单抗介导的银加强金标免疫技术检测传染性支气管炎病毒

利用胶体金标记纯化的羊抗鼠IgG,建立了一种银加强金标免疫技术(SECGA)检测IB抗原.检测抗原时先将抗原点样于硝酸纤维素膜(NCM)中央,封闭后浸于1:40 IBV单抗中作用10 min,洗涤后再浸于1:4金标羊抗鼠IgG液中作用1 h,银染10 min后观察,在膜上出现灰黑斑点的为阳性结果,反之,不出现斑点为阴性结果.SECGA对IB抗原最低检测量为0.703 ng/点(2 μL),对含毒尿囊液的最低检测量为102.9 EID50,检测IBV M41在鸡胚中繁殖时以36～54 h含毒量最高;检测SPF鸡气管粘液,至少于感染后3 d内检出病毒.结果表明,SECGA检测抗原可用于IBV早期诊断,具有群特异性、快速、敏感、简便,不需特殊设备、结果易判定等优点,尤适于基层实验室或现场应用.     

新现野生动物源性疫病研究

野生动物疫病给人类的健康和生命安全带来许多重大,甚至灾难性的影响。当前,我国新现野生动物源性疫病研究的内容还比较狭窄,技术手段有待改善。最近30年来,发生的野生动物疫病具有病原复杂、反复发作、传播迅速和影响范围广等特点。引起的原因主要有过度开发自然造成野生动物栖息地破坏,滥用抗生素,人类工业污染,国际贸易和人员往来激增等。动物源性疫病防治要设立野生动物疫病专门研究机构,开展野生动物新现疫病的基础研究,加强国际间的相关学术科技交流与合作,保护生态环境和野生动物资源,强化海关检验检疫力度和立法。     

产学研合作与高校师资队伍建设的关系研究

产学研合作是目前高等教育发展的趋势。分析了高校开展产学研合作的必要性以及高校教师在产学研合作中的作用,指出了目前高校师资队伍建设中存在的问题,并提出了在产学研模式下加强高校师资队伍建设的意见和建议,如建立和发展高校教师培训系统、完善高校教师考评机制、建立完备的交流平台和管理体制。     

动物园动物禽流感疫苗免疫后抗体水平检测

为了查明现用禽流感疫苗对野生动物园珍稀动物的保护效果,探讨合理有效的免疫方案,应用血凝抑制试验(HI)对河北、北京、上海、河南等动物园中接种禽流感疫苗的珍稀野生动物进行禽流感抗体检测.结果表明,在禽流感疫苗免疫后21 d,隶属于2纲5目9科20属30种(包括亚种)的121份血清样品中,63.6%的样品血凝抑制价低于6log2,显然现有的疫苗不能对野生动物提供有效的保护力.     

超高效液相色谱-串联质谱法同时检测鸡蛋中甲硝唑、地美硝唑及其代谢物残留

建立了鸡蛋中甲硝唑、地美硝唑及其代谢物残留的UPLC-MS/MS检测方法。样品经乙酸乙酯提取、液液分配和MCX固相萃取柱净化富集后UPLC-MS/MS检测,以乙腈和水(0.1%甲酸)为流动相,经C18(2.1×50mm,1.8μm)色谱柱分离后,在正离子模式下采用多反应监测模式进行测定。结果表明,甲硝唑、甲硝唑代谢物产物羟基甲硝唑、地美硝唑、地美硝唑代谢产物羟甲基甲硝咪唑在1.0-100ng/mL范围内线性关系良好,相关系数均大于0.9975,在1.0,5.0,20.0μg/kg 3个浓度水平下进行加标回收实验,平均回收率为68.1%-92.3%,RSD为3.4%-9.0%,方法检出限0.1μg/kg。该方法灵敏、准确、稳定性好,适用于鸡蛋中甲硝唑、地美硝唑及其代谢物残留的定性和定量分析,为鸡蛋中硝基咪唑类药物检测提供一定技术参考。     

His6免疫原的制备及免疫小鼠抗体效价检测

采用EDC一步法将His6多肽分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备两种人工结合抗原KLH-His6和BSA-His6。将制备的KLH-His6作为免疫原,皮下分5点注射免疫6只健康6周龄雌性Balb/c小鼠;首次免疫取KLH-His6(50μg/只)与氟氏完全佐剂(FCA)充分乳化,每只免疫200μL,以后每间隔两周,同法进行第2,3次免疫,用氟氏不完全佐剂(FIA)乳化。每次免疫8 d后尾部采血,以BSA-His6为包被抗原检测抗His6抗体。结果表明,成功制备了His6免疫原,并免疫了小鼠;间接ELISA检测不同时期小鼠抗体效价最高达到1∶8 000,免疫小鼠的抗体效价水平整体呈上升趋势,为His6单隆抗体的制备奠定了基础。     

非典型猪瘟的免疫酶组织化学方法诊断

2006年4月中旬,河南新乡辉县某养猪厂47头2月龄以下的猪陆续发病,到5月上旬死亡22头。发病猪的主要症状为发热,体温40.5~41.5℃,稽留不退,食欲下降,精神沉郁,弓背卧地,挤在一起。有的病猪呼吸困难,步态不稳。许多病猪表现顽固性腹泻,粪便颜色为黄白色至黄褐色,腹下及耳部皮肤有     

抗堆型艾美耳球虫子孢子单链抗体的构建及表达

应用RT-PCR技术,从稳定分泌抗堆型艾美耳球虫子孢子抗原的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞Easp-3G3中扩增出抗体VH和VL基因,通过在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗堆型艾美耳球虫的单链抗体基因,并将其克隆至表达载体pET28a( )载体中进行表达,用Ni-NTA的金属亲和层析法进行纯化,通过SDS-PAGE和ELISA测定其纯度和生物学活性.电泳结果分析表明重组蛋白的相对分子量为32kDa,纯度为94%;ELISA反应结果证明该单链抗体保持了单克隆抗体的生物学特性,并能与堆型艾美耳球虫子孢子抗原发生特异性反应.     

堆型艾美耳球虫子孢子和鸡十二指肠上皮细胞的共同抗原的研究

以抗堆型艾美耳球虫子孢子的单抗EASP-3G3作为工具,对鸡各段消化道上皮细胞切片和子孢子进行免疫组化染色,并利用蛋白质印迹技术来检测单抗所识别子孢子可溶性抗原的分子量,来确定子孢子和十二指肠上皮细胞之间是否存在共同抗原。结果表明单抗只与十二指肠上皮细胞发生反应,而与其他肠段无染色反应。而且单抗所识别的可溶性抗原分子量为35~48 ku。抗子孢子的单抗同时与十二指肠上皮细胞和子孢子反应,而不与其他肠段反应,证明堆型艾美耳球虫寄生的位点特异性与十二指肠上皮细胞表面的某种抗原分子有内在的关系。