检测鸡血清多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条的研制与应用

为建立快速检测鸡血清多杀性巴氏杆菌(Pm)抗体的胶体金免疫层析技术，本研究采用胶体金标记兔抗鸡Ig G，制备金标垫，将重组脂蛋白B(rPlpB)和羊抗兔Ig G抗体分别包被于硝酸纤维膜作为检测线和质控线，优化条件后组装成胶体金试纸条(CGTS)。结果显示，胶体金标记兔抗鸡Ig G的最佳p H为8.5，最佳标记浓度为7μg/mL;r PlpB和羊抗兔Ig G抗体的最佳使用浓度均为0.2 mg/m L。利用该方法检测SPF鸡血清，鸡Pm、鸡大肠杆菌、鸡沙门菌、鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒阳性血清，结果显示仅鸡Pm阳性血清检测为阳性，其他均为阴性，表明CGTS的特异性强。将琼脂扩散(AGP)效价为1∶16的鸡Pm阳性血清2倍倍比稀释后以CGTS检测，结果显示1∶320倍稀释仍检测为阳性，表明CGTS的敏感性较高。检测鸡Pm阳性血清和SPF鸡血清时，同批次不同试纸条之间、不同批次之间均无差异，表明该方法的重复性好。对89份鸡血清采用CGTS和间接ELISA检测，结果显示，二者阳性符合率为91.5%，阴性符合率为100%，总符合率为94.4%。禽霍乱灭活疫苗免疫后14 d,66.7%的鸡采...     

商品维生素A制剂在鸡体内生物利用规律评估

试验旨在评估商品维生素A制剂在鸡体内的生物学利用情况。试验1:鸡经饥饿6 d后其血清维生素A下降到较低水平(229.2 ng/m L),此后鸡正常采食含维生素A(15 000 u/kg)的日粮,观察鸡体内血清维生素A含量的变化情况,进而确定维A在鸡体内的生物利用规律;试验2:选用不同的维生素A制剂产品,比较其生物利用率的差异。具体试验方案为:选用蛋鸡75只,随机分为5组,对照组饲喂基础日粮,4个处理组日粮中分别加入不同维生素A产品(15 000 u/kg),饲喂7 d后测定鸡血清中的维生素A含量。试验1结果表明:当鸡体内极度缺乏维生素A时,添加智维A能快速补充鸡体内维生素A需要,并在约第7 d时使鸡体内维生素A水平回到正常;试验2结果表明:智维A与其他市场产品的生物利用率无显著差异(P0.05),在本试验条件下,鸡正常采食两个批次含智维A的日粮7 d后,其体内血清维生素A水平分别达556.3 ng/m L和604.4ng/m L。     

黄芪粉与维生素E对染镉鸡血清细胞因子分泌影响的研究

旨在探讨黄芪粉和维生素E对镉中毒鸡血清细胞因子的影响.在镉中毒鸡基础日粮中添加15 g/kg黄芪粉和80 mg/kg维生素E,每组分别饲喂10、20和30 d后翅静脉采血,常规分离血清,采用酶联免疫吸附法分别检测白细胞介素-1 β(IL-13)、白细胞介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.结果表明:黄芪粉和维生素E可以使染镉后鸡血清中IL-1β和IL-2含量升高(P＜0.05),TNF-α含量降低(P＜0.05).说明黄芪粉和维生素E联合应用能有效缓解镉对鸡细胞因子分泌的影响.     

