蛋鸡血清载脂蛋白AⅡ的分离纯化及其抗血清的制备

本文介绍了一种在普通实验室条件下,分离纯化蛋鸡血清载脂蛋白AⅡ及其抗血清制备的一种简便易行的方法。用磷钨酸镁沉淀分离出蛋鸡血清HDL。乙醇/丙酮(1∶1V/V)脱脂后经DEAE Sepharose CL-6B和Sephadex G-150柱层析。获得的apoAⅡ经15%的尿素-SDS-PAGE电泳显示为单一条带。分子量测算大约为8673u。本方法的优点是通过使用易行的磷钨酸镁沉淀法代替了超速离心的复杂过程。不需特殊仪器,缩短了制备时间且分离效果理想。     

兔抗鸡IgG-HRP酶标抗体的制备与检测

将经多种方法提纯的鸡IgG与从美国Sigma公司购买的纯鸡IgG产品进行对比研究证实 ,用辛酸沉淀 50 %SAS 离子交换层析方法可获得纯度很好的鸡IgG产物。运用该产物成功制备了兔抗鸡IgG抗血清以及抗鸡IgG重链抗血清。用辛酸沉淀 50 %SAS 35 %SAS盐析提纯的兔抗鸡IgG与用NaIO4 作用 1 6～ 2 0min的已氧化辣根过氧化物酶 (HRP)结合 6h,获得了优质可靠的兔抗鸡IgG HRP酶标抗体     

鸡血清载脂蛋白AⅡ的分离纯化及其含量的测定

本研究建立了一种在普通实验室条件下,分离纯化鸡血清载脂蛋白AⅡ(apo AⅡ)及其抗血清制备的方法。用磷钨酸镁沉淀法分离出鸡血清高密度脂蛋白(HDL),乙醇/丙酮(1∶1)脱脂后经DEAE Sepharose CL-6B和Sephadex G-150柱层析,获得的apo AⅡ经尿素-SDS-PAGE电泳显示为单一条带,相对分子质量为8 673。采用弗氏佐剂充分乳化的上述蛋白对新西兰雄兔进行多次多点皮内或皮下注射,分离兔抗鸡apo AⅡ血清后自行制备标准血清(1.112 g/L),采用免疫透射比浊法测得鸡血清apo AⅡ的生理含量为(1.295±0.21)g/L。此方法简便易行、准确可靠,有利于临床推广应用。     

一种新免疫吸附剂的应用试验

用正常兔血清作鸡胚尿囊液和羊水(简称胚液)固化载体制备的免疫吸附剂吸附的兔抗鸭瘟病毒血清与含鸭瘟病毒的鸡胚液进行琼脂凝胶沉淀试验,24小时后出现一条特征性的沉淀线,而对照鸡胚液均无此现象。经吸附的抗血清能有效地除去非特异抗体。现将试验初步结果报告如下。     

双峰驼初乳IgG的分离纯化及其向幼驼的转移

通过跟踪检测内蒙古阿拉善双峰母驼初乳IgG和幼驼血清IgG的动态含量，探讨了影响幼驼由母体获得被动免疫的因素。采用硫酸铵沉淀法2次沉淀乳清蛋白，再结合离子交换层析方法，从双峰驼初乳中分离纯化驼IgG；再用SDS—PAGE鉴定其纯度，测定其分子质量；用分离纯化的驼IgG免疫家兔，制备效价至少为1：32的兔抗驼IgG抗血清，采用单向免疫扩散法测定双峰驼初乳和幼驼血清IgG含量。揭示了初乳IgG向幼驼血液的转移模式，为生产中更好地饲养幼驼提供科学依据。     

抗BP5-KLH多克隆抗体的制备及鉴定

本研究设计将BP5与KLH偶联制备免成疫原.制定免疫程序,用此免疫原免疫家兔,收集兔抗BP5-KLH血清,并分离纯化动物血清,使之能大批量生产制备,用间接ELISA测定兔抗BP5-KLH多抗血清的抗体效价.用硫酸铵盐析法对多抗血清中的蛋白质进行粗提纯,并检测其含量,为进一步建立BP5-KLH的ELISA检测方法奠定实验基础.     

牛生长激素抗独特型抗体促生长作用机理研究--兔抗牛生长激素抗体纯化与鉴定

选用８只新西兰白兔来制备牛生长激素抗独特型抗血清，初次免疫以完全弗氏佐剂乳化抗原，加强免疫用不完全弗氏佐剂乳化，最后一次加强注射后１０天采血，采用酶联免疫吸附试验来测定抗血清滴度和血清阻断率：３只兔血清抗体滴度分别为１１２８０００，１５１２０００和１１２８０００，而血清阻断率在血清稀释率为１２０００到１２５６０００时处于２７．７％到９２．９％范围。随后用硫酸铵沉淀结合ＤＥＡＥ纤维素层析对血清抗体进行了纯化，醋酸纤维素薄膜电泳试验结果表明ＩｇＧ成分获得了纯化。     

