绵羊Granulysin在大肠杆菌中的表达与鉴定

根据GenBank中公布的绵羊Granulysin基因序列设计引物,用PCR法从重组质粒中扩增出含BamHI/XhoI酶切位点的Granulysin片段,双酶切后克隆至pGEX-4T-1载体,构建重组原核表达质粒pGEX-Granulysin,转化宿主菌大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导进行表达,SDS-PAGE鉴定,表达的融合蛋白分子量约为41 kDa,并以包含体形式存在。     

奶牛乳腺先天防御机理的研究进展

综述了近年来奶牛乳腺先天防御机理的研究进展,分析了奶牛的固有防御机理、诱导型防御机理和细胞征募防御机理,对了解和预防奶牛乳腺炎的发生具有一定的参考和应用价值.     

鸡传染性法氏囊病病毒XX08株VP2高变区基因的克隆与序列分析

应用反转录(RT-PCR)技术从河南新乡某鸡场分离的鸡传染性法氏囊病病毒XX08株总RNA中克隆出593bp的VP2高变区基因。序列分析表明,XX08毒株VP2高变区氨基酸序列与欧洲超强毒株UK661、日本超强毒株OKYM以及经典弱毒株D78的同源性均为96.8%。遗传进化分析表明,该毒株与超强毒株UK661和OKYM位于同一进化树。XX08毒株与超强毒株具有相似的氨基酸特征,但是222位的A被P替代,提示XX08毒株可能为中等强毒力毒株。     

猪链球菌病的诊断与防治

猪链球菌病(Swine Streptococcus)是由多种溶血性链球菌引起的一种急性、发热性人兽共患传染病。主要表现为发热和严重的毒血症状。该病一年四季均可发生,但以夏秋季较为多见。发病时传播迅速,病猪体温骤然升高到41℃以上,病死率较高,对养猪业的发展有较大的威胁。现将一猪链球菌病例诊治情况汇报如下。     

一例非典型猪瘟的诊断与防治

介绍了非典型猪瘟的临床症状、剖检病变、实验室诊断以及防治措施。     

绵羊鸟苷素基因的克隆与序列分析

基于电子延伸序列,本试验克隆并分析了绵羊鸟苷素基因.从绵羊十二指肠黏膜组织中提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR扩增,PCR产物与pMD19-T载体连接后转化到E.coliJM109感受态细胞,检测阳性克隆并测序.结果表明:克隆的绵羊鸟苷素基因长341 bp,编码109个氨基酸,与人、豚鼠、小鼠和牛的同源性分别为77%7、5%、47%和94%,推测的氨基酸序列信号肽为1~16 aa,整个氨基酸构成一个模域,编码鸟苷素前体蛋白.     

绵羊Gastorkine-1基因的克隆与序列分析

基于电子延伸序列,克隆并分析了绵羊Gastorkine-1基因。提取皱胃黏膜组织总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD19-T载体连接后转化E.coliJM109感受态细胞,检测阳性克隆并测序。克隆的绵羊Gas-torkine-1基因长619 bp,编码185个氨基酸,与人、小鼠、猪、牛的同源性分别为82.0%,48.8%,85.4%,96.9%,推测的氨基酸序列信号肽为1~20 aa,BRICHOS结构域为54~150 aa,结构特征与人、小鼠、猪、牛的Gastorkine-1相一致。     

His6免疫原的制备及免疫小鼠抗体效价检测

采用EDC一步法将His6多肽分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备两种人工结合抗原KLH-His6和BSA-His6。将制备的KLH-His6作为免疫原,皮下分5点注射免疫6只健康6周龄雌性Balb/c小鼠;首次免疫取KLH-His6(50μg/只)与氟氏完全佐剂(FCA)充分乳化,每只免疫200μL,以后每间隔两周,同法进行第2,3次免疫,用氟氏不完全佐剂(FIA)乳化。每次免疫8 d后尾部采血,以BSA-His6为包被抗原检测抗His6抗体。结果表明,成功制备了His6免疫原,并免疫了小鼠;间接ELISA检测不同时期小鼠抗体效价最高达到1∶8 000,免疫小鼠的抗体效价水平整体呈上升趋势,为His6单隆抗体的制备奠定了基础。     

非典型猪瘟的免疫酶组织化学方法诊断

2006年4月中旬,河南新乡辉县某养猪厂47头2月龄以下的猪陆续发病,到5月上旬死亡22头。发病猪的主要症状为发热,体温40.5~41.5℃,稽留不退,食欲下降,精神沉郁,弓背卧地,挤在一起。有的病猪呼吸困难,步态不稳。许多病猪表现顽固性腹泻,粪便颜色为黄白色至黄褐色,腹下及耳部皮肤有     

绵羊黏膜趋化因子CCL28基因的克隆、序列分析与原核表达

利用同源序列克隆原理设计1对克隆引物,从绵羊结肠黏膜组织提取mRNA,通过RT-PCR获得CCL28基因,将PCR产物克隆、测序,并进行序列分析;再根据克隆的序列设计1对表达引物,用PCR法从重组克隆载体中扩增出含BamHⅠ/XhoⅠ酶切位点的CCL28片段,双酶切后亚克隆至pGEX-4T-1载体,构建重组原核表达载体pGEX-CCL28,转化宿主菌E.coliBL21（DE3）,经IPTG诱导进行表达,SDS-PAGE鉴定。克隆的绵羊CCL28基因包含完整的开放阅读框,克隆片段长444 bp,ORF为387 bp,编码129个氨基酸,与人、小鼠、猪、牛该基因的同源性分别为76.4%、61.4%、84.3%和92.9%,推测的氨基酸序列与人、小鼠、猪、牛的同源性分别为76%、63%、84%和93%,表达的融合蛋白分子量约为39 ku,并以包涵体形式存在。为下一步研究绵羊CCL28的生物学功能奠定基础。