建立鸡血清中维生素A醇的检测方法及评估维生素A的生物利用率

本试验旨在评估不同维生素A制剂在鸡体内的生物学利用情况,利用高效液相色谱建立鸡血清中维生素A醇的检测方法。在此基础之上,分别设计了两个不同的试验。试验一:鸡经饥饿6天后其血清维生素A下降到较低水平(229.2ng/m L),此后鸡正常采食含维生素A水平为15000 IU/kg的日粮,观察鸡体内血清维生素A含量的变化,确定维生素A在鸡体内的生物利用规律;试验二:选用不同的维生素A制剂产品(产品Ⅰ,产品Ⅱ,产品Ⅲ),比较市场不同产品的生物利用率差异。具体试验方案为:选用蛋鸡60只,随机分为4组,对照组饲喂基础日粮,3个处理组日粮中分别加入不同维生素A产品(15000 IU/kg),饲喂7天后测定鸡血清中的维生素A含量。试验一结果表明:当鸡体内极度缺乏维生素A时,添加维生素A能快速补充鸡体内维生素A需要,并在约第7天时鸡体内维生素A水平恢复到正常水平;试验二结果表明:不同维生素A制剂产品的生物利用率无显著差异(P0.05),在本试验条件下,鸡正常采食含产品Ⅰ的日粮7天后,其体内血清维生素A水平达604.4 ng/m L。     

蓝马鸡和藏马鸡血清淀粉酶和酯酶同工酶酶谱

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法对19只蓝马鸡和15只藏马鸡血清淀粉酶和血清酯酶同工酶酶谱进行了研究。结果发现:(1)蓝马鸡和藏马鸡血清淀粉酶有AMY1,AMY2,AMY3三种同工酶,其中AMY1和AMY2存在多态性;(2)两种马鸡的血清酯酶均存在ES1,ES2和ES3三种同工酶;蓝马鸡的ES1同工酶存在显现酶活性的ES1A(36.8%)和不显现酶活性的ES10(63.2%)2种表型,而藏马鸡全部为ES10型。     

鸡血清载脂蛋白AⅠ的分离纯化及其抗血清的制备

用磷钨酸沉淀制备鸡血清HDL，乙醇-丙酮混合液(体积比为1：1)脱脂后采用DEAE Sepharose CL-6B离子交换柱层析法分离鸡血清apoAⅠ，分离获得的apoAⅠ在尿素-SDS-PAGE电泳中呈现单一条带，其分子质量约为27788u。将提取的apoAⅠ对新西兰雄兔进行多次免疫，制备得兔抗鸡apoAⅠ抗血清，其效价为1：16。在免疫电泳和双向免疫扩散试验中抗血清均只呈现1条清晰沉淀带。试验结果表明，用磷钨酸沉淀法制备兔抗鸡apoAⅠ抗血清，过程简便，时间短且分离效果好。     

张家口坝上地区鸡兔弓形虫病流行病学调查

为摸清张家口坝上地区鸡、兔弓形虫病的感染情况,采用间接血凝试验(IHA)对张家口坝上地区散养鸡、笼养鸡、家兔、兔场兔的745份血清进行弓形虫血清学检测。结果表明,散养鸡阳性率6.6%(24/364);笼养鸡阳性率0%(0/120);家兔阳性率12.5%(22/175);兔场兔阳性率2.3%(2/86)。其中阳性散养鸡血清抗体滴度分布在1:256有25%(6/24),阳性家兔血清抗体滴度分布在1:256有9.1%(2/22)。     

评估不同维生素A制剂在鸡上的生物利用率

本试验旨在评估不同维生素A制剂在鸡体内的生物学利用情况。利用高效液相色谱建立鸡血清中维生素A醇的检测方法。在此基础之上,分别设计了两个不同的试验。试验一:鸡经饥饿6d后其血清维生素A下降到较低水平(229.2ng/m L),此后鸡正常采食含维生素A水平为15,000IU/kg的日粮,观察鸡体内血清维生素A含量的变化,确定维生素A在鸡体内的生物利用规律;试验二:选用不同的维生素A制剂产品,比较市场不同产品的生物利用率差异。具体试验方案为:选用蛋鸡60只,随机分为4组,对照组饲喂基础日粮,3个处理组日粮中分别加入不同维生素A产品(15,000IU/kg),饲喂7d后测定鸡血清中的维生素A含量。试验一结果表明:当鸡体内极度缺乏维生素A时,添加智维A能快速补充鸡体内维生素A需要,并在约第7d时使鸡体内维生素A水平回到正常;试验二结果表明:不同维生素A制剂产品的生物利用率无显著差异(P0.05),在本试验条件下,鸡正常采食含"智维A"的日粮7d后,其体内血清维生素A水平达604.4ng/mL。     