牛生长激素抗独特型抗体促生长作用机理研究：———兔抗牛生长激素抗？…

选用８号新西兰白兔来制备牛生长激素抗独特型抗血清,初次免疫以完全弗氏佐剂乳化抗原,加强免疫用不完全旨氏佐剂乳化,最后一次加强注射后１０天采血,采用酶联免疫吸附试验来测定抗血清滴度和血清阻断率：３只兔血清抗体滴度分别为１：１２８０００,１：５１２０００和１：１２８０００,而血清阻断率在血清释稀率为１：２０００到１：２５６０００时处于２７．７％到９２．９％范围。随后用硫酸铵沉淀结合ＤＥＡＥ纤维素层析对     

鸡传染性贫血病毒VP2基因的原核表达及兔抗血清的制备

为了用大肠杆菌原核表达系统表达鸡传染性贫血病毒(CIAV)VP2基因片段,并制备其兔抗血清,试验以CIAV M9905株基因组DNA为模板,通过PCR扩增VP2基因,与p ET28a(+)载体连接后转化DH5α获得阳性重组子,将其转化E.coli BL21(DE3)菌,IPTG诱导表达出His-VP2重组蛋白,经Ni-NTA树脂纯化后免疫新西兰白兔制备兔抗血清,采用IFA和Western-blot检测该血清的特异性,ELISA测定其效价。结果表明:重组His-VP2融合蛋白的分子质量约为36 ku,以包涵体形式存在。制备的兔抗VP2血清效价在1∶6 400以上,可特异性结合真核表达的VP2蛋白,表明其反应原性较好。说明试验成功表达VP2蛋白,并制备出兔抗血清,可用于该蛋白与病毒其他蛋白之间的相互作用的进一步研究。     

鸡免疫球蛋白(GIgG)轻链的分离纯化及其抗血清的制备

经硫酸铵盐析、柱色谱分离得到纯化的鸡血清IgG。继用2-巯基乙醇还原、碘乙酰胶烷化拆开IgG的轻、重链,再经Sephadex G100凝胶过滤柱色谱分离得到IgG轻链。以IgG轻链免疫家兔制得兔抗鸡IgG轻链抗血清。     

鸡血浆纤维连接蛋白的提纯及酶联免疫吸附检测方法的建立

利用纤维连接蛋白（FN）与明胶特异结合的特点，用明胶亲和层析结合电泳裁胶的方法提纯鸡血浆FN并制备了兔抗鸡FN抗血清。纯化的FN经凝胶电泳鉴定为一条蛋白带与人FN在同一位置上，亚单位分子量约230KDa；经免疫鉴定，提纯鸡血浆FN与兔抗人FN抗体有交叉反应性。用兔抗鸡FN抗体包被捕捉抗原，建立了检测鸡血浆FN的双抗体酶联免疫吸附法（ELISA），此法具有操作简单、特异性强、灵敏度高的特点，适用于鸡血浆FN的检测。鸡血浆FN的提及其检测方法的建立，为FN的兽医领域的进一步研究和应用奠定了基础。     

制备抗免疫球蛋白的特异血清

从出生后第一天开始,不同年龄动物血清免疫球蛋白种类的数量关系是生物体在不同发育阶段或在各种病理状态下免疫生物学性状的指标。测定免疫球蛋白IgG、IgM、IgA,主要是应用同类特异性血清。本实验目的是改善分离纯净免疫球蛋白和制备相应抗血清的方法。为了分离单一种类的免疫球蛋白,采用下述的物理一化学方法:用硫酸钠沉淀血清中球蛋白;用分子量为6000的聚乙二醇(—6000)沉淀方法,初步分离出单一的免疫球蛋白;用免疫电泳法测定已分离的免疫球蛋白纯度,用免疫扩散试验鉴定所制备的抗血清特异性;用家兔同类特异性抗血清     

腺胃型IBV豫北株的分离鉴定及灭活疫苗的研制

1998年9月，豫北地区一些鸡场的鸡群发生了以腺胃肿胀为特征的传染病。采集腺胃组织进行病原分离，鸡胚传至8代以上时出现典型侏儒化和规律性死亡；鸡胚尿囊液经磷钨酸负染后电镜下观察，可以看到有囊膜和纤突，圆形，直径90-160nm的病毒粒子；未经处理的分离毒株不能凝集鸡红细胞，经卵磷脂酶C处理后能凝集鸡红细胞，此凝集能特异的被抗分离株超免疫血清所抑制。用分离株制备油佐剂灭活疫苗，保护率达100%。建议预防IB时用本地区分离株制成多价灭活疫苗免疫，效果会更好。     

