排出卵囊少且排卵时间短。这就表明重组质粒pcDNA3-15／60可作为隐孢子虫候选核酸疫苗。 相似文献
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将编码CP15 / 6 0的基因插入真核表达载体pcDNA3(+)中构建重组质粒pcDNA3 15 / 6 0 ,然后经鼻粘膜免疫怀孕成年山羊 ,观察其免疫应答的产生情况及其对后代的保护力。结果为抗CP15 / 6 0抗体存在于免疫山羊的血浆和初乳中。pcDNA3 15 / 6 0经鼻粘膜免疫的怀孕山羊产生的免疫力能传给子代 ,使子代对微小隐孢子虫 (Cryp tosporidiumparvum)感染产生保护。CP15 / 6 0 DNA免疫母羊的后代比非免疫母羊的后代排出卵囊少且排卵时间短。这就表明重组质粒pcDNA3 15 / 6 0可作为隐孢子虫候选核酸疫苗 相似文献
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【研究目的】探索高质量的旋毛虫(Trichinella spiralis)肌幼虫总RNA提取方法;【方法】利用Trizol试剂采用三种方法提取旋毛虫肌幼虫总RNA。(1)液氮预冷的研钵中研磨新鲜虫体至样品快融化时,加入适量的Trizol,继续研磨至液状后转移到离心管中;(2)A将新分离的虫体放到-20℃预冷的研钵中,在研磨过程中不断地添加液氮以保持虫体冷冻,之后对冷冻状的样品粉末继续操作;B把液氮冻存的新鲜旋毛虫肌幼虫取出,放到-20℃预冷的研钵中重复A的操作;(3)新鲜虫体放入匀浆器中,加适量Trizol,在冰水混合物中研磨20分钟。虫体破碎后按Trizol说明书继续抽提。最后通过凝胶电泳和紫外吸收光度值检测。【结果】用液氮和Trizol结合的方法,使用新鲜样品提取旋毛虫肌幼虫总RNA,在纯度和得率上都较为理想;【结论】使用新鲜的样品,且液氮与裂解液结合,是获得高质量RNA的可行方法。 相似文献
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