蛋鸡血清载脂蛋白AⅡ的分离纯化及其抗血清的制备

本文介绍了一种在普通实验室条件下,分离纯化蛋鸡血清载脂蛋白AⅡ及其抗血清制备的一种简便易行的方法。用磷钨酸镁沉淀分离出蛋鸡血清HDL。乙醇/丙酮(1∶1V/V)脱脂后经DEAE Sepharose CL-6B和Sephadex G-150柱层析。获得的apoAⅡ经15%的尿素-SDS-PAGE电泳显示为单一条带。分子量测算大约为8673u。本方法的优点是通过使用易行的磷钨酸镁沉淀法代替了超速离心的复杂过程。不需特殊仪器,缩短了制备时间且分离效果理想。     

鼻气管鸟杆菌间接ELISA检测方法的建立及应用

提取A型鼻气管鸟杆菌(ORT)外膜蛋白,经纯化后包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、兔抗鸡酶标二抗稀释倍数,建立了检测ORT抗体的间接ELISA方法.经方阵滴定确定最佳抗原包被质量浓度为11.85 mg/L,血清样品稀释倍数为1∶20,兔抗鸡IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释倍数为1∶1 000,抗原抗体最佳结合时间为1 h,血清与二抗最适反应时间为45 min.试验结果确定的判定标准为:样品D490 nm≥0.639判定为阳性,D490 nm≤0.350判定为阴性,介于两者之间的为可疑.试验证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,将205份疑似ORT的鸡血清用本方法进行检测,其阳性检出率为11.7%(24/205).     

马尾藻多糖纳米脂质体对鸡生长发育及免疫功能的影响

为评价马尾藻多糖纳米脂质体对鸡生长发育及免疫功能的影响,在饲料中添加不同剂量的SPL(0.25、0.5、1.0 g/kg),饲养49 d后,测定了鸡体重、血液生化指标及血液中免疫球蛋白G(IgG)含量;饲料中添加0.25 g/kg SPL能降低料肉比,提高饲料利用率;不同剂量SPL能显著提高鸡血清中血糖含量,降低总蛋白含量(P<0.05);1.0、0.5 g/kg SPL能显著提高35日龄、49日龄鸡血清中总胆固醇含量(P<0.05);0.5 g/kg SPL能显著降低35、49日龄鸡血清中天门冬氨酸转氨酶含量(P<0.05)。将马尾藻多糖制备成纳米脂质体替代抗生素作为新型的饲料添加剂能促进鸡的生长发育,减少对机体的副作用,安全性好,并能增强马尾藻多糖的免疫活性。     

鸡传染性支气管炎病毒血凝抑制试验抗原的研制

为应用血凝抑制(HI)试验检验鸡传染性支气管炎疫苗免疫效力(血清、卵黄抗体水平),建立了鸡传染性支气管炎病毒HI试验抗原的制备方法。该方法是通过选取抗原谱最广的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株,经SPF鸡胚增殖培养36h后无菌收取鸡胚尿囊液,4℃、12 000r/min离心10min,上清用聚乙二醇(PEG)20000浓缩100倍;兔源A型产气荚膜梭菌中国标准株(C57-1株)37℃增殖培养18h,4℃、12 000r/min离心10min取上清,经PEG 20000透析袋浓缩5倍后通过0.20μm滤膜过滤除菌,然后将IBV液和A型产气荚膜梭菌菌液(含α毒素)二者按一定比例混合后经37℃恒温振荡感作2h,4℃经48h后制成。经大量试验表明,制备的IBV HI试验抗原效价高、稳定性好,可替代进口抗原应用于鸡群IBV疫苗免疫后血清抗体及卵黄抗体的HI效价检测。     

张家口坝下地区鸡弓形虫感染情况调查

为了解张家口坝下地区鸡弓形虫的感染情况,采用间接凝集试验(IHAT)对张家口坝下地区的345份散养鸡血清和235份笼养鸡血清进行弓形虫的血清学检测.结果表明,散养鸡阳性率为11.01%(38/345);笼养鸡阳性率为2.13%(5/235),其中,阳性鸡血清杭体滴度分布在1:64的占74.42%(32/43),1:256的占25.58%(11/43).     