鸡传染性贫血病毒VP3基因的原核表达及抗血清制备

为了研究鸡传染性贫血病毒(Chicken anemia virus,CIAV)VP3蛋白与病毒自身蛋白之间的相互作用,需对该蛋白进行原核表达制备相应兔源抗血清,试验通过提取CIAV M9905株基因组DNA,PCR扩增出VP3基因,构建重组质粒pET30a(+)-VP3,然后转化入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,进一步通过IPTG诱导表达后用Ni-NTA亲和柱纯化获得融合蛋白,经SDS-PAGE分析后对融合蛋白进行乳化,免疫新西兰兔制备抗血清,并对其进行ELISA效价测定、Western-blot及IFA检测。结果表明:SDS-PAGE分析证实获得高纯度的重组蛋白VP3,大小约为22 ku,且其在大肠杆菌中主要以包涵体的形式存在;ELISA法检测制备的兔源抗VP3血清效价在1∶6 400以上;经Western-blot及IFA检测证实,VP3兔源血清可特异性结合Vero细胞表达的VP3蛋白。说明试验成功表达出CIAV VP3蛋白,制备的兔抗血清具有较好的特异性。     

鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的融合表达及兔抗血清的制备

以鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)Gt株基因组RNA为模板,通过RT-PCR扩增VP2基因,经EcoR Ⅰ/Sal Ⅰ酶双酶切处理后与经相同酶切处理的pET30a原核表达载体连接,将酶切、PCR及序列鉴定正确的阳性重组子转化E. coli DE3菌,经IPTG诱导,表达的VP2蛋白通过Ni-NTA树脂纯化后,免疫新西兰白兔,制备兔抗血清,并对其进行间接ELISA、IFA和Western blot分析.SDS-PAGE分析表明,在IVFG诱导下成功表达了约为50 kDa的His-VP2融合蛋白;间接ELISA检测制备的兔抗血清效价在1:25 600以上;IFA及Western-blot分析结果表明,其可特异性结合真核表达的VP2蛋白以及IBDV全病毒.研究结果提示,免抗VP2血清可用于VP2蛋白及病毒的检测,为进一步研究IBDV分子生物学功能提供了物质基础.     

家蚕微粒子的荧光抗体检验技术获初步成效

1980年华南农学院蚕桑系对家蚕微粒子胞子用荧光抗体技术检验获得初步成效。分别用提纯的家蚕微粒子胞子、微粒子胞子匀浆及感染微粒子病的母蛾血液作抗原,注射于家兔以制备抗血清。在琼脂糖凝胶对流电泳时与感染微粒子病的蚕血、蛹血及蛾血均能形成沉淀带。说明兔抗微粒子胞子的血清对染病的血液可能具有共同抗原性。将兔抗血清经盐析、透析后再与荧光染料 FITC 结合,通过萄聚糖 G—50凝胶过滤     

鲤鱼IgM的分离纯化及其抗血清的制备

为了分离纯化鲤鱼血清免疫球蛋白M(IgM),并制备该蛋白的多克隆抗体,试验用rProtein A FF亲和层析和Superdex200 Increase 10/300GL分子筛的方法分离纯化鲤鱼血清免疫球蛋白M(IgM),并通过SDS-PAGE对纯化蛋白的部分特性进行分析;以纯化后的蛋白为抗原,免疫新西兰大耳白兔制备该蛋白的多抗血清,用ELISA法检测抗血清效价。结果表明:从鲤鱼血清中分离纯化出鲤鱼IgM蛋白,纯化后纯度可达99.53%;重链和轻链的分子质量分别为81.3 ku、26.4 ku;兔抗鲤鱼多抗效价高达1∶640 000以上。说明试验所采用的rProtein A FF亲和层析法可提取到高纯度的鲤鱼IgM,适合在实验室纯化鱼类IgM。     

应用辛酸法-DEAE纤维素吸附过滤法提纯的IgG制备RIA用二抗

用辛酸沉淀法结合DEAE纤维素吸附过滤法,从兔、绵羊、驴和人血清中提取IgG,经PAGE和ID分析,其纯度和免疫活性较好.用提纯的兔IgG和人IgG制备的二抗,抗体效价高(驴抗兔IgG高达1024倍,羊抗人IgG达256倍),特异性好,抗体亲和力强,可供作RIA免疫分离沉淀试剂.     

鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离鉴定及疫苗研制

鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离鉴定及疫苗研制杨润德高轩李潭清（河北农业大学动物科技学院，保定０７１０００）路广济（河北省畜牧兽医站）材料与方法一、材料１．标准毒株Ｍ４１株，购自中国兽药监察所。２．抗血清兔抗Ｍ４１阳性血清及ＳＰＦ鸡血清由江苏农学院提供...     

鸡A型流感病毒的分离及初步鉴定

从发病率56％而死亡率15％的罗曼父母代蛋种鸡群中,分离到4株A型流感病毒。这些分离毒株可在鸡胚中传代,经尿囊腔途径接种10日龄鸡胚,可80～100％致死鸡胚,能凝集鸡的红细胞,且不被新城疫阳性血清所抑制。用这些分离毒株制备成的琼脂扩散抗原与禽流感阳性血清在琼脂扩散试验中出现明显的白色沉淀线。发病鸡康复后采血制备的血清能与禽流感琼扩抗原在琼脂扩散试验中出现明显的白色沉淀线。分离毒SX_(9401)株具有良好的免疫原性。根据以上实验,所分离到的病毒为鸡A型流感病毒,其血清亚型有待于进一步鉴定。本研究从病原学角度证实禽流感在四川省的存在。