维生素 A对罗斯308×海兰褐肉杂鸡生长性能、钙磷代谢和免疫功能的影响

本试验研究了维生素A对肉杂鸡生长性能、钙磷代谢和免疫功能的影响,旨在为肉杂鸡饲粮中合理添加维生素A提供依据。选取1日龄罗斯308×海兰褐肉杂鸡720只,随机分为6组(每组6个重复,每个重复20只),分别饲喂在玉米-豆粕型基础饲粮中添加1 000、2 000、6 000、10 000、14 000和18 000 IU/kg维生素A的饲粮,试验期42 d。结果表明:1)18 000 IU/kg维生素A添加组肉杂鸡21日龄体重显著高于1 000、2 000和6 000 IU/kg维生素A添加组(P0.05),与10 000和14 000 IU/kg维生素A添加组差异不显著(P0.05),并且14和21日龄肉杂鸡体重及1～21日龄耗料量与饲粮维生素A添加量呈显著正相关关系(P0.05)。各组肉杂鸡22～42日龄耗料量和料重比、42日龄体重和1～42日龄存活率无显著差异(P0.05)。2) 21和42日龄肉杂鸡肝脏、脾脏和法氏囊指数组间无显著差异(P0.05)。6 000 IU/kg维生素A添加组肉杂鸡21和42日龄血清新城疫抗体效价显著高于1 000和2 000 IU/kg维生素A添加组(P0.05),并且血清新城疫抗体与饲粮维生素A添加量有显著二次曲线回归关系(P0.05),维生素A添加量为12 000 IU/kg时效价最高。肉杂鸡血清禽流感H9抗体效价随饲粮维生素A添加量的增加有增加趋势(0.05≤P0.10),血清法氏囊病毒抗体效价则没有显著变化(P0.05)。3)各组肉杂鸡21和42日龄血清钙、磷含量、血清碱性磷酸酶活性和胫骨灰分含量差异均不显著(P0.05)。由此可见,提高饲粮维生素A水平一定程度上可提高肉杂鸡血清新城疫和禽流感H9抗体效价以及21日龄生长性能,但对肉杂鸡骨骼代谢和42日龄生长性能没有显著影响。综合考虑各项指标,认为1～21日龄和22～42日龄玉米-豆粕型基础饲粮中分别添加6 000和1 000 IU/kg维生素A可满足肉杂鸡获得良好的生长性能、免疫状况和骨骼发育的需要。     

鸡传染性支气管炎HA和HI试验方法的研究

用传染性支气管炎(IB)红细胞凝集抑制(HI)试验对SPF鸡血清、健康鸡血清、用SPF鸡制备的IBV标准阳性血清、感染鸡血清和自然发病鸡血清及野外样品测定结果证明,本法操作简便、特异性强、敏感性高、需时短、结果易判定。IBV HI抗体于感染后3周开始出现,然后持续上升,二个月后仍呈上升趋势.本法可定性或定量检测鸡IBV抗体,特别适用于现地诊断和免疫监测。     

抗鸡IgG单克隆抗体的研究

利用小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞系与纯化鸡IgG免疫的BALB/C小鼠脾细胞融合,成功地建立了5株能持续分泌抗鸡IgG单克隆抗体(McAbs)的杂交瘤细胞株。选择产生抗体效价高、生长快的C_(44)株,扩大培养后注射于小鼠制备腹水,经硫酸铵盐析粗提后,用HRP标记,制备出McAbs酶结合物。将制备的McAbs酶结合物和多克隆抗体(PcAbs)酶结合物,采用间接ELISA,对35份鸡血清中鸡新城疫病毒(NDV)抗体以及19份鸡血清中鸡嗜血杆菌(HG)抗体进行检测,McAbs和PcAbs两者的相关系数分别为0.928和0.921,证明制备的抗鸡IgG McAbs具有特异性强、效价高的特点.     

基于禽流感NS1蛋白ELISA诊断方法的建立及临床应用

本研究利用体外表达获得的H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白包被ELISA板,建立鉴别诊断方法,对111份健康非免疫鸡血清及456份待检禽流感灭活疫苗免疫鸡血清进行检测发现,检测健康非免疫鸡血清的阴性率为100%,检测禽流感灭活疫苗免疫鸡血清的阴性率达到94%（429/456）;检测62份禽流感病毒感染鸡血清,有55份呈阳性反应,敏感性为88.7%（55/62）;进行NS1抗体消长规律试验,显示攻毒后第7天开始部分鸡血清NS1抗体水平上升,至14～21 d抗体水平达最高峰。     

蓝马鸡和藏马鸡血清淀粉酶和酯酶同工酶酶谱

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法对19只蓝马鸡和15只藏马鸡血清淀粉酶和血清酯酶同工酶酶谱进行了研究。结果发现：（1）蓝马鸡和藏马鸡血清淀粉酶有AMY1，AMY2，AMY3三种同工酶，其中AMY1和AMY2存在多态性；（2）两种马鸡的血清酯酶均存在ES1，ES2和ES3三种同3-酶；蓝马鸡的ES1同工酶存在显现酶活性的ES1A（36．8％）和不显现活性的ES10（63．2％）2种表型，而藏马鸡全部为ES10型。     

兔抗鸡传染性法氏囊病抗体的制备和纯化

采用自然发病的传染性法氏囊病（IBD）病鸡的法氏囊组织制作鸡IBD油佐剂灭活苗,用鸡IBD油佐剂灭活苗多点皮下注射健康成年兔,获得高免兔抗鸡IBDV血清,经过盐析、透析的方法制备高纯度的兔抗鸡IBDV高免IgG。兔血清中抗体效价为1∶128,蛋白质含量为40.3~48.8 mg/ml;纯化后效价为1∶32,蛋白质含量为18.0~23.0 mg/ml。用此试剂对安徽部分地区疑似鸡IBD的病例进行了诊断,取得良好效果。该试剂为临床琼脂扩散试验(AGP)检测IBDV抗原提供高效价的抗体,并为临床免疫组化法检测IBDV提供可靠的抗体。     

蚯蚓发酵液对安义瓦灰鸡生长性能、体尺指标、血清抗氧化及生化指标的影响

试验旨在研究蚯蚓发酵液对安义瓦灰鸡生长性能、体尺指标、血清抗氧化及生化指标的影响。选取120只60日龄安义瓦灰鸡,随机分为4组(每组5个重复,每个重复6只)。对照组饲喂基础日粮(Ⅰ组),试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别饲喂在基础日粮中添加蚯蚓发酵液的试验日粮(按0.01、0.02、0.03 mL/g添加蚯蚓发酵液)。试验期28 d。结果表明:(1)蚯蚓发酵液对安义瓦灰鸡的生长性能及体尺指标无显著影响(P>0.05)。(2)与Ⅰ组相比,试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组显著降低了丙二醛(MDA)的含量(P<0.05),对过氧化氢酶(CAT)的含量无显著影响(P>0.05)。(3)与Ⅰ组相比,试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组显著提高血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、总胆固醇(T-CHO)的含量(P<0.05);试验Ⅱ、Ⅲ组显著提高白球比(A/G)(P<0.05)。综上,蚯蚓发酵液可改善鸡的血清抗氧化及生化指标,以0.02 mL/g蚯蚓发酵液添加量的效果最佳。